一、Induction of cyclooxygenase-2 by insulin in cultured rat vascular smooth muscle cells（论文文献综述）
汪戎锦[1]（2021）在《基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究》文中提出缺血性脑卒中作为全球性的公共健康问题,危害着全世界人类的健康,并以其高发病率和高死亡率,引起了科学家们的广泛关注。缺血性脑卒中发生的主要原因为凝结的血栓或栓子阻塞在脑动脉中使大脑供血受限从而引起氧气和营养的供应不足。刺五加叶作为一种可再生资源,因其化学成分以及药效作用与刺五加根相似,被广泛用于脑血管疾病、缺血性心脏病等疾病的治疗。本实验室在前期的研究工作中筛选并制备了刺五加叶的主要活性组分,并采用药效学研究证明了刺五加叶具有抗氧化、抑制细胞损伤以及缺血性脑卒中的保护作用。然而,刺五加叶的化学成分复杂,在体内作用于多个靶点,致使其治疗缺血性脑卒中的整体作用机制研究尚不够深入,目前缺乏系统研究,在一定程度上限制了刺五加叶的开发及应用。代谢组学作为一种系统生物学研究方法,能够对内源性小分子的整体变化进行系统分析,逐渐成为揭示病机复杂疾病的发病机理,和多成分、多靶点药物作用机制的一种强有力工具。因此,本研究围绕脂质异常、神经损伤以及菌群失调等缺血性脑卒中的关键病理环节,采用基于质谱技术的多样本（血清、粪便、尿液、脑组织）代谢组学的研究方法,对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行了深入研究,并阐明其科学内涵。主要研究内容包括以下几个方面:1.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究首先对刺五加叶的主要活性组分进行基于UPLC方法的成分分析。结果表明,刺五加叶的主要活性组分含有有机酸类化合物、黄酮类化合物和糖苷。其次,建立大鼠缺血性脑卒中疾病模型,并给予刺五加叶治疗四周。由于脂质异常、神经损伤、氧化应激和炎症反应是缺血性脑卒中发作的四个主要方面,本文围绕以上四个方面展开了研究。首先,采用基于UPLC-Q-TOF/MS的脂质组学方法,研究缺血性脑卒中发生后大鼠血清脂质的代谢紊乱,以及刺五加叶的调节作用。利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶给药四周后缺血性脑卒中大鼠血清样本的脂质代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行包括多元统计学分析、潜在脂质标记物鉴定以及通路分析在内的数据处理。共鉴定出27种脂质组学生物标记物,包括PC,PE,SM和TG类脂质,分布在各种脂质代谢途径中,包括甘油磷脂、亚油酸、α-亚麻酸、甘油脂、鞘脂和花生四烯酸代谢途径。结果表明,刺五加叶能够调节缺血性脑卒中发生发展过程中出现的脂质代谢紊乱。其次,针对缺血性脑卒中发生时的神经损伤过程,采用UPLC-TQ/MS对大鼠脑组织及血清中10种神经递质进行了定量研究。结果表明,缺血性脑卒中能够导致谷氨酸（Glu）,天冬氨酸（Asp）等兴奋性氨基酸的过度释放,产生神经毒性,还能够增加γ-氨基丁酸（GABA）、五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）以及牛磺酸（Tau）的含量,并降低抑制性神经递质甘氨酸（Gly）以及神经炎症调节剂乙酰胆碱（Ach）的含量。而给予刺五加叶治疗后,能够使以上神经递质在脑组织和血清中的水平均向正常水平调节,说明其能够通过调节缺血性脑卒中大鼠的神经递质含量发挥保护中枢神经系统的作用。最后,通过MDA和SOD的定量分析,检测缺血性脑卒中后氧化应激程度,通过TNF-α,IL-6和IL-10的定量分析,检测炎症反应程度。结果表明,刺五加叶可以在一定程度上减轻机体的氧化应激和炎症损伤,从而减轻缺血性脑卒中对机体的损伤。从调节脂质代谢紊乱、神经损伤、氧化应激反应以及炎症反应等方面揭示了刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。2.刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响微生物-肠-脑轴双向通讯系统与缺血性脑卒中的发生及预后相互关联,这种关联作用近年来逐渐引起科学家的广泛关注。本文采用基于UPLC-Q-TOF/MS的粪便非靶向代谢组学方法,结合基于UPLC-TQ/MS的粪便胆汁酸靶向代谢组学方法,以及16S r RNA粪便菌群测序,研究了刺五加叶对缺血性脑卒中模型大鼠微生物-肠-脑轴的平衡作用。首先,利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶治疗四周后缺血性脑卒中大鼠粪便样本的代谢轮廓,结合多元统计学分析筛选具有显着差异的潜在生物标记物,并进行通路分析,共鉴定出40个潜在的差异性生物标记物,主要涉及花生四烯酸代谢通路、不饱和脂肪酸的生物合成途径、胆汁酸的生物合成途径、鞘脂代谢通路等。以上生物标记物的含量在缺血性脑卒中发生后具有显着的变化,而刺五加叶可以调节其含量以恢复正常状态。其次,基于UPLC-TQ/MS的靶向代谢组学方法对13种胆汁酸进行了定量分析。结果显示,缺血性脑卒中发生时,大鼠粪便胆汁酸发生代谢紊乱,刺五加叶能够调节多种胆汁酸的含量,使其更加趋近于正常水平。最后,16S r RNA菌群测序结果表明,缺血性脑卒中可导致大鼠肠道内病原体富集,益生菌水平大幅降低,而刺五加叶能够使缺血性脑卒中大鼠体内病原体含量降低,同时增加益生菌水平。上述结果揭示了刺五加叶具有对缺血性脑卒中大鼠微生物-肠-脑轴的调节作用,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制研究奠定基础。3.刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证选择能够被刺五加叶调节的益生菌给药缺血性脑卒中大鼠,验证给药刺五加叶后,益生菌水平的升高是发挥其治疗效果的重要因素之一。首先,培养罗伊氏乳酸杆菌以及丁酸梭菌并制备菌液,分别给予缺血性脑卒中大鼠以上两种菌液。经四周给药后,检测大鼠粪便的菌群组成。结果表明,与模型组比较,益生菌给药后的缺血性脑卒中大鼠粪便中菌群组成与含量产生较大变化,并与对照组大鼠粪便菌群组成更为相似。其次,采用基于UPLC-TQ/MS的定量方法检测缺血性脑卒中大鼠经益生菌给药后,脑组织中神经递质的含量变化。结果表明,给予两种益生菌后,具有神经毒性的神经递质含量降低,而具有神经调节作用的神经递质含量显着升高,更加趋近于健康大鼠。最后,通过ELISA法检测大鼠血清和脑组织中多种炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量和脑组织中MDA、SOD、COX-2、MAO的含量。结果表明,当缺血性脑卒中发生时,大鼠体内IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、COX-2和MAO含量显着升高,而IL-10和SOD含量显着降低。给予两种益生菌后,缺血性脑卒中大鼠体内以上指标的含量均能够被调节至正常水平,推测两种益生菌均能够通过减轻炎症及氧化应激损伤,对机体产生一定的保护作用。本研究验证了刺五加叶能够通过影响微生物-肠-脑轴的代谢,增加体内益生菌丰度,调节卒中引起的神经损伤、炎症反应以及氧化应激损伤,从而起到对机体的保护作用。4.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究尿液样本能够准确、灵敏地反映机体的代谢变化,为代谢组学研究中最重要的生物样本。采用基于UPLC-Q-TOF/MS的非靶向尿液代谢组学方法对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行研究并验证。采用UPLC-Q-TOF/MS采集大鼠尿液样本的代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行数据处理,筛选并鉴定潜在生物标记物,构建基因-酶-生物标记物代谢网络。本研究共筛选出42种在缺血性脑卒中疾病进程中具有显着变化的潜在生物标记物,经刺五加叶治疗后,38种生物标记物的含量变化能够被显着调节,涉及体内牛磺酸和次牛磺酸代谢通路、花生四烯酸代谢通路、半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路、类固醇激素生物合成途径、色氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路和嘧啶代谢途径等多种代谢途径的调节作用。最后,选择3种与以上通路相关的关键酶COX-2,NOS和MAO作为刺五加叶治疗的靶点酶,进行定量验证。结果表明,模型大鼠经刺五加叶治疗后血清和脑组织中三种酶的含量与假手术组大鼠相似,证明了刺五加叶可以通过调节以上三种酶的含量发挥刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用。本实验结果有助于进一步了解缺血性脑卒中的发病机制,并为刺五加叶的潜在治疗机制研究提供科学依据。5.基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究高效化学同位素标记（CIL）衍生化结合液质联用（LC-MS）的代谢组学方法是使用靶向特定官能团的试剂标记生物样本,使所有具有相同官能团的代谢物生成相应的衍生代谢物,在提高总体代谢组学覆盖率的同时,将同位素引入标记代谢物中,使重同位素试剂衍生的代谢产物作为轻同位素试剂衍生代谢物产物的内标,从而提高代谢产物的定性及定量精度。本研究采用基于CIL LC-MS的刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中的尿液代谢组学方法,分别对胺/酚类亚代谢组和羧酸类亚代谢组进行分析研究。结果表明,刺五加叶能够通过体内多种通路调节缺血性脑卒中发生后的代谢紊乱,与传统尿液代谢组学研究结果相比,CIL LC-MS法筛选出了更多潜在生物标记物,并覆盖更多体内代谢通路,得到了覆盖率更广、定量更精准的代谢组学结果。同时,在每条通路中匹配到更多的具有显着差异的代谢产物,明确通路中上游化合物及下游产物的显着变化及机制,使针对各通路的研究更加全面。最终,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行系统阐述。进而为刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供更加全面的科学依据。综上所述,本论文采用基于大鼠血清、粪便、尿液以及脑组织多种生物样本的代谢组学方法,进行刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中作用机制的系统研究。将尿液和粪便的非靶向代谢组学研究,与血清脂质、脑组织神经递质以及粪便胆汁酸的靶向代谢组学研究相结合,明确刺五加叶对缺血性脑卒中大鼠体内多种代谢通路的调节作用,对脂质紊乱的调节作用,以及对神经系统的保护作用。其次,通过对大鼠粪便的菌群分析和验证实验,阐述刺五加叶可能通过调节微生物-肠-脑轴双向通讯系统发挥缺血性脑卒中的治疗作用,推测刺五加叶增加肠道益生菌含量是其发挥缺血性脑卒中治疗作用的关键因素之一。并采用基于高效同位素标记结合LC-MS的代谢组学方法,对体内胺/酚类亚代谢组及羧酸类亚代谢组进行全面分析,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度系统阐述刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。本研究结合先进的分析技术手段,探讨中药的作用机制,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供理论依据,同时也为中药作用机制的系统研究提供了新的方法路线。
王耀振[2]（2021）在《基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制》文中提出二型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）是全球范围内的主要健康问题,其对血管可产生严重的危害作用,即糖尿病血管病变,这也是导致T2DM患者致残致死的主要原因。胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）作为T2DM的典型特点,不仅是促进其发生发展的关键因素,还是代谢综合征导致内皮功能障碍的重要原因。内皮是血管的第一道屏障,承担多种自分泌、旁分泌和内分泌功能,而内皮功能障碍是血管功能障碍的早期致病事件,其与IR相互促进,共同在糖尿病心血管并发症中发挥了重要作用。肾素血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）是一种具有内分泌特点的肽能系统,主要负责维持血压和水电解质的平衡,其中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）/血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）/血管紧张素1型受体（angiotensin type 1 receptor,AT1R）轴在糖尿病及其并发症的发生发展中起到了重要作用,该轴的关键效应分子-Ang II,参与多种病理生理过程,包括氧化应激、炎症反应、纤维化、肥大和内皮功能障碍等。血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）/血管紧张素1-7[angiotensin-（1-7）,Ang-（1-7）]/Mas轴拮抗了ACE/Ang II/AT1R轴的功能,其保护作用不仅依赖于对Ang II的降解,还依赖于生成Ang-（1-7）作用于Mas所产生的抗氧化、抗炎、抗肥大、血管舒张及改善内皮功能障碍等作用。尽管有研究表明ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴可改善代谢IR,并且Ang-（1-7）可改善db/db小鼠内皮功能障碍和Ang II诱导的内皮细胞IR,但ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴与内皮IR的相关研究仍鲜有报道,因此进一步研究其与内皮细胞IR的关系有助于深入理解IR的分子机制,从而以新的角度防治糖尿病心血管并发症。人参皂苷Rc是原人参二醇组皂苷的单体成分并且是人参皂苷的主要成分之一,有关人参皂苷Rc药理活性的研究相对较少,仅有少数研究报道了其具有强大的抗炎和抗氧化活性,而人参皂苷Rc对糖尿病心血管并发症是否具有潜在的保护作用尚不清楚。其同分异构体人参皂苷Rb2与人参皂苷Rb3已被证实具有显着的心血管保护作用,并且还有研究表明了人参皂苷与RAS具有密切关系。鉴于炎症和氧化应激是导致IR的关键机制以及ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴在心血管疾病中的重要保护作用,我们推测人参皂苷Rc可能通过激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR与内皮功能障碍,故开展此研究对其进行初步验证。我们首先应用高糖（high glucose,HG）建立了人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）IR模型（30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h）。实验结果显示,HG对HUVECs的存活率和形态无明显影响;HG可显着降低HUVECs的NO分泌含量并升高ET-1 mRNA水平,提示其破坏了血管舒缩因子的平衡;HG可显着降低HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-Akt Ser473及p-eNOSSer1177水平并升高p-IRS1Ser307水平,提示其损害了胰岛素信号转导;HG可显着减少HUVECs的ACE2及Mas蛋白表达,提示其可能损害了ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴的保护作用。以上结果表明HG成功诱导HUVECs IR并可减少ACE2及Mas蛋白表达。我们进而加入人参皂苷Rc（25、50 mmol/L）与HG同步处理,观察其对HUVECs IR是否具有改善作用。实验结果显示,人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的NO分泌含量并降低ET-1 mRNA水平,提示其纠正了血管舒缩因子的失衡;人参皂苷Rc可减少HUVECs的ROS产生,显着降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性,提示其增强了HUVECs的抗氧化应激能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs的TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA水平,提示其增强了HUVECs的抗炎能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs培养液上清Ang II含量,进一步升高Ang-（1-7）含量,增加ACE2及Mas蛋白表达,而HG或人参皂苷Rc对ACE2及Mas mRNA水平无明显影响,提示人参皂苷Rc可通过非转录调控方式激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴;人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-AktSer473及p-eNOSSer1177水平并降低p-IRS1Ser307水平,提示其恢复了胰岛素信号转导;人参皂苷Rc可显着减少NOX2蛋白表达,降低p-IKKβSer177/181、p-JNKThr183/Tyr185及p-NF-κB p65Ser536水平,提示其抑制了IR相关的氧化应激和炎症信号。以上结果表明,人参皂苷Rc可能通过抗氧化、抗炎和上调ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR。为进一步明确人参皂苷Rc改善内皮IR的潜在机制,我们应用ACE2特异性抑制剂MLN-4760（100 nmol/L）与HG及人参皂苷Rc同步处理。实验结果显示,MLN-4760可显着抑制人参皂苷Rc纠正血管舒缩因子失衡、抗炎、激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴、恢复胰岛素信号转导及抑制IR相关氧化应激和炎症信号的作用;然而,MLN-4760未能抑制人参皂苷Rc减少HUVECs的ROS产生、降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性的作用,提示人参皂苷Rc具有独立于ACE2的抗氧化应激能力。以上结果表明,人参皂苷Rc的抗氧化及抗炎作用一定程度上依赖于上调ACE2,并且其通过上调ACE2改善了内皮IR。基于体外实验结果,我们应用T2DM模型的db/db小鼠和MLN-4760,进一步观察人参皂苷Rc是否对在体的内皮功能障碍同样具有改善作用及其机制是否同样依赖于上调ACE2。实验结果显示,人参皂苷Rc对db/db小鼠体重、空腹血糖、血清脂质（TC、TG、LDL-C、HDL-C）及胰岛素含量无明显影响,提示其无降血糖及调血脂的作用;人参皂苷Rc可显着降低db/db小鼠血清TNF-α含量,提示其在体内同样具有抗炎作用,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc对db/db小鼠血清Ang II、Ang-（1-7）及主动脉Ang-（1-7）含量无明显影响,但可显着降低主动脉Ang II含量并增加ACE2及Mas蛋白表达,提示其在体内同样可上调ACE2及Mas,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着改善db/db小鼠胸主动脉内皮依赖性舒张并恢复Akt/eNOS信号转导,提示其在体内可改善内皮功能,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着减少db/db小鼠主动脉NOX2及NOX4蛋白表达,提示其在体内同样具有抗氧化作用,而MLN-4760可一定程度拮抗这种作用。以上结果表明,人参皂苷Rc可改善db/db小鼠主动脉内皮功能障碍,其机制可能更依赖于降解Ang II而不是生成Ang-（1-7）,且不依赖于对血糖和血脂的调节。综上所述,本研究从细胞水平和整体动物水平上,证实了人参皂苷Rc可通过上调ACE2蛋白改善HUVECs IR及db/db小鼠内皮功能障碍,不仅发现了人参皂苷Rc的新作用及其潜在机制,还为防治糖尿病心血管并发症提供了新的视角。
杨绍忠[3]（2021）在《七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩》文中进行了进一步梳理血管张力由机体的内在机制和外在机制共同调节。吸入性麻醉药可直接作用于各种血管床的血管平滑肌和内皮细胞,影响血管阻力,从而导致器官血流改变。在维持血管张力方面,血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）中的钾离子（K+）通道起着重要作用。氯化钾（Potassium chloride,KCl）刺激血管平滑肌（Vascular smooth muscle,VSM）收缩的机制可能涉及Ca2+依赖和Ca2+敏化途径。KCl膜去极化通过电压依赖性Ca2+通道受体增加VSM细胞Ca2+内流,导致胞浆游离Ca2+（[Ca2+]i）增加。[Ca2+]i的增加激活Ca2+-钙调蛋白（Ca2+-calmodulin,CaM）依赖的肌球蛋白轻链激酶（Myosin light chain kinase,MLCK）,导致肌球蛋白轻链（Myosin light chain,MLC）磷酸化和血管收缩。除Ca2+依赖途径外,Ca2+诱导的Ca2+敏化途径还可通过调节Ⅱ类磷酸酰肌醇3-激酶α 亚基（Class Ⅱphosphoinositide 3-kinase α-isoform,PI3K-C2α）和 Rho 激酶活性来抑制MLC磷酸酶（MLC phosphatase,MLCP）,从而导致血管收缩。磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide3-kinase,PI3K）是一个广泛表达的酶家族,可以磷酸化膜肌醇脂类并发挥多种生物活性。根据其结构、分布、活化机制和功能不同,PI3K可分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ三类。Ⅰ类PI3K根据不同类型的偶联受体和调节激活剂可进一步分为IA类和IB类,介导细胞增殖、存活和迁移。Ⅱ类PI3K分为 PI3K-C2α,PI3K-C2β,和 PI3K-C2γ 三种。研究表明 PI3K-C2α 和 PI3K-C2β均参与Rho的激活和Rho激酶依赖性MLCP抑制。Ⅲ类存在于酵母中,是由Vps34蛋白（磷酸酰肌醇3-激酶囊泡分选蛋白34）组成的。已知VSM表达多种PI3Ks,包括Ⅰ类酶p110α和 p110β,Ⅱ类酶 PI3K-C2α 和 C2β。PI3Ks已被证明与糖尿病（diabetes mellitus,DM）及其并发症密切相关,是葡萄糖稳态的关键分子。PI3Ks对DM患者的重要性不仅限于对糖代谢的调节,还与DM引起的靶器官损害密切相关,如血管、心脏和大脑。研究证实,DM可导致中枢神经系统中PI3K活性的降低。大脑中PI3K信号的上调,可以逆转DM的病理后果,而使用PI3K抑制剂则可减轻甚至恢复DM相关的损伤。蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）又称Akt,是PI3K途径的关键下游底物,在细胞凋亡、增殖、迁移和转录及葡萄糖代谢等多种细胞过程中发挥关键作用。PI3K/Akt信号通路广泛存在于细胞中,可以激活并调控众多激酶靶点,是生理和病理条件下调节血管张力的关键因子。PI3K/Akt信号通路参与内皮细胞的典型功能,如调节血管平滑肌张力和血管生成等。Rho激酶在VSMC收缩机制中起重要作用。体内Rho-Rho激酶的激活可改变Ca2+的敏感性,磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1（Myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1）,抑制MLCP引起血管收缩。体内血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,Ang Ⅱ）、凝血酶和内皮细胞或平滑肌细胞中高血糖等因素,均可触发Rho激酶的激活。最新研究表明,DM患者外周循环白细胞的Rho激酶活性显着增加,抑制Rho激酶活性可以改善DM的疗效及预后。目前,临床常用的吸入性麻醉药为七氟醚（sevoflurane,SEVO）和异氟醚（isoflurane,ISO）,通常表现为浓度依赖性的心肌抑制和血管舒张,引起低血压。既往研究表明,SEVO和ISO可以通过PI3K/Akt途径对心肌和脑缺血再灌注损伤提供保护作用。PI3K/Akt通路通过L型Ca2+通道的调控以及Rho激酶、磷酸二酯酶5（phosphodiesterase 5,PDE5）的激活,导致血管收缩。研究表明,抑制PI3K信号通路是一种潜在的抗高血压和血管保护疗法。可能机制与细胞内信号转导直接作用于VSM有关,但确切机制尚未完全清楚。我们前期研究发现SEVO通过抑制蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）磷酸化降低Ang Ⅱ诱导的血管收缩,而不影响VSM中[Ca2+]i。最近研究表明,SEVO抑制 MLC、蛋白激酶 C 增强抑制蛋白（PKC-Potentiated inhibitory protein,CPI-17）和肌球蛋白磷酸酶靶向亚基 1/Thr853（Myosin phosphatase target subunit/Thr853,MYPT1/Thr853）对AngⅡ的磷酸化反应。ISO也抑制MLC对Ang Ⅱ的磷酸化反应,与MYPT1/Thr853的降低有关,但与CPI-17的磷酸化无关。SEVO和ISO均不影响Ang Ⅱ诱导的肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1/Thr696（Myosin phosphatase target subunit/Thr696,MYPT1/Thr696）磷酸化。上述研究表明两种吸入性麻醉药对Ang Ⅱ诱导的血管收缩和MLC磷酸化有相似的抑制作用,但其抑制MLCP活性的机制却不同。PI3K参与Rho的激活和由此产生的Rho激酶依赖性MLCP抑制,可诱导血管平滑肌收缩,但与其细胞内Ca2+浓度升高无关,表明该激酶参与了细胞内Ca2+敏化途径。研究表明,临床浓度的SEVO可显着抑制非DM大鼠对去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）的反应,但对DM大鼠无此作用。临床研究证实,用ISO或SEVO麻醉诱导,非DM患者的足部皮肤温度比DM患者更高,提示由交感神经系统控制的体温调节在DM患者中受损。这些发现表明DM血管对吸入性麻醉药的反应性发生了改变。但DM血管对吸入性麻醉药反应性的差异及其机制尚未确定,尤其是对血管病变较严重的老年DM研究较少。目前,关于SEVO和ISO对Ca2+诱导的Ca2+敏化途径在调节VSM收缩中的作用所知甚少。本研究分为三部分,第一部分研究对象为正常大鼠主动脉血管,旨在探讨吸入性麻醉药通过调节PI3K亚基和Rho激酶活性,对正常大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响。第二部分研究对象为老龄DM血管,通过与幼龄和老龄正常大鼠血管对比,旨在探讨吸入性麻醉药对DM大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响,并探讨年龄和DM对吸入性麻醉药血管舒张反应的特异性影响。主动脉为弹性储器血管,而决定外周血管阻力的主要是阻力血管,因此第三部分研究对象选择胃癌患者手术切除的大网膜动脉,旨在探讨吸入性麻醉药通过调节PI3K亚基和Rho激酶活性,对阻力血管平滑肌收缩的影响。本研究将为临床合理应用吸入性麻醉药提供更多理论依据,有助于改善患者预后。第一部分:七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2 α/Rho激酶调节大鼠主动脉血管平滑肌收缩目的探讨SEVO和ISO通过调节正常大鼠离体主动脉血管平滑肌中PI3K亚基和Rho激酶活性对KCl所致血管平滑肌收缩的影响。方法1.血管平滑肌组织制备。雄性Wistar大鼠（250-350g）用氟烷麻醉,通过颈总动脉放血实施安乐死。仔细解剖降主动脉,去除附着的脂肪和连接组织,切成3-4mm的动脉环。用不锈钢针轻轻摩擦内表面,去除内皮细胞。动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。2.等张肌力收缩测量。用KCl（60mM）培养主动脉环,观察平滑肌细胞完整性其整体收缩反应性,并确认动脉环内皮细胞已去除。在加入KCl前先将每只大鼠（n=7）的6个主动脉环随机暴露于SEVO和ISO的0、1、2和3最小肺泡浓度（MAC）或 1mM LY294002（PI3K 抑制剂）或1μM Y27632（Rho 激酶抑制剂）环境中培养15min。使用等张肌力传感器测量KCl诱发的血管收缩张力。SEVO、ISO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大鼠主动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。3.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。从每只大鼠的降主动脉取一条去除内皮细胞的动脉条带（约3.5cm）,在实验开始前将其浸泡在含氧的KBS溶液中平衡60min。主动脉条分别在0（对照）、60 mM KCl、1 MAC-SEVO（1.7%）、2 MAC-SEVO（3.5%）、1 mM LY294002 和 1μM Y27632 或 0（对照）、60mM KCl、1MAC-ISO、2MAC-ISO、1mM LY294002 和 1μM Y27632 中培养。在有 KCl 的情况下培养15min,无KCl的情况下培养5min,用液氮快速冷冻,匀浆离心后使用Western blot分析测定MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化程度。实验中用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。磷酸化与总CPI-17、MLC和MYPT1的比值用作每种酶的活化指标,并表示为相对于基线对照水平的百分比。4.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。为测定SEVO、ISO和激酶抑制剂对KCl刺激的PI3K和Rock Ⅱ转膜活化的剂量效应,主动脉条分别先用1.7%SEVO、3.5%SEVO、1.2%ISO、2.3%ISO、1 mM LY294002 和 1μM Y27632处理15min后,用KCl培养5min。使用Western blot分析测定PI3K和Rho激酶（RockII）转膜活化水平。实验中用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。PI3K-p85α、PI3K-C2 α和Rock Ⅱ的含量以总值的百分比表示（膜中含量/膜和胞质中总量）。结果1.等张肌力收缩测量。KCl诱导大鼠主动脉平滑肌快速而持续收缩,在约5min后达到最大水平,并在大鼠主动脉环中持续超过30min。SEVO和ISO均以浓度依赖的方式减弱KCl诱导的动脉平滑肌收缩,并且LY294002（1mM）和Y27632（1μM）对平滑肌收缩也起抑制作用。SEVO对KCl诱导的血管平滑肌收缩抑制作用与等效浓度的ISO 比较,无显着性差异。2.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。KCl诱导MLC磷酸化迅速增加,且在暴露于KCl约5min后达到峰值水平。SEVO和ISO也以浓度依赖的方式抑制 KCl 诱导的 MLC 磷酸化,LY294002（1mM）和 Y27632（1μM）对 MLC磷酸化也起到抑制作用。SEVO和ISO均以浓度依赖的方式抑制KCl引起的MYPT1/Thr853磷酸化,但均不影响MYPT1/Thr696和CPI-17/Thr38的磷酸化。3.PI3K 和 Rho 激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。LY294002（1mM）抑制 KCl诱导的PI3K-p85和PI3K-C2α转膜活化（分别为P<0.05和P<0.01）。Y27632（1uM）和LY294002（1mM）均能抑制KCl诱导的Rock Ⅱ转膜活化（P<0.01）。SEVO和ISO均抑制大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rock Ⅱ转膜活化,但对PI3K-p85转膜活化无影响。结论1.SEVO和ISO均能通过抑制正常大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性及MLC磷酸化,抑制血管收缩。2.LY294002可通过抑制MLC磷酸化和PI3K活性抑制血管收缩。3.吸入性麻醉药发挥抑制作用的细胞机制是通过PI3K-C2α/Rho激酶/MYPT1/MLC途径介导。意义SEVO和ISO可通过调节大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管平滑肌收缩。临床浓度的吸入性麻醉药与PI3K抑制剂合用可增强血管舒张作用。研究为使用PI3K抑制剂进行抗癌治疗的患者使用吸入性麻醉药时的循环管理提供一定临床指导。第二部分:七氟烷和异氟烷通过PI3K/Rho激酶调节糖尿病血管平滑肌收缩目的探讨SEVO和ISO对PI3K和Rho激酶参与的老年2型糖尿病大鼠血管平滑肌收缩的影响。方法1.实验动物。选择老年雄性OLETF大鼠（65～70周龄）和年龄匹配的非糖尿病LETO大鼠及幼年Wistar大鼠（6～8周龄）作为研究对象。OLETF大鼠是一种自发性的2型糖尿病（type 2 diabetesmellitus,T2DM）动物模型,具有先天性多食、轻度肥胖、迟发性高血糖、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症的特点,与人类T2DM的病理生理过程相似。2.口服糖耐量试验。实验前对各组大鼠进行口服糖耐量试验（Oral glucose tolerance test,OGTT）。大鼠禁食8～14h,取尾静脉血测定空腹血糖。然后葡萄糖（2g/kg）灌胃,30、60、90、120min时分别测定负荷后血糖。各组大鼠符合入组标准后用于后续实验。3.血管平滑肌制备。三组大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉后,颈总动脉放血实施安乐死。仔细解剖降主动脉,切成3～4mm长的动脉环。用不锈钢针轻轻摩擦内表面,去除内皮细胞。动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。4.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的三组大鼠主动脉血管收缩张力。用KCl诱导动脉环后,将各组动脉环随机分别暴露于SEVO或ISO（MAC值为 0、1、2、3）、10μM LY294002 和 1μMY27632 的环境中培养 15min。SEVO和ISO通过校准的汽化器以2L/min的新鲜气流流量通入到气体混合物中,使用气相色谱仪监测和调整KBS溶液中的SEVO浓度。SEVO、ISO、LY294002和Y27632对KCl（60mM）诱导的三组大鼠动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。结果1.葡萄糖耐量曲线变化。大鼠OGTT曲线变化表明,老年OLETF大鼠餐后血糖明显高于对照组同龄LETO大鼠及幼年Wistar大鼠,有显着差异（P<0.01）且在30min达到最高值。LETO大鼠及Wistar大鼠血糖峰值在10mmol/L以下,但峰值出现时间不同,老年LETO大鼠峰值在进食后30min,幼年Wistar大鼠峰值在餐后60min。2.KCl（60mM）对大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响。KCl诱导三组大鼠主动脉平滑肌快速而持续收缩,与LETO组及Wistar组相比,OLETF组大鼠主动脉收缩更明显,有显着性差异（P<0.05）,LETO组与Wistar组无显着性差异。3.SEVO和ISO对KCl诱导的大鼠主动脉平滑肌收缩的影响。SEVO和ISO对幼年和老年大鼠血管反应存在显着性差异,SEVO对幼年大鼠血管抑制作用较等效浓度ISO更强,其中2MAC和3MAC SEVO较等效浓度ISO有显着性差异（P<0.05）。老年大鼠组中,ISO 比等效浓度SEVO抑制作用更显着,且OLETF组比LETO组更明显,但两者没有显着性差异。三组间比较,1MAC SEVO对KCl诱导的幼年Wistar大鼠主动脉血管收缩抑制作用最强,且与OLETF组和LETO组相比,有显着差异（P<0.05）。2MAC SEVO对三组大鼠无显着性差异。3MAC SEVO对KCl诱导的OLETF组血管收缩抑制作用最强,与LETO组和Wistar组相比,有显着差异（P<0.05）。与SEVO不同,相比较OLETF组和LETO组,各浓度ISO对幼年Wistar大鼠主动脉血管收缩抑制作用最弱,有显着性差异（P<0.05）。4.LY294002（10μM）和Y27632（1μM）对KCl诱导的大鼠主动脉血管收缩的影响。LY294002和Y27632对三组大鼠主动脉血管收缩均有抑制作用。三组间LY294002和Y27632抑制程度比较,Wistar组与LETO组没有统计学差异（P>0.05）,OLETF大鼠组主动脉舒张程度明显高于LETO组和Wistar组,有显着性差异（P<0.01）。结论1.与正常血管相比,KCl诱导糖尿病血管平滑肌收缩显着增强。2.SEVO和ISO对幼年和老年大鼠主动脉血管平滑肌收缩抑制有显着差异,SEVO对幼龄血管抑制作用更明显,尤其是高浓度时。ISO对老年血管抑制作用更强。3.吸入性麻醉药对正常血管和糖尿病血管反应明显不同,提示糖尿病血管PI3K和Rho激酶活性异常。4.PI3K抑制剂LY294002和Rho激酶抑制剂Y27632对糖尿病血管收缩抑制作用更强,进一步提示糖尿病血管PI3K和Rho激酶活性异常。意义探明吸入性麻醉药调控糖尿病血管舒张的特异性反应,为糖尿病患者围术期合理选择麻醉药物,实现麻醉学向围术期医学转变,预防围术期急性心脑血管事件的发生提供理论依据。第三部分:七氟烷通过PI3K-C2 α/Rho激酶调节大网膜动脉血管平滑肌收缩目的研究SEVO通过调控PI3K-C2α和Rho激酶活性对KCl诱导的大网膜动脉血管平滑肌收缩的影响。方法1.组织制备。取患者腹腔镜胃切除后的大网膜动脉为研究样本。仔细解剖大网膜动脉,去除附着的脂肪和连接组织,并将备好的动脉切成3～4mm的动脉环。动脉环用棉签或针头轻轻摩擦,以机械方式去除内皮细胞,避免内皮衍生的血管舒张物质介导的影响。动脉环用苯肾上腺素（10-5mol/L）预收缩,对缓激肽（10-6mol/L）无舒张反应时,表明内皮细胞已完全去除。去除内皮细胞的动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。2.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的动脉血管收缩张力。在37℃的Krebs碳酸氢盐溶液（KBS）中通入95%（v/v）O2和5%（v/v）CO2的混合气（新鲜气体流量为2L/min）。动脉环在3g的静息张力下平衡60min,每隔20min更换一次培养液。随后用KCl（60mM）培养动脉环,观察平滑肌细胞的完整性及其整体收缩反应性。在加入KCl之前先将动脉环随机暴露于SEVO（MAC值为 0、1、2）或 10μM LY294002（PI3K 抑制剂）或 1μMY27632（Rho 激酶抑制剂）的环境中培养15min。SEVO通过校准的汽化器以2L/min的新鲜气流流量通入到气体混合物中,使用气相色谱仪监测和调整KBS溶液中的SEVO浓度。SEVO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大网膜动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力收缩的百分比表示。4.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。在大网膜动脉样本中取一条内皮剥脱的血管条带（约3.5cm）,将其浸泡在含氧的KBS溶液中,平衡60min。将不同大网膜动脉条随机于 0（对照）、60mM KCl、1MAC-SEVO（1.7%）、2 MAC-SEVO（3.4%）、LY294002（10μM）或 Y27632（1μM）中培养。在无 KCl 的情况下培养15min,在KCl存在的情况下培养5min,随后用液氮进行快速冷冻。匀浆离心后使用Western blot分析MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化程度。实验用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。磷酸化与总CPI-17、MLC和MYPT1的比值用作每种酶的活化指标,并表示为相对于基线对照水平的百分比。5.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。选取样本中己去除内皮细胞的大网膜动脉条,将其浸泡在含有20ml KBS溶液的器官浴槽中平衡60min,每20min更换一次KBS溶液。将平衡后的动脉条分别置于1MAC-SEVO（1.7%）、2MAC-SEVO（3.4%）、LY294002（10μM）和 Y27632（1μM）的环境中培养 15min。用KCl处理5min后,用液氮快速冷冻样品。使用Western blot方法测定PI3K和Rho激酶（RockⅡ）的转膜活化。实验用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。PI3K-p85α、PI3K-C2α和Rock Ⅱ的含量以总值的百分比表示（即膜中含量/膜加胞质中总含量）。结果1.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的动脉VSM收缩张力。SEVO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大网膜动脉VSM收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。测量结果显示SEVO以浓度依赖的方式减弱KCl诱导的人离体大网膜动脉VSM收缩,LY294002（10μM）和Y27632（1μM）也可以对其起到抑制作用。2.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。结果显示KCl诱导MLC磷酸化迅速增加,且在暴露于KCl约5min后达到峰值水平。SEVO以浓度依赖的方式抑制KCl引起的MLC和MYPT1/Thr853磷酸化。与第一部分结果一致,SEVO不影响KCl引起的大网膜动脉MYPT1/Thr696和CPI-17/Thr38磷酸化的增加;此外,LY294002（10μM）和Y27632（1μM）也可以抑制KCl诱导的MLC磷酸化。3.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。与第一部分结果一致,SEVO以浓度依赖的方式抑制人离体大网膜动脉血管平滑肌PI3K-C2α和Rock Ⅱ的转膜活化,但SEVO不会以浓度依赖的方式抑制PI3K-p85对KCl的反应。LY294002（10μM）可抑制 KCl 诱导的 PI3K-p85 和 PI3K-C2α 转膜活化。Y27632（1uM）和LY294002（10μM）均能抑制KCl诱导的Rock Ⅱ转膜活化。结论1.SEVO可通过调控大网膜动脉血管中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管收缩。2.低浓度PI3K抑制剂LY294002（10μM）可有效抑制PI3K活性和MLC磷酸化,舒张血管。3.SEVO对KCl诱导的血管收缩的抑制作用与调节MLCP的上游活化因子PI3K-C2α/Rho激酶活性有关。意义临床常用剂量的SEVO可通过调控大网膜动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管收缩。吸入性麻醉药对弹性储器血管和阻力血管均有浓度依赖性抑制作用。该研究为围术期使用PI3K抑制剂进行抗癌治疗的患者使用吸入性麻醉药时的循环管理提供重要理论依据。
陈梅[4]（2020）在《葛根素对中风高危因素糖尿病血管内皮功能障碍的作用机制研究》文中研究说明目的:随着人民生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病的患病率不断上涨,成为全球重大的公共卫生健康问题之一。糖尿病是心脑血管意外的独立危险因素之一,糖尿病患者患心脑血管疾病的风险是非糖尿病患者的两倍。糖尿病后并发心脑血管并发症,如脑卒中、冠心病等,是糖尿病致死和致残的主要原因,给社会经济、人民生活带来了极大的负担。目前,糖尿病性心脑血管意外的治疗包括控制血糖、控制血压、降低血脂、抗血小板聚集以及保护血管内皮功能,而以控制血糖为主。然而,目前尚无可靠的证据表明,严格的血糖控制能降低糖尿病并发心脑血管意外的风险。近年来,血管内皮功能障碍作为糖尿病后主要的病理改变之一,得到了越来越多的重视。血管内皮功能障碍普遍存在于糖尿病中,且与糖尿病后靶器官损伤关系密切。血管内皮功能障碍会导致血管舒缩功能紊乱、血小板聚集、血管炎症等,是心脑血管意外的起始环节。祖国医学对糖尿病的疗效机制具有多环节、多靶点的特点,对防治糖尿病后心脑血管并发症具有一定的优势。因此,本课题（1）首先基于数据挖掘,通过对中药治疗糖尿病的现代文献进行整理,筛选出治疗糖尿病的高频中药,并分析糖尿病的临床用药规律,为进一步探讨中医药糖尿病的防治策略提供新的方向;（2）基于离体血管张力检测技术,对葛根的主要有效成分葛根素进行实验研究,从血管内皮依赖性收缩的角度探讨葛根素对糖尿病的血管内皮保护作用,为葛根素的临床应用提供理论依据。方法:文献研究:采用计算机检索中文期刊全文数据库（CNKI）中关于中药治疗糖尿病的相关文献,导入EndNote并利用EndNote对文献进行初步查重。阅读题目摘要后人工筛选出符合纳入标准的文献,下载文献并阅读全文进一步筛选文献。最后提取文献要素,使用Microsoft office 2016中的Excel对文献要素进行记录,并用SPSS 26.0对数据进行分析。关联规则分析使用Apriori算法,聚类分析采用系统聚类中的组间连接法（Between-groups linkage）,距离衡量方法是欧式距离（Euclidean distance）。实验研究:（1）应用Nω-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐对正常小鼠颈总动脉血管环进行30分钟预处理,再使用乙酰胆碱分别诱导内皮完整和去内皮小鼠颈总动脉的收缩。在加乙酰胆碱之前40分钟,加葛根素和其他抑制剂对血管环进行预处理,检测离体血管张力。随后使用葛根素分别对正常C57BL/6小鼠连续腹腔注射7天和14天,分离小鼠颈总动脉后参照之前的方法检测离体血管内皮依赖性收缩的变化;（2）利用高脂饮食喂养三周加链脲佐菌素（50mg/kg/d）连续腹腔注射一周构建2型糖尿病小鼠模型,将2型糖尿病小鼠随机分为模型组和治疗组,治疗组给予葛根素50mg/kg腹腔注射,另设空白对照组,检测各组乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性收缩,并采用酶联免疫吸附法检测乙酰胆碱诱导的颈总动脉前列腺素类含量的变化。结果:第一部分:1)中药使用频次统计:频次≥20的中药有32味,频次最高的前5味依次是黄芪、丹参、麦冬、葛根、黄连;2)药物性味、归经统计:四气中性寒（842次）和性温（505次）频次最高,其次为性平（282次）,再次为性凉（116次）和性热（18次）;五味中前三位由高到低依次为甘（1081次）、苦（911次）、辛（440次）,味酸（150次）和味苦（115次）最少。归经方面,归肺（857次）、肝（850次）中药应用最多,其次为归脾（761次）、胃（662次）、心（613次）和肾（499次）经中药;3)中药类别统计:前三种类别分别是补气药（271次）、补阴药（192次）和活血调经药（172次）。另外,补虚药,包括补气药、补血药、补阴药和补阳药,频次总计为575次,频率为32.4%。清热药,包括清热凉血药、清热泻火药和清热燥湿药以及清虚热药,频次总计为414次,频率为23.4%;4)高频中药关联规则分析:一共得到10组二联药和27组三联药对。5)聚类分析得到5组有意义的聚类组,分别是党参、太子参、黄芪、甘草、人参、枸杞子、黄精、葛根、麦冬、天花粉、知母、玄参、生地、泽泻、五味子;苍术、白术、当归、红花、川芎、丹参、赤芍、白芍、水蛭、地龙;山茱萸;黄连、黄芩。第二部分:实验一:（1）小鼠颈总动脉血管内皮依赖性收缩由环氧合酶和血栓烷-前列腺素受体介导;（2）环氧合酶-2而非环氧合酶-1介导了小鼠颈总动脉血管内皮依赖性收缩;（3）葛根素40min预处理可以抑制小鼠颈总动脉血管内皮依赖性收缩;（4）给予小鼠连续腹腔注射50mg/kg 14天可以显着抑制乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性收缩;实验二:葛根素50mg/kg腹腔注射可以显着抑制2型糖尿病小鼠血管内皮依赖性收缩和PGF2。和PGD2水平,但对血管平滑肌的收缩没有影响,且对2型糖尿病小鼠体重和血糖的情况无明显改善作用。结论:1.糖尿病高频用药有黄芪、丹参、麦冬、葛根、黄连,以补气益阴和清热活血中药为主。2.葛根素能够抑制T2DM糖尿病小鼠颈总动脉血管内皮依赖性收缩,其机制可能在于抑制PGF2。、PGD2的释放。
曾志刚[5]（2019）在《IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究》文中研究表明目的:骨骼肌损伤是运动医学中最常见的损伤之一。我们之前的研究发现,巨噬细胞剔除导致挫伤骨骼肌中胰岛素样生长因子1（IGF-1）、机械生长因子（MGF）的下调和肌肉再生受损。据此我们假设,注射IGF-1或MGF可能至少部分地改善巨噬细胞剔除导致的肌肉修复受损。因此,我们探讨了注射IGF-1或MGF是否在改善受损肌肉的修复中起重要作用。方法:在C57BL/6小鼠的腓肠肌中建立了IGF-1或MGF注射的肌肉挫伤和巨噬细胞剔除的动物模型。将小鼠随机分为4组:（1）挫伤与安慰剂处理组（C组）,（2）挫伤与巨噬细胞剔除处理组（CD组）,（3）挫伤、巨噬细胞剔除与IGF-1处理组（CDI组）,（4）挫伤、巨噬细胞剔除与MGF处理组（CDM组）。在C、CD、CDI和CDM组中,除第0天（非挫伤小鼠）外,每组小鼠均产生腓肠肌双侧挫伤,并分别在挫伤前（Con）和挫伤后第1、3、7、14天取样。在巨噬细胞剔除和IGF-1或MGF注射后对挫伤的肌肉进行综合的组织形态学和遗传学分析,在挫伤骨骼肌中检测骨骼肌再生（HE染色）、纤维化（masson染色）、巨噬细胞及其亚群表面标志物、炎性细胞因子、趋化因子、肌源性调节因子（MRFs）、血管生成调节因子、氧化应激因子和基质金属蛋白酶（MMP）的表达（实时定量PCR和免疫荧光染色）。结果:1含氯膦酸盐的脂质体对受损骨骼肌巨噬细胞标志物的影响。与单纯肌肉挫伤后相比,巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）明显受到抑制（ρ<0.01）。这些结果表明巨噬细胞有效剔除了。2注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少和纤维化加重。巨噬细胞剔除后损伤14天的挫伤肌肉中再生肌纤维的总数目、总面积和总直径比单纯肌肉挫伤后的再生肌纤维显着减少（ρ<0.05）,注射IGF-1后受损的肌肉再生没有改善（ρ>0.05）。再者,巨噬细胞剔除引起肌肉挫伤后纤维化明显增加（ρ<0.05）,而增加的纤维化没有通过IGF-1注射得以改善（ρ>0.05）。3注射IGF-1未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复。通过注射IGF-1,挫伤后的细胞免疫反应得到了改善,巨噬细胞总数（F4/80）、促炎巨噬细胞（CD68）、抗炎巨噬细胞（CD163和CD206）有一定程度的显着增加（ρ<0.05）。在修复后期,注射IGF-1后的巨噬细胞总数（F4/80）高于单纯肌肉挫伤和巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）（ρ<0.05）,而注射IGF-1后的CD68和CD206巨噬细胞的水平仅高于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.05）,CD163巨噬细胞水平低于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.01）。4注射IGF-1未能改善巨噬细胞剔除所致的挫伤肌肉延迟修复（其表现为MRFs增加,特别是修复后期）。与单纯肌肉挫伤后的表达水平相比,在巨噬细胞剔除后的不同时间点,MyoD,Myf5,myogenin和Myf6的表达水平显着增加（ρ<0.05）,在注射IGF-1后14d,MyoD和myogenin的表达也显着增加（ρ<0.001）。5注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除所致的血管生成调节因子的抑制,但未能改善挫伤肌肉的再生受损。与单纯肌肉挫伤后相比,在巨噬细胞剔除后修复的初始阶段HIF-1α和VEGF的表达增加（ρ<0.01）,在巨噬细胞剔除后的所有修复阶段Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.01）。与巨噬细胞剔除后相比,注射IGF-1后各修复阶段HIF-1α的表达均显着降低（ρ<0.05）,VEGF在修复后期和Angpt-1在所有修复阶段的表达显着增加（ρ<0.001）。然而,注射IGF-1后修复后期HIF-1α、VEGF和Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.001）。6注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无保护作用,但减轻挫伤骨骼肌的纤维化。巨噬细胞剔除显着降低了损伤14天后再生肌纤维的总直径、总数量和总面积（ρ<0.01）。然而,注射MGF对再生肌纤维的直径、数量和面积没有影响（ρ>0.05）。再者,与损伤后14天的单纯肌肉挫伤组纤维化比较,巨噬细胞剔除组的骨骼肌纤维化显着增加（ρ<0.01）。然而,与损伤后14天的巨噬细胞剔除组纤维化面积比较,注射MGF后纤维化面积显着降低（ρ<0.05）。同时,在损伤后1天和3天,注射MGF后I型和III型胶原蛋白水平明显低于巨噬细胞剔除后的水平（ρ<0.01）。7注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中卫星细胞的功能状态。巨噬细胞剔除不影响MyoD的表达（ρ>0.05）,但在肌肉损伤后3天显着降低Myogenin的表达（p<0.01）。然而,注射MGF并不影响巨噬细胞剔除后受损骨骼肌中MyoD和Myogenin的表达（ρ>0.05）。8注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达,但降低炎性细胞因子和趋化因子的表达。与巨噬细胞剔除相比,注射MGF后挫伤骨骼肌的巨噬细胞标记物表达无明显变化（ρ>0.05）。在骨骼肌损伤后3天,巨噬细胞剔除使促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β和TGF-β）的水平显着高于单纯肌肉挫伤（ρ<0.05）。相反,与巨噬细胞剔除相比,注射MGF导致损伤后TNF-α,IFN-γ,IL-1β和TGF-β水平显着降低（ρ<0.05）。再者,巨噬细胞剔除显着增加趋化因子（CCL2、CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。然而,注射MGF显着降低巨噬细胞剔除后受损肌肉组织三种趋化因子（CCL2,CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。9注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中gp91phox的表达。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF显着降低了伤后3天gp91phox的表达（ρ<0.01）。10注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中基质金属蛋白酶的表达。巨噬细胞剔除导致损伤骨骼肌中MMP-1,MMP-2,MMP-9,MMP-10和MMP-14水平比单纯肌肉挫伤显着升高（ρ<0.05）。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF在损伤后第3天显着抑制其增加（ρ<0.01）。结论:通过上述研究结果得出以下结论:（1）在巨噬细胞持续剔除的情况下,注射IGF-1可以促进巨噬细胞亚群（CD206）和VEGF、Angpt-1的表达的部分恢复。（2）IGF-1注射并不能完全弥补巨噬细胞在肌肉再生相关调节因子、肌源性调节因子和血管生成调节因子中的重要作用。因此,外源性补充IGF-1并不能改善由巨噬细胞剔除引起的小鼠挫伤骨骼肌的再生和修复受损。（3）注射MGF可部分改善由巨噬细胞剔除导致的小鼠骨骼肌再生受损和纤维化。（4）注射MGF降低了巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶和gp91phox的表达,有利于减少挫伤骨骼肌的纤维化。
杨红[6]（2014）在《运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响》文中研究说明目的代谢功能紊乱是导致糖尿病心血管病变最重要的原因之一。已知心脏是人体能量需求最大的器官,心肌发生代谢紊乱,提示心肌供能不足,影响心肌泵血能力。糖尿病引起的高糖高脂会导致心肌血管结构和功能的改变,其中血管收缩增强,减少血管血流量,会引发心肌缺血。所以,糖尿病心血管病发生代谢紊乱的同时,还伴随着收缩功能的异常。本研究从糖尿病心血管代谢相关因子过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）、肉碱棕榈酰转移酶1（CPT-1）、胰岛素样生长因子（IGF-1）和收缩功能相关因子内皮素1（ET-1）、尾加压素Ⅱ（UⅡ）的研究着手,研究糖尿病心血管代谢紊乱和收缩功能异常的机制,探讨运动干预及其药物联合干预是否能改善糖尿病心血管代谢紊乱和收缩功能异常等问题,从而起到治疗糖尿病心血管病的作用。方法1.健康SD雄性大鼠,将其随机分为四组:正常对照组（A组）,安静糖尿病组（B组）,运动糖尿病组（C组）,运动加药糖尿病组（D组）。糖尿病模型建立成功后,C组D组进行8周运动干预,D组给予罗格列酮。2.大鼠尾静脉采血检测血糖变化,进行口服糖耐量试验,干预结束后大鼠腹主动脉采血,检测大鼠糖化血清蛋白、血脂三项的结果。3.心肌和血管组织石蜡包埋,进行HE染色,观察细胞形态。4.荧光定量PCR检测心肌和血管中代谢因子（PPARα、CPT-1、IGF-1）和收缩功能因子（ET-1、UⅡ）的基因水平,蛋白质印迹法（Western Blot）检测蛋白表达的变化。5.统计学处理:所有数据用SPSS11.1软件处理,剂量资料以均数±标准差表示,组间比较采用多因素方差分析统计处理。结果1.实验大鼠出现三高一低症状:安静糖尿病组体重明显降低（p＜0.01）,运动糖尿病组和运动加药组体重增加;糖尿病组心脏重量降低,运动糖尿病组和运动加药组升高;糖尿病组心重/体重指数增大,运动糖尿病组心重/体重指数降低;糖尿病大鼠糖耐量试验阳性。2.实验大鼠生理生化指标的变化:糖尿病组血糖明显升高（p＜0.01）,运动糖尿病组和运动加药组血糖明显降低（p＜0.01）,且运动加药组降低幅度更明显;糖尿病组糖化血清蛋白升高（p＜0.01）,运动组和运动加药组含量降低,且运动加药组作用有显着性差异（p＜0.01）;糖尿病组甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白含量都升高,且总胆固醇升高有显着性差异（p＜0.01）,运动组和运动加药物组降低总胆固醇和低密度脂蛋白含量,且综合干预后总胆固醇降低有显着性差异（p＜0.01）;运动加药物组降低甘油三酯含量。3.心肌和血管组织形态变化:糖尿病大鼠心肌组织排列紊乱,细胞肥大扭曲,细胞间隙增大,运动组和运动加药组心肌排列尚整齐,肥大心肌减少,细胞间隙变小;糖尿病大鼠血管内膜增厚病灶,病灶表面内皮细胞肿胀、肥胖,局部平滑肌细胞排列紊乱,运动组和运动加药组内膜较为平坦,细胞平行排列,破坏较轻。4.实验大鼠心肌血管代谢收缩因子基因表达的变化:安静糖尿病组心肌中PPARα、IGF-I、ET-1表达降低和CPT-1、UⅡ升高,且ET-1、UⅡ变化有显着性差异（p＜0.01）,血管中PPARα、CPT-1、IGF、ET-1、UⅡ降低,且CPT-1、IGF-I降低有显着性差异（p＜0.05）;运动糖尿病组心肌PPARα、CPT-1、ET-1、UⅡ降低和IGF-I升高,血管PPARα、CPT-1、IGF-I、ET-1、UⅡ降低;运动加药组心肌中PPARα、CPT-1、IGF-I、ET-1、UⅡ降低,且UⅡ降低有显着性差异（p＜0.05）,血管中PPARα、IGF-I、ET-1、UⅡ升高和CPT-1降低,且PPARα升高有显着性差异（p＜0.05）。5.实验大鼠心肌血管代谢收缩因子蛋白水平的变化:安静糖尿病组心肌血管中PPARα、CPT-1、IGF-I降低和ET-1、UⅡ升高,且心肌PPARα（p＜0.01）和血管CPT-1（p＜0.05）降低有显着性差异;运动糖尿病组心肌血管中PPARα、IGF-I升高和ET-1、UⅡ降低,血管CPT-1升高,且血管IGF-I升高有显着性差异（p＜0.05）;运动加药组心肌血管PPARα、IGF-I升高和UⅡ降低,血管CPT-1升高和ET-1降低,且血管IGF-I升高有显着性差异（p＜0.01）。结论:1.糖尿病大鼠出现明显代谢紊乱,血糖、血脂升高。同时,心肌血管代谢和收缩因子发生改变,尤其心肌和血管代谢因子PPARα、CPT-1、IGF-I显着降低,收缩因子ET-1和UⅡ显着升高,势必造成糖尿病大鼠心血管细胞摄取糖、脂类物质受限,能量代谢障碍,且血管过度收缩,心肌供血量不足,最终影响心血管舒缩功能。2.运动干预对糖尿病大鼠心肌血管糖、脂代谢紊乱和收缩功能异常有一定的改善作用。尤其在改善心血管细胞摄取糖、脂类物质受限和能量代谢障碍方面有一定效果。同时,还可改善血管收缩异常,增加心肌供血量。此外,运动干预对血管代谢和收缩功能的作用比心肌更明显。3.运动联合药物干预对糖尿病大鼠心血管代谢紊乱的改善更为明显,提示运动联合药物干预是改善心血管代谢的有效方法。
冯健[7]（2011）在《齐墩果酸对大鼠血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1表达的影响及其作用机制的研究》文中进行了进一步梳理研究背景冠心病是当今全世界危害人们身体健康最常见的心脏病,位列我国心脏病住院率和死亡率之首。动脉粥样硬化是冠心病的主要病理生理变化,动脉粥样硬化的进展程度,特别是易损斑块的破裂是急性冠状动脉综合征（ACS）、冠心病猝死等急性冠心病事件的主要“导火线”。血管平滑肌细胞（VSMCs）是构成血管壁的主要细胞,其不正常地增殖、迁移及凋亡贯穿动脉粥样硬化的全过程。因此,如何有效地调节VSMCs的生理功能,已成为目前关心的热点问题。齐墩果酸（Oleanolic acid, OA）是从天然产物中提取出来的五环三萜类化合物,在我国,齐墩果酸主要用于急慢性肝炎的治疗。目前,国外研究表明:OA除对肝脏有保护作用外,在心血管系统也发挥着广泛的生物学效应,如保护心肌免于缺血再灌注损伤,调节血脂,抗动脉粥样硬化等作用。但是其作用的具体机制仍不甚清楚。血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1, HO-1）是机体最重要的抗氧化酶之一,正常情况下在组织中不或者低表达,当发生应激时,其表达会上调,从而发挥保护机体的作用。越来越多的实验表明,激活HO-1能调节心血管系统的功能,保护其免于各种不利刺激的损伤。最近国内外研究更表明,HO-1也参与了多种治疗心血管疾病药物的作用。因此,本课题以VSMCs为研究对象,运用现代分子生物学技术,探讨OA是否通过调节HO-1的表达来实现保护血管的作用,并探讨其可能的机制。研究方法第一部分齐墩果酸对血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1表达的影响及与PI3K、MAPK通路的关系。取SD雄性大鼠,经手术取其胸主动脉,采用贴块法培养血管平滑肌细胞,采用α-SM-actin特异性抗体行细胞鉴定为平滑肌细胞,4-8代细胞用于实验。将VSMCs分为:①正常对照组,②OA（10μM）组,③OA（25μM）组,④OA（50μM）组;然后放入孵箱中培养12小时,后取出采用RT-PCR及Western blot检测细胞中HO-1 mRNA及蛋白表达情况,分光光度法测定HO-1活性。然后取OA最佳浓度加入VSMCs中,放入孵箱中培养指定时间后取出,采用Western blot检测细胞中HO-1的表达。将VSMCs分为:正常对照组和OA不同时间作用组,提取细胞蛋白,采用Western blot法检测细胞中磷酸化Akt及磷酸化MAPKs的表达情况。通过上一步实验确定能被OA激活的激酶,在下一步实验中采用相应的阻断剂与OA作用于细胞,分为:①正常对照组,②OA组,③OA+相应阻断剂组。干预后放入孵箱中培养指定时间后,取出提取蛋白,行Western blot法检测HO-1的表达。第二部分转录因子Nrf2在齐墩果酸调控血管平滑肌细胞血红素氧合酶1表达中的作用。将VSMCs分为:①正常对照组,②OA（10μM）组,③OA（25μM）组,④OA（50μM）组;在孵箱中培养4小时候后取出,提取细胞核蛋白,Western blot检测细胞核中Nf2的表达变化。确定OA能激活Nrf2后,加入相应阻断剂,实验分为:①正常对照组,②OA组,③OA +相应阻断剂组。在孵箱中培养指定时间后,取出提取细胞核蛋白,行EMSA检测Nrf2结合活性。将构建好的Nrf2干扰慢病毒载体转染细胞,Western blot测定Nrf2的表达,确定是否干扰成功。将VSMCs分为:①对照载体转染组,②OA +对照载体转染组,③Nrf2干扰慢病毒载体转染组,④OA + Nrf2干扰慢病毒载体转染组。采用Western blot法检测细胞中HO-1的表达变化。第三部分齐墩果酸对血管平滑肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制实验先采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）确定过氧化氢（H2O2）诱导血管平滑肌细胞损伤的最佳浓度,然后实验分为:①正常对照组,②H2O2组,③OA + H2O2组,④OA + H2O2 + ZnPP组,⑤OA + H2O2 +相应阻断剂组。采用MTT、Hoechst 33342法或流式细胞仪检测细胞凋亡及坏死情况。然后将实验分为:①正常对照组,②过氧化氢（H2O2）组,③OA（10μM）+ H2O2组,④OA（25μM）+ H2O2组,⑤OA（50μM）+ H2O2组。采用相应试剂盒测定细胞中谷胱甘肽（GSH）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）及超氧化物歧化酶（SOD）的变化。研究结果（1）OA在10、25、50μM浓度范围内都能上调VSMCs中HO-1的活性、mRNA及蛋白水平,呈现浓度依赖性,并且在50μM浓度时,OA诱导VSMCs中HO-1表达的作用最强,故此以后实验均采用50μM浓度进行细胞干预。（2）OA作用于VSMCs不同时间后,HO-1蛋白表达呈现不同程度地上调,6小时时HO-1表达最强,随后,HO-1蛋白表达逐渐减弱。（3）OA作用于VSMCs后,能使细胞中磷酸化的Akt、ERK及p38激酶表达增强。细胞分别经PI3K抑制剂wortmannin,ERK抑制剂PD98059及p38抑制剂SB203850预处理后,Western blot显示wortmannin及PD98059预处理组较单纯OA组的HO-1表达显着下调;SB203850预处理组的HO-1表达与单纯OA组比无显着变化。（4）不同浓度的OA作用于VSMCs 4小时,能激活细胞中Nrf2的核转录,且呈现浓度依赖性。细胞分别经wortmannin及PD98059预处理后,与单纯OA组比较,细胞中Nrf2结合活性显着减弱。（5）Nrf2干扰慢病毒成功瞬时转染VSMCs,Nrf2 siRNA转染组与control siRNA组比较,细胞核Nrf2表达显着减弱;OA + Nrf2 siRNA组与OA + control siRNA组比较,HO-1蛋白表达显着下调。（6）不同浓度的H2O2作用于VSMCs 24小时,能导致细胞不同程度的死亡,并呈现浓度依赖性,当浓度达到400μM时开始出现显着的细胞毒性作用,故此以后实验采用400μM H2O2作用于细胞。与H2O2组比较,OA各剂量组细胞GSH、NADPH及SOD含量均有不同程度的上升,其中25、50μM组具有统计学意义。与OA+ H2O2组相比,经ZnPP（HO-1活性抑制剂）、wortmannin及PD98059预处理组,细胞活性显着降低。结论（1）OA能上调大鼠血管平滑肌细胞中HO-1的mRNA及蛋白表达,伴有HO-1活性的增强。（2）OA通过激活大鼠血管平滑肌细胞Akt、ERK通路诱导HO-1的表达。（3）OA能激活大鼠血管平滑肌细胞中Nrf2转录因子,Akt及ERK通路参与其中。（4）Nrf2转录因子参与了OA诱导的HO-1表达。（5）OA能减轻H2O2导致的大鼠血管平滑肌细胞氧化损伤,可能是通过增加HO-1等抗氧化酶的活性来实现的。由此可见,OA通过激活大鼠血管平滑肌细胞中Akt及ERK信号通路,导致Nrf2的核转录增加,Nrf2的激活促进了HO-1的表达增加,从而减轻H2O2导致的VSMCs氧化损伤。
袁巍[8]（2009）在《黄芪甲苷对糖尿病血管重构的保护作用及其相关机制研究》文中研究表明糖尿病血管并发症是糖尿病患者致死、致残的主要原因。作为糖尿病的共同特征，高血糖是参与导致糖尿病血管内皮细胞及平滑肌细胞功能损伤的不同发病机制及发病环节的一个独立的致病因素。血管重构（vascular remodeling，VR）是血管为适应内外环境变化而发生的结构和功能的适应性改变。高血糖，胰岛素抵抗，高胰岛素血症，内皮细胞功能紊乱，非酶促糖基化，脂质过氧化和脂质浸润，血液流变学及血流动力学异常等因素，对血管壁的急慢性刺激均可引起血管重构。血管重构是糖尿病大血管及微血管病变的始动环节及病理生理基础，它在糖尿病早期血管结构和功能异常及晚期并发症的作用日益引起关注。内皮细胞与平滑肌细胞是血管壁的主要构成成分与功能单位，动脉血管壁内皮功能损伤、平滑肌细胞增殖／凋亡比例失衡、表型改变等与血管重构密切相关，因此糖尿病患者在降血糖治疗的同时，改善内皮与平滑肌细胞的功能对预防和治疗血管并发症也同样重要。本论文结合高糖诱导的内皮与平滑肌细胞损伤模型综合评价药物对血管重构的作用。细胞阻抗分析技术能非标记、实时地反映细胞的生物学状态，本研究将基于细胞阻抗分析技术的实时细胞电子传感系统(RT-CESTM)应用于血管平滑肌细胞生长的研究，建立了高糖（25 mM）诱导的血管平滑肌细胞损伤模型和动态监测平滑肌细胞生长情况的方法。本研究实时地监测了细胞从贴附、伸展、增殖到融合，以及加入高糖刺激引起的电极阻抗的变化过程，揭示了高糖作用下平滑肌细胞生长的动态变化过程。将其与传统的WST-1细胞活性检测法进行了比较，验证了这种分析方法反映细胞数量的可靠性。此模型的建立对高血糖参与糖尿病血管损伤的发病机制研究和抗糖尿病血管并发症药物筛选评价有重要的指导意义。黄芪甲苷是中药黄芪的主要活性成分，是一种小分子量的皂苷。黄芪甲苷具有多种药理作用，包括抗糖尿病，心血管疾病及糖尿病肾病等。但是黄芪甲苷对糖尿病血管重构的影响及其作用机理还不清楚。我们观察了黄芪甲苷对高糖诱导的平滑肌细胞增殖活力及细胞凋亡的影响。结果显示，50μg／mL黄芪甲苷可显着降低平滑肌细胞的增殖活力（P＜0．01）并且使凋亡率显着增高（P＜0．01），表明黄芪甲苷可通过降低平滑肌细胞增殖活力和促使细胞凋亡来抑制平滑肌细胞的增殖。我们的结果提示抑制细胞DNA合成与抗凋亡蛋白Bcl-2表达可能是黄芪甲苷降低高糖诱导的平滑肌细胞的增殖，促进细胞凋亡的机制。另外，黄芪甲苷还可以通过促进α-SMA蛋白表达抑制平滑肌细胞去分化。PPAR-γ具有促进细胞分化，调节细胞周期等作用，我们的研究表明，黄芪甲苷具有促进平滑肌细胞PPAR-γ基因表达的作用，说明黄芪甲苷对高糖诱导的平滑肌细胞增殖的保护作用与PPAR-γ相关。为了进一步考察黄芪甲苷是否具有治疗糖尿病血管并发症的潜力，我们研究黄芪甲苷对内皮的保护作用。研究表明黄芪甲苷可改善高糖诱导的内皮屏障功能损伤，并剂量依赖性的减低TNF-α引起的内皮细胞功能损伤，包括抑制细胞代谢活性丧失和细胞凋亡，证明了它具有改善内皮功能、治疗糖尿病心血管并发症的潜力。综上，本研究得到以下新的发现与结果：（1）应用RT-CES动态地监测平滑肌细胞的生长过程，建立了高糖诱导的平滑肌细胞损伤实时监测模型，并将其与传统的WST-1细胞活性检测法进行了比较，验证了这种分析方法反映细胞数量的方法是可靠的。（2）我们的研究发现黄芪甲苷可能通过如下机制对内皮细胞及平滑肌细胞功能发挥保护作用：①通过抑制细胞周期进程降低平滑肌细胞增殖活力；②通过调节抗凋亡蛋白Bcl-2促进平滑肌细胞凋亡；③通过促进α-SMA蛋白表达调节平滑肌细胞的表型；④促进平滑肌细胞PPAR-γ基因表达；⑤改善高糖诱导的内皮屏障功能损伤；⑥抑制TNF-α引起的内皮细胞代谢活性丧失和凋亡。（3）结合高糖诱导的内皮与平滑肌细胞损伤模型综合评价了黄芪甲苷对糖尿病血管重构的作用。我们的结果表明黄芪甲苷对高糖诱导的内皮细胞及平滑肌细胞的功能损伤具有一定的保护作用，因而对糖尿病血管重构具有保护作用，在预防治疗糖尿病血管并发症方面具有一定的开发前景。
冷怀明[9]（2002）在《《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引》文中研究指明
谢毅强[10]（2006）在《参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变血管内皮细胞保护的实验研究》文中认为目的：研究参芪复方对2型糖尿病大血管病变血管内皮保护的作用机理，为以益气养阴、活血化瘀为治疗原则的参芪复方在临床的广泛应用提供理论依据。方法：GK大鼠腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）2周，同时给高脂饮食4周造模。实验按GK大鼠随机血糖分为模型组、雷米普利组（简称为西药组）、参芪复方低剂量组（简称为中药低剂量组）、参芪复方高剂量组（简称为中药高剂量组）各11只，Wistar大鼠11只作为正常对照（简称为空白组），共5组。L-NAME注射2周后开始给药，连续28天。观察一般状况、摄食量、饮水量及体重变化。实验结束时果糖胺法测糖化血清蛋白（GSP）、放射免疫法测血清胰岛素（INS）、血清白细胞介素-6（IL-6）、血浆内皮素-1（ET-1）的含量；化学比色法测血清一氧化氮（NO）、血清一氧化氮合酶（NOS）的含量；酶联免疫吸附法测定血清氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）、血清细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的含量；用Real-Time PCR测定胸主动脉ICAM-1mRNA及清道夫受体CD36mRNA的表达；并观察光镜下的病理形态变化。比较NO和ET-1、ox-LDL和CD36mRNA的相关性。结果：中药高、低剂量组动物在实验结束后多饮及消瘦的症状较模型组有所缓解（p＜0.01）。中药高低剂量组IL-6、ET-1、INS、GSP、ICAM-1、ox-LDL的含量均较模型组有显着下降（p＜0.01或p＜0.05）。中药高、低剂量组的NO及NOS较模型组有明显升高（p＜0.01）。ICAM-1mRNA及CD36mRNA的表达也较模型组明显降低（p＜0.01）。NO和ET-1呈线性负相关（r=-0.90），ox-LDL和CD36mRNA的Ct值呈线性负相关（r=-0.60）。中药高、低剂量组动物胸主动脉内膜病变数目及程度均有明显减少（p＜0.01）。结论：参芪复方对T2DM大血管病变血管内皮具有保护的作用。其作用可能是通过以下机制完成：①降低血清IL-6的含量；②降低血清ICAM-1的含量及抑制主动脉ICAM-1mRNA的表达；③升高血清NO和NOS含量，降低血浆ET-1含量；④降低血清ox-LDL的含量；⑤降低主动脉CD36mRNA的表达；⑥减轻胰岛素抵抗。
二、Induction of cyclooxygenase-2 by insulin in cultured rat vascular smooth muscle cells（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Induction of cyclooxygenase-2 by insulin in cultured rat vascular smooth muscle cells（论文提纲范文）
（1）基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 缺血性脑卒中 |
| 1.1.1 缺血性脑卒中概述 |
| 1.1.2 缺血性脑卒中发病机制及主要病理环节 |
| 1.1.3 缺血性脑卒中与肠道菌群的关系 |
| 1.1.4 缺血性脑卒中常用药物 |
| 1.2 刺五加叶主要化学成分及药理作用 |
| 1.2.1 刺五加叶概述 |
| 1.2.2 刺五加叶主要化学成分 |
| 1.2.3 刺五加叶主要药理作用 |
| 1.3 代谢组学 |
| 1.3.1 代谢组学概述 |
| 1.3.2 代谢组学研究方法 |
| 1.3.3 脂质组学研究方法 |
| 1.3.4 代谢组学在缺血性脑卒中研究中的应用 |
| 1.3.5 基于高效同位素标记衍生化的代谢组学研究 |
| 1.4 本论文的研究思路、研究目的及意义 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 研究目的及意义 |
| 第2章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 2.1.2 刺五加叶主要活性组分的制备及成分分析 |
| 2.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 2.1.4 样品采集及处理 |
| 2.1.5 组织病理学检查 |
| 2.1.6 血清脂质代谢轮廓采集 |
| 2.1.7 数据分析 |
| 2.1.8 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析 |
| 2.1.9 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析方法学考察 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 刺五加叶主要活性组分成分分析 |
| 2.2.2 组织病理学检查 |
| 2.2.3 血清脂质组学代谢轮廓分析 |
| 2.2.4 血清脂质组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 2.2.5 血清脂质组学通路分析 |
| 2.2.6 神经递质定量研究 |
| 2.2.7 炎症因子和氧化应激水平研究 |
| 2.3 小结 |
| 第3 章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 3.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 3.1.3 样品采集及处理 |
| 3.1.4 粪便代谢轮廓采集 |
| 3.1.5 数据分析 |
| 3.1.6 基于UPLC-TQ/MS的大鼠粪便胆汁酸定量分析 |
| 3.1.7 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 粪便非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 3.2.2 粪便非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 3.2.3 粪便非靶向代谢组学通路分析 |
| 3.2.4 基于靶向代谢组学的大鼠粪便胆汁酸的定量研究 |
| 3.2.5 刺五加叶对大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 4.1.2 菌群培养及菌液制备 |
| 4.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 4.1.4 样品采集及处理 |
| 4.1.5 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 4.1.6 大鼠脑组织中神经递质的含量测定 |
| 4.1.7 炎症因子及氧化应激等生化指标检测 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 益生菌对缺血性脑卒中大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 4.2.2 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织中神经递质水平的影响 |
| 4.2.3 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织及血清炎症因子和氧化应激水平的影响 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 5.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 5.1.3 样品采集及处理 |
| 5.1.4 尿液代谢轮廓采集 |
| 5.1.5 数据分析 |
| 5.1.6 ELISA法对通路分析进行验证 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 尿液非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 5.2.2 尿液非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 5.2.3 尿液非靶向代谢组学通路分析 |
| 5.2.4 刺五加叶治疗缺血性脑卒中对体内代谢通路的影响验证 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 6.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 6.1.3 样品采集及处理 |
| 6.1.4 尿液样本同位素标记衍生化 |
| 6.1.5 尿液代谢轮廓采集 |
| 6.1.6 数据分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学代谢轮廓分析 |
| 6.2.2 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 6.2.3 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学结果的科学解释 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 结论 |
| 本论文创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 第1章 绪论 |
| 综述1 胰岛素抵抗与内皮功能障碍 |
| 1.1 胰岛素信号通路 |
| 1.2 炎症与IR |
| 1.2.1 炎症信号 |
| 1.2.2 炎症介导IR的机制 |
| 1.3 内皮功能障碍 |
| 1.3.1 内皮分泌的主要血管活性物质 |
| 1.3.2 内皮功能障碍的发生机制 |
| 1.3.3 血管内皮的胰岛素信号通路 |
| 1.3.4 IR与内皮功能障碍的相互关系 |
| 1.4 结语 |
| 综述2 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用与ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的生物学功能 |
| 1.1 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用 |
| 1.1.1 经典RAS的构成 |
| 1.1.2 经典RAS与糖尿病及其并发症 |
| 1.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的构成 |
| 1.2.1 ACE2 的生物学特性及其激动剂和抑制剂 |
| 1.2.2 Ang-(1-7)的生物学特性 |
| 1.2.3 Mas的生物学特性及其激动剂和拮抗剂 |
| 1.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴在几种常见疾病中的作用 |
| 1.3.1 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与高血压 |
| 1.3.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与动脉粥样硬化 |
| 1.3.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与心衰 |
| 1.3.4 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与中风 |
| 1.3.5 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与糖尿病 |
| 1.4 结语 |
| 第2章 ACE2 在高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗中的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 HG对HUVECs存活率的影响 |
| 2.3.2 HG对HUVECs形态的影响 |
| 2.3.3 HG对HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 2.3.4 HG对HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 2.3.5 HG对HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 2.3.6 HG对HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要试剂与仪器 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人参皂苷Rc对HUVECs细胞存活率的影响 |
| 3.3.2 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1mRNA水平的影响 |
| 3.3.3 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 3.3.4 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 3.3.5 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 3.3.6 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及Ang-(1-7)含量的影响 |
| 3.3.7 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 3.3.8 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 3.3.9 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1蛋白表达的影响 |
| 3.3.10 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 3.3.11 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 3.3.12 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 4.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 4.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 4.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 4.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 4.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 4.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 4.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 4.3.9 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 4.3.10 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NOX2蛋白表达的影响 |
| 4.3.11 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善DB/DB小鼠内皮功能障碍的作用及机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠体重和空腹血糖的影响 |
| 5.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清脂质及胰岛素含量的影响 |
| 5.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清促炎因子含量的影响 |
| 5.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清和主动脉Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 5.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 5.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠胸主动脉内皮和非内皮依赖性舒张的影响 |
| 5.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠Akt/eNOS信号通路的影响 |
| 5.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 讨论 |
| 第7章 结论及展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 本论文创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节大鼠主动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 七氟烷和异氟烷通过PI3K/Rho激酶调节糖尿病大鼠主动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第三部分 七氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节大网膜动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 吸入性麻醉药调控血管平滑肌张力的细胞机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
（4）葛根素对中风高危因素糖尿病血管内皮功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 糖尿病血管并发症的现代医学研究进展 |
| 1.1.1 糖尿病的发病特点和流行病学研究 |
| 1.1.2 糖尿病心脑血管并发症的研究进展 |
| 1.1.3 糖尿病心脑血管并发症的治疗 |
| 1.2 血管内皮功能障碍研究进展 |
| 1.2.1 血管内皮功能障碍的定义和机制 |
| 1.2.2 血管内皮功能的检测方法 |
| 1.2.3 血管内皮功能障碍与心脑血管疾病的关系 |
| 1.3 中医治疗糖尿病血管并发症的研究进展 |
| 1.3.1 中医理论对糖尿病血管并发症的认识 |
| 1.3.2 中药治疗糖尿病血管病变的现代研究进展 |
| 1.4 中医治疗血管内皮功能损伤的研究进展 |
| 1.4.1 血管内皮功能损伤的中医学认识 |
| 1.4.2 中药治疗血管内皮功能障碍的现代医学研究进展 |
| 1.4.3 中药治疗血管内皮功能障碍的机制 |
| 第二章 基于数据挖掘治疗糖尿病的中药复方的现代文献研究 |
| 2.1 研究方法 |
| 2.1.1 文献检索策略 |
| 2.1.2 纳入标准和排除标准 |
| 2.1.3 数据规范方法 |
| 2.1.4 数据筛选和提取 |
| 2.1.5 数据挖掘方法 |
| 2.2 研究结果 |
| 2.2.1 文献检索流程图 |
| 2.2.2 中药使用频次统计 |
| 2.2.3 药物性味、归经统计 |
| 2.2.4 中药类别统计 |
| 2.2.5 高频中药关联规则分析 |
| 2.2.6 高频中药聚类分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 葛根素对小鼠颈总动脉内皮依赖性收缩的影响 |
| 3.1 葛根素对正常小鼠颈总动脉内皮依赖性收缩的影响 |
| 3.1.1 研究方法 |
| 3.1.2 研究结果 |
| 3.1.3 讨论 |
| 3.2 葛根素对2型糖尿病小鼠颈总动脉内皮依赖性收缩的影响 |
| 3.2.1 研究方法 |
| 3.2.2 研究结果 |
| 3.2.3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（5）IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 论文总体设计 |
| 第一部分 IGF-1或MGF和巨噬细胞介导的损伤骨骼肌再生的关系研究综述 |
| 1 前言 |
| 2 巨噬细胞及其亚群和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 2.1 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 2.2 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌再生调节因子 |
| 2.3 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 2.4 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌趋化因子 |
| 2.5 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 2.6 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 2.7 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌氧化应激因子 |
| 3 IGF-1和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 3.1 在肌再生中IGF-1和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 3.2 在肌再生中IGF-1和巨噬细胞及其亚群 |
| 3.3 在肌再生中IGF-1和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 3.4 在肌再生中IGF-1和骨骼肌趋化因子 |
| 3.5 在肌再生中IGF-1和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 3.6 在肌再生中IGF-1和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 4 MGF和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 4.1 在肌再生中MGF和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 4.2 在肌再生中MGF和巨噬细胞及其亚群 |
| 4.3 在肌再生中MGF和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 4.4 在肌再生中MGF和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 4.5 在肌再生中MGF和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 第二部分 注射IGF-1未改善巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 骨骼肌挫伤动物模型 |
| 2.4 脂质体注射 |
| 2.5 IGF-1注射 |
| 2.6 肌肉再生和纤维化的组织形态学评价 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA分离与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) |
| 2.9 实时定量PCR(Rt-qPCR) |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞及其亚型的影响 |
| 3.4 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌源性调节因子的影响 |
| 3.5 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌血管生成调节因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少 |
| 4.2 注射 IGF-1 未能改善由巨噬细胞剔除引起的挫伤肌肉的延迟修复(其取决于MRFs 增加),特别是在修复的后期 |
| 4.3 注射 IGF-1 未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的肌肉纤维化加重 |
| 4.4 注射 IGF-1 未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞亚群之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复 |
| 4.5 注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除诱导的血管生成调节因子的抑制,但不能改善挫伤肌肉受损的再生和修复 |
| 5 结论 |
| 第三部分 注射 MGF 对巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 骨骼肌挫伤模型 |
| 2.3 巨噬细胞剔除 |
| 2.4 MGF处理 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 Masson三色染色 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA提取,cDNA合成和实时聚合酶链式反应(PCR) |
| 2.9 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞功能状态的影响 |
| 3.4 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的影响 |
| 3.5 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的影响 |
| 3.6 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的影响 |
| 3.7 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的影响 |
| 3.8 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无改善作用,但能减轻巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌的纤维化 |
| 4.2 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞的功能状态 |
| 4.3 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达 |
| 4.4 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的表达 |
| 4.5 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的表达 |
| 4.6 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的表达 |
| 4.7 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的表达 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 缩略词表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间科研与发表论文情况 |
（6）运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩写词表 |
| 前言 |
| 综述 |
| 1 糖尿病的研究现状 |
| 2 糖尿病心肌病的研究现状 |
| 3 糖尿病心血管代谢收缩因子的研究现状 |
| 4 运动对糖尿病心肌病作用的研究现状 |
| 5 药物对糖尿病心肌病作用的研究现状 |
| 1 仪器和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 糖尿病大鼠模型建立 |
| 1.3 分组和运动干预、运动加药干预 |
| 1.4 一般生理生化指标检测 |
| 1.5 心肌和血管形态学观察 |
| 1.6 心血管代谢和功能因子的基因蛋白检测 |
| 1.7 统计学 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 实验大鼠的一般生理变化 |
| 2.1.1 实验大鼠体重变化 |
| 2.1.2 实验大鼠体重的变化 |
| 2.1.3 实验大鼠的心脏相对重量和心脏/体重指数 |
| 2.2 实验大鼠一般生理化指标 |
| 2.2.1 实验大鼠血糖的变化 |
| 2.2.2 实验大鼠糖化血清蛋白的变化 |
| 2.2.3 各组大鼠口服糖耐量试验的结果 |
| 2.2.4 各组大鼠血脂三项的变化 |
| 2.3 实验大鼠心肌和血管组织形态的改变 |
| 2.4 实验大鼠心肌代谢因子的变化 |
| 2.5 实验大鼠血管代谢因子的变化 |
| 2.6 实验大鼠心肌收缩功能因子的变化 |
| 2.7 实验大鼠血管收缩功能因子的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 糖尿病大鼠模型建立 |
| 3.2 运动干预对糖尿病大鼠心血管的影响 |
| 3.2.1 运动干预对糖尿病大鼠生理的影响 |
| 3.2.2 运动干预对糖尿病大鼠心肌血管代谢因子的影响 |
| 3.2.3 运动干预对糖尿病大鼠心肌血管收缩因子的影响 |
| 3.3 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心血管的影响 |
| 3.3.1 运动联合药物干预对糖尿病大鼠生理的影响 |
| 3.3.2 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心肌血管代谢因子的影响 |
| 3.3.3 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心肌血管收缩因子的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）齐墩果酸对大鼠血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1表达的影响及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 齐墩果酸对血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1 表达的影响及与 P13K、MAPK 通路的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 转录因子Nrf2 在齐墩果酸调控血管平滑肌细胞血红素氧合酶1 表达中的作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 齐墩果酸对血管平滑肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
（8）黄芪甲苷对糖尿病血管重构的保护作用及其相关机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 糖尿病血管并发症与血管重构 |
| 1.1 糖尿病分类 |
| 1.1.1 1型糖尿病 |
| 1.1.2 2型糖尿病 |
| 1.1.3 特殊类型糖尿病 |
| 1.1.4 妊娠糖尿病 |
| 1.2 糖尿病血管并发症与血管重构 |
| 1.2.1 糖尿病血管并发症概述 |
| 1.2.2 血管重构的概念 |
| 1.2.3 糖尿病血管重构的病理学特征及生物学过程 |
| 1.2.4 糖尿病血管重构机制 |
| 1.2.5 血管重构与常见糖尿病并发症 |
| 1.2.6 高糖对血管损伤的病理生理机制 |
| 第二章 2型糖尿病并发症药物的相关研究现状 |
| 2.1 抗2型糖尿病并发症的药物 |
| 2.1.1 醛糖还原酶抑制剂 |
| 2.1.2 蛋白非酶糖基化阻滞剂 |
| 2.1.3 生长因子拮抗剂 |
| 2.1.4 抗氧剂 |
| 2.1.5 血管紧张素转换酶抑制剂 |
| 2.1.6 蛋白激酶C抑制剂 |
| 2.2 天然药物治疗糖尿病并发症 |
| 2.2.1 抑制醛糖还原酶活性 |
| 2.2.2 抑制蛋白质非酶糖基化及其终产物的形成 |
| 2.2.3 胰岛素增敏作用 |
| 2.2.4 降血脂 |
| 2.2.5 抗氧化作用 |
| 2.3 本课题的研究背景、方法以及意义 |
| 2.3.1 研究背景 |
| 2.3.2 研究方法 |
| 2.3.3 研究目的及意义 |
| 第三章 血管平滑肌细胞高糖损伤模型的建立及阻抗分析技术实时监测细胞生长 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 血管平滑肌细胞培养和鉴定 |
| 3.2.3 葡萄糖刺激浓度的选择及高糖对平滑肌细胞增殖活力的影响 |
| 3.2.4 使用阻抗仪细胞浓度的选择 |
| 3.2.5 高糖对血管平滑肌细胞电阻抗的影响 |
| 3.2.6 结果统计 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 原代细胞培养结果及鉴定 |
| 3.3.2 葡萄糖刺激浓度的选择 |
| 3.3.3 阻抗仪细胞浓度的选择 |
| 3.3.4 高糖对微电子传感器阵列上的平滑肌电阻抗的影响 |
| 3.4 分析与讨论 |
| 第四章 黄芪甲苷对血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 平滑肌细胞增殖和凋亡及相关机制探讨方法 |
| 4.2.1 细胞增殖活力检测方法 |
| 4.2.2 细胞凋亡检测的相关方法 |
| 4.2.3 细胞内钙离子检测的相关方法 |
| 4.3 材料与方法 |
| 4.3.1 实验材料 |
| 4.3.2 细胞电阻抗实时监测黄芪甲苷对平滑肌细胞增殖活力的影响 |
| 4.3.3 WST-1法检测黄芪甲苷对平滑肌细胞增殖活力的影响 |
| 4.3.4 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞周期的影响 |
| 4.3.5 黄芪甲苷对平滑肌细胞凋亡的形态学观察 |
| 4.3.6 黄芪甲苷对平滑肌细胞凋亡的影响 |
| 4.3.7 黄芪甲苷对平滑肌细胞线粒体膜电位检测的影响 |
| 4.3.8 黄芪甲苷对凋亡相关基因Bcl-2表达的影响 |
| 4.3.9 黄芪甲苷对平滑肌细胞内游离Ca~(2+)测定 |
| 4.3.10 黄芪甲苷对表型标记蛋白α-Smooth Muscle actin表达的影响 |
| 4.3.11 药物对平滑肌细胞PPAR-γ基因表达影响的检测 |
| 4.3.12 结果统计 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 黄芪甲苷对平滑肌细胞增殖活力的影响 |
| 4.4.2 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞周期的影响 |
| 4.4.3 黄芪甲苷对平滑肌细胞凋亡的影响 |
| 4.4.4 黄芪甲苷对平滑肌细胞Bcl-2表达的影响 |
| 4.4.5 黄芪甲苷对表型标记蛋白α-Smooth Muscle actin表达的影响 |
| 4.4.6 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞内Ca~(2+)的影响 |
| 4.4.7 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞PPAR-γ基因表达的影响 |
| 4.5 分析与讨论 |
| 第五章 黄芪甲苷对内皮细胞的保护作用及相关机制研究 |
| 5.1 概述 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 脐静脉内皮细胞培养 |
| 5.2.3 培养内皮细胞的鉴定 |
| 5.2.4 黄芪甲苷对高糖诱导的内皮细胞电阻抗改变的影响 |
| 5.2.5 黄芪甲苷对高糖诱导的内皮通透性改变的影响 |
| 5.2.6 黄芪甲苷对TNF-α诱导的内皮细胞代谢活性丧失的影响 |
| 5.2.7 黄芪甲苷对TNF-α诱导的内皮细胞凋亡的影响 |
| 5.2.8 黄芪甲苷对TNF-α引起的内皮细胞内Ca~(2+)升高的影响 |
| 5.2.9 结果统计 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 内皮细胞的培养及鉴定 |
| 5.3.2 黄芪甲苷对高糖引起的内皮屏障功能障碍的保护作用 |
| 5.3.3 黄芪甲苷对TNF-α引起的内皮细胞活性丧失的影响 |
| 5.3.4 黄芪甲苷对TNF-α引起的内皮细胞凋亡的影响 |
| 5.3.5 黄芪甲苷对TNF-α引起的内皮细胞内Ca~(2+)升高的影响 |
| 5.4 分析与讨论 |
| 第六章 总结与展望 |
| 1.研究工作总结 |
| 2.进一步的工作展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间相关论文发表情况 |
（10）参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变血管内皮细胞保护的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 目录 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲养条件 |
| 1.3 饲料及饮水 |
| 1.4 实验用药品 |
| 1.5 实验用主要试剂 |
| 1.6 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 造模及分组 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 观察指标及检测方法 |
| 2.4.1 大鼠的一般状况 |
| 2.4.2 随机血糖 |
| 2.4.3 糖化血清蛋白(GSP)含量 |
| 2.4.4 血清INS的含量 |
| 2.4.5 血清ox-LDL的测定 |
| 2.4.6 血清IL-6的测定 |
| 2.4.7 血清NO的测定 |
| 2.4.8 血清NOS的测定 |
| 2.4.9 血浆ET-1含量的测定 |
| 2.4.10 血清ICAM-1含量的测定 |
| 2.4.11 胸主动脉ICAM-1mRNA及CD-36mRNA的表达 |
| 2.4.12 胸主动脉光镜病理形态 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 动物一般状况的观察 |
| 3.2 给药前随机血糖和体重情况 |
| 3.3 饮水量情况 |
| 3.4 摄食量情况 |
| 3.5 体重的变化情况 |
| 3.6 对血清IL-6含量的影响 |
| 3.7 对血清GSP含量的影响 |
| 3.8 对血清INS含量、IRI、IAI的影响 |
| 3.9 对血清NO、NOS含量的影响 |
| 3.10 对血浆ET-1含量的影响 |
| 3.11 对血清ICAM-1含量、胸主动脉ICAM-1mRNA表达的影响 |
| 3.12 对血清ox-LDL含量的影响 |
| 3.13 对胸主动脉CD36mRNA表达的影响 |
| 3.14 血清NO和血浆ET-1的相关性分析 |
| 3.15 血清ox-LDL与胸主动脉CD36mRNA表达的相关性分析 |
| 3.16 对胸主动脉形态学的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 实验动物模型的讨论 |
| 4.1.1 本实验对实验动物模型的要求 |
| 4.1.2 T2DM动物模型的讨论 |
| 4.1.3 AS动物模型的讨论 |
| 4.1.4 阳性对照药的确定 |
| 4.2 T2DM大血管病变与血管内皮结构及功能紊乱 |
| 4.2.1 T2DM大血管病变的流行病学研究 |
| 4.2.2 DM大血管病变血管内皮结构及功能紊乱的发病机制 |
| 4.2.3 DM大血管病变相关基因的研究 |
| 4.2.4 DM大血管病变的病理改变 |
| 4.3 中医对DM大血管病变的认识 |
| 4.3.1 中医对DM大血管病变病因的认识 |
| 4.3.2 DM大血管病变的病机 |
| 4.3.3 DM大血管病变的临床表现 |
| 4.3.4 DM大血管病变的辨证论治 |
| 4.4 参芪复方对T2DM大血管病变血管内皮保护的中医机制 |
| 4.4.1 参芪复方的组方原理 |
| 4.4.2 现代药理学的研究成果 |
| 4.4.3 参芪复方对T2DM大血管病变血管内皮保护的中医机制 |
| 4.5 参芪复方对T2DM大血管病变血管内皮保护的作用机理 |
| 4.5.1 降低血清IL-6的含量 |
| 4.5.2 降低血清ICAM-1的含量及抑制主动脉ICAM-1mRNA的表达 |
| 4.5.3 升高血清NO和NOS含量,降低血浆ET-1含量 |
| 4.5.4 降低血清ox-LDL的含量 |
| 4.5.5 降低主动脉CD36mRNA的表达 |
| 4.5.6 减轻胰岛素抵抗 |
| 4.5.7 对GSP的影响 |
| 4.5.8 参芪复方对GK大鼠摄食量、饮水量、体重及精神状况的影响 |
| 5 问题与展望 |
| 5.1 存在的问题 |
| 5.1.1 动物模型方面 |
| 5.1.2 实验方面 |
| 5.2 对未来的展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述：中医药对血管内皮形态和功能影响的研究进展 |
| 附图 |
| 附件一：在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附件二：申明 |
四、Induction of cyclooxygenase-2 by insulin in cultured rat vascular smooth muscle cells（论文参考文献）
- [1]基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究[D]. 汪戎锦. 吉林大学, 2021(01)
- [2]基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制[D]. 王耀振. 吉林大学, 2021(01)
- [3]七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩[D]. 杨绍忠. 山东大学, 2021(11)
- [4]葛根素对中风高危因素糖尿病血管内皮功能障碍的作用机制研究[D]. 陈梅. 广州中医药大学, 2020(06)
- [5]IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究[D]. 曾志刚. 上海体育学院, 2019
- [6]运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响[D]. 杨红. 国家体育总局体育科学研究所, 2014(02)
- [7]齐墩果酸对大鼠血管平滑肌细胞中血红素氧合酶1表达的影响及其作用机制的研究[D]. 冯健. 第三军医大学, 2011(12)
- [8]黄芪甲苷对糖尿病血管重构的保护作用及其相关机制研究[D]. 袁巍. 浙江大学, 2009(07)
- [9]《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引[J]. 冷怀明. 第三军医大学学报, 2002(12)
- [10]参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变血管内皮细胞保护的实验研究[D]. 谢毅强. 成都中医药大学, 2006(12)