一、核仁素在细胞增殖与细胞凋亡中的作用（论文文献综述）
程凤[1]（2021）在《细胞表面核仁素交联诱导肿瘤细胞凋亡研究》文中认为恶性肿瘤（癌症）由于生长快、易转移的特点,其发病率和死亡率一直居高不下,已经成为严重威胁人类健康的主要公共卫生问题之一。传统的治疗手段,如手术、放疗和化学药物治疗等方法往往存在靶向性差、副作用大、肿瘤组织切除不完全、复发率高等问题。因此,发展新型癌症治疗方式,在不影响正常组织的情况下有效杀死肿瘤细胞具有重要意义。近年来,利用外部刺激诱导细胞表面受体相互聚集,激活细胞内凋亡信号通路,重建肿瘤细胞的凋亡信号传递系统,触发肿瘤细胞凋亡,成为癌症治疗中一种新型有力的手段。但目前所研究的细胞膜受体种类十分有限,并且大部分研究只针对某一种疾病,不具备通用性,无法实现广谱的抗肿瘤治疗。此外,用于受体聚集调控的材料往往存在作用时间短、稳定性差、易内吞等问题。因此,本文从发展长效稳定的新型抗肿瘤策略的角度出发,开发了一种基于肿瘤细胞表面过表达的核仁素交联诱导细胞凋亡的策略实现体内外抗肿瘤治疗。通过构建多功能探针GC-chol-aptcDNA,长时间锚定在细胞膜上,有效限制膜受体相对运动,并诱导受体形成交联状态,实现集膜蛋白实时成像、诱导肿瘤细胞凋亡实现抗肿瘤治疗等多重作用。具体包括以下两方面的工作:（1）探针制备及长时间细胞膜成像:我们以乙二醇壳聚糖（glycol chitosan,GC）为高分子骨架,通过酰胺反应在侧链接枝荧光染料Cy3标记的核酸适配体（Cy3-aptamer）和胆固醇（cholesterol）,形成了中间产物GC-chol-apt。为了降低因探针在细胞膜上的非特异性吸附作用带来的假阳性信号,引入了猝灭剂BHQ2标记的短链互补序列cDNA,通过与aptamer部分杂交形成双链结构,构建了一种柔性“多抓手”复合物GC-chol-apt-cDNA。通过Cy3荧光猝灭、凝胶电泳、水合粒径及原子力显微镜等手段表明我们成功合成了GC-chol-apt-cDNA,其结构呈球形,粒径约为500nm。细胞膜染料及核仁素抗体的荧光共定位成像实验表明该探针能特异性靶向肿瘤细胞表面核仁素,使cDNA被竞争下来,Cy3荧光恢复,实现了准确、特异性的靶向成像肿瘤细胞表面核仁素。更重要的是,该结构通过aptamer的亲和作用及cholesterol的疏水作用锚定到细胞膜上,有效地抑制了细胞内吞作用,能长时间稳定存在于细胞表面。流式细胞术及荧光共聚焦成像结果表明,与单独的aptamer相比,GC-chol-apt与细胞的亲和力提高了近100倍,并且能稳定锚定在细胞膜上长达6小时,为长时间细胞膜成像提供了有力工具。（2）核仁素交联诱导体内外肿瘤细胞凋亡及作用途径分析:上述制备的GCchol-apt-cDNA“多抓手”探针可以通过aptamer捕获邻近部位的核仁素,利用GC聚合物骨架使其距离靠近形成交联状态,并通过胆固醇的多位点膜锚定,使核仁素长时间被锚定在细胞膜上。更重要的是,这种由GC-chol-apt-cDNA介导的核仁素交联作用能特异性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞的影响较小。借助于较好的肿瘤细胞抑制作用,我们进一步通过活死细胞双染、流式细胞仪凋亡定量分析以及细胞核荧光成像等实验在细胞水平上证实了GC-chol-apt-cDNA以剂量和时间依赖的方式诱导肿瘤细胞发生凋亡。实验结果表明探针浓度为100μg/m L时,其活细胞存活率仅为21%;在与探针作用8小时后,细胞核出现皱缩、破裂的现象,完整的细胞核结构破坏,说明该探针能有效杀伤肿瘤细胞,在细胞水平实现了肿瘤细胞凋亡。通过小鼠肿瘤模型,我们进一步在活体动物上评估GC-chol-apt-cDNA的抗肿瘤活性。借助活体荧光成像、离体肿瘤组织免疫组化染色以及肿瘤生长曲线分析,我们发现与对照组相比,GC-chol-apt-cDNA能有效地靶向肿瘤部位,诱导细胞凋亡并抑制其增殖活性,具有较好的抗肿瘤作用,其抑制率可高达81%左右。最后通过免疫荧光成像和蛋白质免疫印迹技术,我们发现细胞膜表面核仁素交联能有效地介导细胞内钙离子浓度升高,导致线粒体膜电位下降,从而释放细胞色素C并激活下游半胱氨酸蛋白酶的活性,诱导肿瘤细胞凋亡。基于此,我们认为GC-chol-apt-cDNA能通过线粒体途径激活凋亡信号通路,并成功诱导体内外肿瘤细胞凋亡。总之,我们构建的“多抓手”复合探针GC-chol-apt-cDNA能有效地靶向肿瘤细胞,实现长效的膜蛋白成像,并通过诱导细胞表面核仁素交联,进而激活细胞内线粒体相关凋亡信号,最终抑制体内外肿瘤细胞的增殖。该方法可以作为一种新的诱导细胞凋亡手段,为肿瘤治疗提供新思路。本论文创新点在于:（1）首次提出核仁素交联诱导肿瘤细胞凋亡的策略实现抗肿瘤治疗,将核仁素蛋白的空间位置调控与细胞内信号级联反应相结合,突破了核仁素在抗肿瘤治疗中作为药物靶点及运载体等常规模式。（2）本方法制备的探针具有合成简单、作用持久、选择性强等优点,有望成为一种新型的、通用的抗肿瘤治疗策略。
姜永健[2]（2020）在《基于石墨烯的共振能量转移在细胞凋亡成像分析中的应用》文中提出细胞凋亡是一个高度调控和复杂的细胞程序性死亡过程,它对细胞的生长和增殖具有极其重要的意义。细胞凋亡异常会导致许多疾病,如神经退行性疾病、自身免疫性疾病和癌症,因此建立一系列简单、快速、灵敏的细胞凋亡相关物质的分析检测方法对揭示细胞凋亡过程以及疾病诊疗具有重要意义。基于共振能量转移（resonance energy transfer,RET）的荧光成像分析具有简单、直观、灵敏和高时空分辨率等优点,已经被广泛应用于生化分析和临床诊断中。然而传统的RET体系往往一个供体对应一个受体,RET效率较低。作为一种新型的二维碳纳米材料,氧化石墨烯（graphene oxide,GO）不仅具有毒性低、比表面积大、易功能化等优点,而且包含大量的共轭π电子,可以通过氢键和π-π堆积吸附单链DNA,有效猝灭其表面的荧光团,因此以GO为RET体系中的能量受体,建立一系列简单、灵敏、准确的RET分析方法,对于细胞凋亡的实时监控具有重要意义。理想情况下,单链DNA可以被GO稳定吸附,仅可以通过识别目标物从GO表面解吸附。然而,在物理吸附系统中,单链DNA与GO的相互作用往往易受生物分子竞争的影响,从而造成假阳性信号。基于此,本文具体开展了一下三个方面的研究内容:1.DNA/氧化石墨烯能量转移纳米复合探针用于miR-21的精准检测。单链DNA通过物理吸附与GO结合,容易被复杂生物样品中的非靶分子解吸附,产生假阳性信号。基于单个碱基水平上嘌呤比嘧啶能被GO更紧密得吸附,我们以GO为受体,将FAM修饰的探针DNA（miR-21的互补DNA序列）与桥染料Cy3修饰的捕获DNA（cDNA）杂交形成双链DNA,通过聚腺嘌呤（poly-adenine,poly-A）将该双链DNA稳定地锚定在GO上,以提高GO物理吸附DNA探针的抗干扰能力。在FAM的激发光下,FAM与Cy3之间发生FRET,同时Cy3与GO之间会发生LrRET,从而导致FAM的荧光猝灭。随着miR-21浓度的增加,FAM的荧光逐渐恢复,并在1-400 nM浓度范围内呈现良好的线性关系,检测限为0.668nM（3σ/k）。当在复杂生物样品中检测时,可以利用FAM与Cy3之间的FRET,通过观察Cy3信号是否恢复来判断纳米探针是否发生非特异性解吸附,实现对细胞凋亡相关miR-21的高准确度检测,避免了非特异性吸附造成的假阳性信号。2.DNA/氧化石墨烯双重能量转移纳米复合探针用于细胞凋亡相关miRNA的低背景精准监测。传统的RET体系往往一个供体对应一个受体,供受体之间能量转移效率低,导致这些RET纳米探针在细胞成像分析中存在背景信号高、灵敏度低的问题。基于GO和黑洞猝灭剂（Black hole quencher,BHQ）都是有效的猝灭剂,我们构建了基于GO和BHQ的单供体-双受体RET纳米探针,提高了能量转移效率,降低了探针的背景。另一方面,将该探针与poly-A抗干扰策略相结合,利用poly-A与GO的较强的结合能力,将双链DNA较为稳定地吸附在GO表面,作为探针抗干扰的第一重保险。同时,利用供体与BHQ之间的FRET,最大限度地降低了由于可能的poly-A DNA非特异性解吸导致的假阳性信号,作为探针抗干扰的第二重保险,有效提高了探针在复杂生物样品中检测时的准确度。基于GO和BHQ的双受体设计以及GO和poly-A的双保险设计,该探针实现了对细胞凋亡相关miR-630和miR-21的低背景、高准确度和高选择性同时监测,其中miR-630和miR-21的线性范围分别为0.5-150 nM和0.5-100 nM,检测限分别为0.25 nM（3σ/k）和0.12 nM（3σ/k）。值得注意的是,该纳米探针首次实现了原位动态监测A549细胞凋亡过程中miR-630的变化,发现在凋亡开始的120 min,miR-630的表达呈上调趋势。该方法简单快捷,有很大的潜力用于复杂生物样品中各种标志物的精准检测和成像。3.DNA/氧化石墨烯双重能量转移纳米复合探针用于癌细胞的靶向成像及细胞凋亡过程的精准监测。在低背景、高准确性和高选择性DNA/GO双重能量转移纳米复合探针的基础上,为赋予探针在对癌细胞的靶向成像能力,我们将Atto425修饰的核仁素核酸适配体（AS1411）和BHQ1-DNA杂交,并通过poly-A将该双链DNA负载在GO上。当AS1411识别癌细胞表面过表达的核仁素后,AS1411从GO表面脱离,Atto425的荧光恢复,从而实现了癌细胞的精准靶向成像。同时,将Cy5修饰的细胞色素c（cytochrome c,Cyt c）核酸适配体和BHQ2-DNA杂交,通过poly-A将双链DNA负载在石墨烯上。随着Cyt c浓度的增加,Cy5的荧光逐渐恢复,并在0.05-1μM浓度范围内呈现良好的线性关系,检测限为40 nM（3σ/k）。通过实时监测癌细胞凋亡过程中Cyt c的变化,实现了监控细胞凋亡的目的。该设计应用于细胞凋亡成像分析中,有望用于癌症的精准诊断及细胞凋亡相关抗癌药物的评价与筛选。综上所述,本研究以细胞凋亡为研究对象,以共振能量转移为技术手段,构建了以GO为能量受体的纳米探针。通过在石墨烯物理吸附DNA能量转移纳米探针中引入poly-A和桥染料Cy3,提高了此类物理吸附探针探针的抗干扰能力,实现对细胞凋亡相关miR-21的高准确度检测。通过构建基于GO-BHQ的单供体-双受体RET纳米探针,提高了能量转移效率,降低了探针的背景。同时在引入poly-A的基础上,通过BHQ对荧光染料的有效猝灭,避免了由于可能的poly-A DNA非特异性解吸导致的假阳性信号,进一步提高了这类物理吸附探针在分析检测中的准确度。该方法被成功用于对细胞凋亡相关的miR-630和miR-21的低背景、高准确性、高选择性同时监测和成像。在GO-BHQ的单供体-双受体RET纳米探针设计的基础上,我们在探针中引入了核仁素和Cyt c的核酸适配体,并应用于细胞凋亡分析检测中,可用于癌症的精准诊断及细胞凋亡过程的精准监测。本研究具有普适性,通过适当替换探针,便能够应用于其他靶物的分析中,同时也为低背景、高准确度能量转移体系的构建和细胞凋亡相关标志物的分析检测提供了新思路。
孙翔玉[3]（2019）在《基于功能性适配体修饰的磁性纳米粒子载药体系构建及抗肿瘤活性研究》文中指出近年来,人类健康依然受到癌症的极大威胁,恶性肿瘤的发病率居高不下,并趋向年轻化。由于癌细胞增殖迅速且容易在体内扩散,早期的准确诊断和有效治疗,有助于提高癌症病人的存活率并减少病人的痛苦。手术、化疗和放疗等许多治疗手段被广泛用于临床癌症治疗。然而,早期未转移的实体瘤通常用手术治疗进行切除,但是已转移的肿瘤和非实体瘤不适用。同样的,化疗药的全身毒性、耐药性和低选择性常常导致治疗的结果差强人意。要解决这些问题,就迫切需要制定新的治疗方案来提高治愈率和减少癌症治疗过程中带来的副作用和耐药情况。近年的研究表明,核酸适配体可以成功运载小分子并对肿瘤细胞表面的过表达蛋白有特异性识别和结合功能,可作为靶标用于药物运递送。同时,超顺磁性纳米粒子尺寸很小,表面易于修饰,因此可以发挥包括药物递送,治疗和成像在内的多种功能,在多功能磁共振成像,靶向药物递送,磁热疗中被广泛使用。本论文以表面修饰的超顺磁纳米粒子为载体,利用适配体在其表面进行功能化修饰,再固载化疗药物道诺霉素（DNM）和光敏剂四甲基吡啶卟啉（TMPyP）,成功构建了具有磁/适体双重靶向功能的、化学疗法与光动力疗法协同作用的药物递送体系,并在体外和细胞学水平上评估该复合物的稳定性、靶向性、敏感型递送效率、光敏性、迁移抑制和细胞毒性等,具体研究内容如下:首先利用COOH@SPION和氨基化的Apt-S8/Apt-gc34核酸适配体构建出一种新型靶向递送系统,详细步骤如下:（一）构建DNM&TMPyP&Apt-S8/Apt-gc34@SPION递送系统并进行体外抗肿瘤活性检测利用EDC/NHS反应将COOH@SPION与氨基化的Apt-S8/Apt-gc34结合,利用AS1411适配体的G-四链体结构和尾端富GC结构的发夹型结构将药物TMPyP和DNM分别负载到适配体修饰的磁性纳米粒子上。研究结果表明,载药体系极易被肿瘤细胞摄取,其中的DNM的在肿瘤细胞内部存在pH依赖性释放;核仁素适配体（AS1411）封闭实验证明载药体系通过适配体AS1411与穿梭蛋白核仁素特异性结合内化进入肿瘤细胞;避光实验结果证实TMPyP光照后产生的ROS起到了抑制肿瘤增殖作用,进一步细胞凋亡和蛋白免疫印迹实验表明,在光照条件下诱导了细胞凋亡,凋亡过程中的相关蛋白bcl-2和c-myc的表达均下调。（二）构建DNM&TMPyP&Apt-PSA&PEI@SPION递送系统并进行体外抗肿瘤活性检测在上述研究的基础上,将适配体AS1411与p-gp siRNA通过GC G碱基互补自组装成DNA-RNA杂交链)（Apt-PSA）。利用PEI修饰的SPION带正电荷的特点,将上述杂交链Apt-PSA通过静电力作用复合到SPION表面,进一步构建了DNM&TMPyP&Apt-PSA&PEI@SPION新型靶向递送系统。随后的RT-PCR实验与蛋白免疫印迹实验表明,MCF-7/ADR细胞中耐药蛋白p-gp表达量明显降低,证明p-gp siRNA对MDR1基因的有效沉默。（三）构建DNM&TMPyP&PND&Bio-gc34&PSA&PEI@SPION递送系统并进行体外抗肿瘤活性检测将生物素修饰的单链寡核苷酸gc34（Bio-gc34）、p-gp siRNA分别与PEI修饰的SPION通过静电力作用复合到SPION表面。将具有增敏作用的PND、DNM、TMPyP负载到退火后的Bio-gc34上,进一步构建了DNM&TMPyP&PND&Bio-gc34&PSA&PEI@SPION新型靶向递送系统。通过细胞毒性实验可以证实与单纯的DNM药物相比,DNM&TMPyP&PND&Bio-gc34&PSA&PEI@SPION对MCF-7/A DR的IC50存在显着性差异。RT-PCR实验与蛋白免疫印迹实验结果表明,体系作用后,MCF-7/ADR细胞中耐药蛋白p-gp表达量明显降低,证明p-gp siRNA能够有效沉默MDR1基因。本实验结果验证了DNM&TMPyP&PND&Bio-gc34&PSA&PEI@SPION系统多疗法协同作用,减少了化疗药DNM的用量;PND能够竞争性的与p-gp蛋白结合,减少了DNM被转运出细胞的概率,保证DNM在细胞内的有效浓度;同时联合p-gp siRNA下调了MDR1基因表达,达到三重抑制p-gp蛋白的作用,为耐药乳腺癌的治疗研究提供了一种新思路和新方法。
梅序桥[4]（2016）在《核仁素参与淋巴瘤细胞株CA46耐药机制的研究》文中认为目的:肿瘤细胞抵抗化疗药物的作用机理比较复杂,是多种相关基因联合表达,通过细胞不同水平层次调控的复杂生物学过程,一般涉及到细胞膜上表达的耐药蛋白介导化疗药物外排、细胞内凋亡水平降低和抗凋亡水平升高、细胞增殖周期调控改变等方面。核仁素作为细胞代谢过程中的重要的多功能蛋白,具有调节染色体复制、参与核糖体形成及RNA转录、调节某些m RNA的翻译以及特定micro RNA形成等功能。本课题通过研究核仁素（Nucleolin、NCL、C23）在CA46细胞上的表达,探讨核仁素在CA46细胞药物耐受方面的作用机制。方法:1、通过慢病毒介导的转染方式,建立RNAi沉默核仁素的CA46细胞株（CA46-C23-knockdown,CA46-C23-KD）以及核仁素过表达的CA46细胞株（CA46-C23-overexpression,CA46-C23-OE）这两种NCL表达差异的细胞模型,同时,通过长期的低浓度阿霉素的培养诱导,建立多药耐药细胞株CA46/ADR。2、采用细胞增殖法（MTS法）分别检测CA46-C23-KD、CA46-C23-OE和CA46/ADR三种NCL差异性表达的细胞模型对阿霉素的增殖半数抑制率（IC50）。3、通过放线菌素D实验检测CA46-C23-KD、CA46-C23-OE细胞株中BCL-2m RNA的稳定性变化,用RNA-蛋白质免疫共沉淀法（RIP）在CA46细胞上研究NCL与BCL-2 m RNA的相互作用。4、采用流式细胞周期分析术检测CA46-C23-KD周期表达,蛋白免疫印迹法检测CA46-C23-KD、CA46-C23-OE细胞株中cyclin D3、cyclin E1的表达,蛋白质免疫共沉淀技术（CO-IP）研究C23与cyclin D3、cyclin E1之间的相互作用。5、采用蛋白质免疫共沉淀和RNA-蛋白质免疫共沉淀法研究NCL对多药耐药蛋白P-gp以及其基因MDR1 m RNA的相互作用机制。6、采用实时荧光PCR技术检测CA46-C23-KD、CA46-C23-OE和CA46/ADR三种细胞模型中micro RNA-221的表达差异变化。RIP检测C23与pri-mi RNA-221的相互作用。结果:1、与阴性对照组CA46-C23-KNC（CA46-C23-knockdown negative control）相比,CA46-C23-KD中NCL m RNA和C23蛋白表达下调。与阴性对照组CA46-C23-ONC（CA46-C23-overexpression negative control）相比,CA46-C23-OE中NCL m RNA和C23蛋白表达明显上调,CA46/ADR细胞株中多药耐药蛋白P-gp和C23蛋白表达均出现上调。2、CA46-C23-KD细胞株对阿霉素的IC50为0.147±0.02μg/ml,明显低于对照组0.301±0.04μg/ml（p<0.05）。而CA46-C23-OE细胞株的阿霉素的IC50为0.679±0.06μg/ml,明显高于其对照0.383±0.08μg/ml（p<0.05）。CA46/ADR对阿霉素的IC50为1.874±0.13μg/ml,而CA46对阿霉素的IC50为0.215±0.05μg/ml。3、CA46-C23-KD中BCL-2m RNA稳定性低于CA46-C23-KNC,BCL-2m RNA的半衰期由4.8±0.15小时缩短至3.2±0.18小时,CA46-C23-OE中BCL-2m RNA稳定性明显高于CA46-C23-ONC,BCL-2 m RNA的半衰期由5.2±0.21小时延长到6.9±0.13小时。RIP实验显示C23蛋白能直接结合BCL-2 m RNA。4、与CA46-C23-KNC相比,CA46-C23-KD的G0/G1期比例增大,S期比例减少且cyclin D3表达升高,cyclin E1表达降低。与CA46-C23-ONC相比,CA46-C23-OE中cyclin E1表达升高。同时,CO-IP显示C23蛋白与cyclin D3、cyclin E1能直接结合。5、在CA46/ADR细胞中,NCL与P-gp表达均升高,但免疫共沉淀实验显示C23蛋白与P-gp蛋白无直接的相互作用,通过蛋白质-RNA共沉淀也未能证实C23蛋白与MDR1 m RNA能直接结合。6、micro RNA-221在NCL过表达的CA46细胞株和CA46/ADR细胞株中表达升高,而在NCL沉默的细胞株中表达下降。RIP实验显示C23蛋白能直接结合pri-mi RNA-221。结论:1、C23蛋白与BCL-2m RNA相互结合,通过增加BCL-2m RNA的稳定性来增加BCL-2m RNA转录,从而增加CA46细胞中BCL-2蛋白的表达,通过BCL-2的抗凋亡机制参与针对阿霉素的抵抗作用。2、C23蛋白与cyclin D3、cyclin E1直接结合,通过调节cyclin D3、cyclin E1的表达,加快S期进程来抵抗阿霉素对CA46细胞的作用。3、C23蛋白与MDR1/P-gp之间有正相关性,但CO-IP和RIP实验未能发现C23蛋白与P-gp蛋白或MDR1 m RNA能直接结合。4、C23蛋白通过直接结合pri-mi RNA-221来调控micro RNA-221的表达,从而通过调控其靶基因的表达抵抗药物的作用。
彭林辉[5]（2015）在《MARVELD1与核仁素相互作用及其与DNA损伤关系的研究》文中研究说明癌症的发生与癌基因、抑癌基因以及其他相关基因具有十分密切的关系。MARVELD1基因是本实验室在前期研究中发现的一个新的抑癌基因。MARVELD1（MARVEL domain containing 1）基因因含MARVEL（MAL and related proteins for vesicle trafficking and membrane link）结构域,故定名为MARVELD1。研究结果表明,MARVELD1具有抑制肿瘤增殖并导致细胞周期阻滞等作用,与多种基因和蛋白具有相互作用。前期研究结果显示,MARVELD1蛋白可能与核蛋白核仁素（Nucleolin,C23）具有相互作用。MARVELD1与核仁素均为定位于细胞核的蛋白,并且都参与了DNA损伤修复。本文以诱导DNA损伤为切入点,选用多种实验方法从不同角度研究分析了MARVELD1与核仁素的相互作用情况及二者的关系。首先,本文采用人宫颈癌细胞系He La细胞完成了MARVELD1与核仁素的共定位分析,进而,研究利用免疫共沉淀（Co-IP）技术和GST pull-down技术确认了MARVELD1与核仁素的相互作用,并通过重组体技术构建核仁素的重组截短体,明确了二者的结合结构域。随后,本文采用Western Blotting技术探讨MARVELD1与核仁素在诱导DNA损伤后的表达变化。最后,本文还通过亚细胞成分分离技术及si RNA干扰技术,研究了MARVELD1对核仁素亚细胞定位的影响。结果表明,MARVELD1与核仁素在DNA损伤以后共定位非常明显,二者确实具有相互作用,并且此相互作用在DNA损伤修复过程中有一个动态变化过程。MARVELD1与核仁素在DNA损伤修复过程中的表达趋势不一致,核仁素表达增高时MARVELD1已经开始表达下降。干扰MARVELD1结果表明,MARVELD1对核仁素亚细胞定位有一定影响。综上所述,本文确认了MARVELD1与核仁素的相互作用情况并明确了二者的结合结构域,研究显示了二者对DNA损伤都有明显响应,说明MARVELD1与核仁素在DNA损伤修复过程中具有一定作用,且二者有一定相互作用关系,这种关系可能是通过MARVELD1影响核仁素的亚细胞定位来实现的。
张楠,杨洪彩,胡红,郑珊,敬海明,周春艺,谭壮生,李煜,赵超英,马玲,宁钧宇,李国君[6]（2015）在《鱼藤酮对SH-SY5Y细胞中核仁素、α-突触核蛋白和DJ-1相互作用的影响》文中研究说明目的探索在鱼藤酮（Rotenone）染毒的SH-SY5Y细胞中,核仁素（Nucleolin,NCL）与两种已知与帕金森病（Parkinson Disease,PD）相关的基因α-Synuclein和PARK7（Parkinson disease protein 7,又称DJ-1）编码的蛋白α-突触核蛋白（α-Synuclein,α-Syn）和DJ-1的相互作用。方法采用MTT法检测鱼藤酮（20、100和500 nmol/L）染毒SH-SY5Y细胞24 h和3 d后对细胞存活率的影响;采用免疫荧光染色法（Immunofluorescent staining,IF）分别染色3种蛋白,在共聚焦显微镜下观察蛋白的亚细胞定位,分析3种蛋白在空间上的关系;采用免疫沉淀法（Immunoprecipitation,IP）和免疫蛋白印记（Western Blot,WB）法检测染毒前后核仁素分别与DJ-1和α-Synuclein的相互作用。结果用鱼藤酮（20、100和500 nmol/L）染毒SH-SY5Y细胞24 h后,各个染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异没有统计学意义（P>0.05）;染毒3 d后20 nmol/L染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异没有统计学意义（P>0.05）,而100和500 nmol/L染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。激光共聚焦分析显示DJ-1和核仁素分布于SH-SY5Y细胞核和细胞质中,而α-Synuclein分布于细胞质中,核仁素与DJ-1和α-Synuclein都有共定位。鱼藤酮染毒SH-SY5Y细胞前后,核仁素分别与DJ-1和α-Synuclein免疫共沉淀后,免疫蛋白印迹结果显示核仁素与二者均可形成蛋白复合体。结论在SH-SY5Y细胞中核仁素与DJ-1和α-Synuclein都存在蛋白-蛋白相互作用,染毒鱼藤酮后核仁素与DJ-1和α-Synuclein的相互作用并没有消失,提示核仁素可能是帕金森病相关蛋白。
黄晓平[7]（2014）在《组织激肽释放酶结合蛋白细胞膜受体的分离鉴定与其抗肿瘤分子机制的研究》文中进行了进一步梳理研究背景细胞因子的胞内功能发挥，一般需要与细胞膜受体结合后经特定信号传导通路进行，或由受体介导入胞后发挥其生物学活性。Kallistatin（Kal）是一种组织激肽释放酶结合蛋白，也是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有多种生物学功能，如降血压、舒张血管、抗炎、抗氧化、抗纤维化、促进新生内膜的形成、抑制血管生成和肿瘤的生长等。目前发现的Kal膜受体有肝素硫酸蛋白聚糖（HSPGs），介导Kal的抗新生血管生成作用；有低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6），介导Kal的抗肿瘤作用；还有Kruppel样转录因子4（Kruppel-like factor4，KLF4），介导Kal的抗炎作用。这三个Kal受体的发现，在一定程度上解释了Kal部分功能，但尚不足以阐释Kal的多功能特点。我们判断蛋白，Kal的多功能应该是多靶点多通路作用的结果，应该还有未被发现的Kal膜受体。研究目的分离、鉴定Kal细胞膜结合蛋白，验证细胞膜结合蛋白在Kal抗血管生成和抗肿瘤中的作用，为揭示Kal的多功能性以及涉及的分子机制等奠定基础。研究方法（1）制备重组人Kal（rhKal），利用Pull-Down、LC-MC/MC、免疫共沉淀、免疫荧光等技术分离、鉴定rhKal细胞膜结合蛋白。（2）利用siRNA、抗体封闭等技术，分析rhKal膜结合蛋白在rhKal抗血管生成和抗肿瘤作用中的作用。（3）利用流式细胞仪、Western Blotting等方法，分析细胞膜结合蛋白对介导rhKal入胞的作用。（4）采用细胞培养及分析方法，分析rhKal与候选rhKal细胞膜结合蛋白所涉及的信号通路。（5）利用皮下移植瘤模型，分析候选rhKal细胞膜结合蛋白介导rhKal的抗血管生成和抗肿瘤活性的分子机制。研究结果（1）首次发现核仁素、整合素β3、金属基质蛋白酶2（MMP2）、血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）、VEGFR2为rhKal细胞膜结合蛋白。（2）首次发现核仁素是介导rhKal入胞的重要受体，并参与rhKal体内外抗肿瘤新生血管形成的过程。（3）首次发现核仁素介导rhKal抗血管生成的分子机制是：rhKal通过而下调蛋白激酶CK2的表达抑制核仁素磷酸化，从而抑制由VEGF和碱性成纤维细胞因子（bFGF）所诱导的血管内皮细胞增殖。（4）首次发现整合素β3可以介导rhKal的抗肿瘤活性。（5）首次发现整合素β3介导rhKal抗肿瘤活性的分子机制为：rhKal抑制整合素β3、黏着斑激酶（FAK）、类固醇激素受体共活化因子（Src）的磷酸化。研究结论（1）核仁素是介导rhKal入胞的受体，并参与rhKal的体内外抗肿瘤新生血管形成和抗肿瘤活性。（2）整合素β3是介导rhKal抗肿瘤活性的重要受体。
孙雪萍[8]（2013）在《JNK抑制剂及RNA干扰核仁素对U251细胞增殖与凋亡的影响研究》文中认为脑胶质瘤是颅内最常见的原发恶性肿瘤，具有发病率高、复发率高、死亡率高和治愈率低的特点，目前对其病因、发病机制及生物学特性的深入探讨以及寻找新的治疗策略，是亟待解决的热点和难题。基因治疗能针对肿瘤组织中特有的基因变异进行修复或促使肿瘤细胞凋亡，具有广阔的应用前景。由于脑内的神经元和大部分其它细胞为静止期细胞，分裂活跃的细胞主要为肿瘤细胞，因此，恶性脑胶质瘤的基因治疗的靶目标性强。核仁素（NCL）是真核细胞核仁中一种多功能磷酸蛋白，其表达水平与细胞分裂的速率呈正相关，常被用来作为肿瘤细胞增殖程度的一种非特异性指标。目的：通过RNA干扰核仁素和应用JNK抑制剂SP600125，观察对U251细胞增殖和凋亡的影响，探讨其可能机制，为神经胶质瘤的临床治疗新途径的研究提供实验基础和科学的理论依据。方法：（1）采用浓度为10,20,30,40,50μM的JNK抑制剂SP600125分别处理人脑胶质瘤细胞株U251细胞0h,24h,48h和72h，利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖水平，取合适值作为实验浓度进行Western blot和Immunocytochemistry检测P-c-jun和核仁素蛋白表达水平。（2）将核仁素干扰质粒：NCL-234，NCL-1509，NCL-1732，NCL-1825和阴性对照质粒转入U251细胞，然后采用real-time PCR和Western blot方法分别检测核仁素的mRNA和蛋白水平表达情况，筛选出有效干扰质粒。（3）将实验分为转染阴性质粒对照组、RNA干扰核仁素组、转染阴性质粒联合JNK抑制剂处理组和干扰联合JNK抑制剂组，进行Western blot检测相关凋亡蛋白Bcl-2，bax的表达变化。结果：（1） MTT结果显示，不同浓度SP600125分别处理细胞24,48,72h后，处理组U251细胞与对照组相比，培养24h时各组之间细胞的增殖没有明显变化，48h之后当浓度大于40μM时SP600125对细胞的抑制作用明显增强，随着SP600125浓度增加和作用时间延长，细胞增殖抑制越明显，其抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性；Western blot检测显示P-c-jun和核仁素蛋白表达呈相同下调趋势；免疫荧光检测核仁素发生明显的从胞核向胞浆的移位，Hoechst33242染核后荧光显微镜观察表明，JNK抑制剂处理48h之后，部分细胞核出现明显的凋亡特征，如核体积变小、固缩，部分细胞核裂解为碎块，呈致密浓染的颗粒状荧光。（2）荧光显微镜观察，质粒成功转入U251细胞；real-time PCR、Western blot结果显示，干扰质粒能不同程度下调NCL mRNA水平及其蛋白表达，其中干扰质粒NCL-234作用效果最为显着。（3）结果显示，RNA干扰核仁素组，转染阴性质粒联合JNK抑制剂处理组，干扰联合JNK抑制剂处理组与转染阴性质粒组相比，细胞凋亡明显，Bcl-2表达不同程度减少，Bax表达则相应增高。结论：（1） JNK抑制剂能够抑制U251细胞活性并促进其凋亡，JNK和核仁素共同参与U251细胞增殖抑制和凋亡过程。（2） NCL mRNA干扰能明显促进U251细胞凋亡，抑制JNK信号通路的激活可以显着降低U251细胞的增殖水平。提示核仁素下调是诱导U251细胞增殖抑制和凋亡的重要原因， SP600125通过特异性抑制JNK活性减少核仁素的表达，促进肿瘤细胞的凋亡，从而发挥抗肿瘤效应。
周方[9]（2013）在《核仁素（C23）在Ⅰ-Ⅲ期胃癌组织中的表达及临床意义》文中提出目的：核仁素（C23）在多种肿瘤细胞内过度表达,且已证明其在维持细胞的生长增殖及核仁的正常结构与功能等方面均发挥了重要作用。本实验旨在研究C23在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并初步探讨其表达与胃癌临床病理指标及预后的关系。方法：采用免疫组织化学PV-9000法检测124例胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中C23的表达,并分析其与临床病理特征的关系并研究其表达与预后的相关性。结果：C23主要表达于细胞核及胞浆。C23在胃癌组织中的表达显着高于癌旁正常组织（80.6%vs61.3%, P<0.05）。C23的表达与病人性别（P>0.05）、年龄（P>0.05）、肿瘤分化程度（P>0.05）、TNM分期（P>0.05）及Her-2状态（P>0.05）均无相关性,与肿瘤大小（P<0.05）及复发转移（P<0.05）有关。单因素生存分析显示,C23高表达的患者较低表达患者生存显着延长（3年生存率：78.3%vs51.2%）（log-rank, P=0.0075）。结论：多因素生存分析表明C23是患者术后生存时间的独立预后因子。C23可能在胃癌复发、转移及预后中发挥重要作用,可考虑作为胃癌临床评价肿瘤生物学行为及评估预后的指标。
崔俊成[10]（2012）在《核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63抑制作用的实验研究》文中认为第一部核仁素反义寡核苷酸的合成及功能鉴定目的：合成核仁素随机、正义和反义寡核苷酸序列,为研究核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用做准备。方法：（1）采用全硫代修饰合成核仁素随机、正义和反义寡核苷酸序列,利用阳离子脂质体将其包裹后转染进入体外培养的人骨肉瘤细胞MG-63中；（2）通过荧光显微镜观察寡核苷酸是否有效转染进入人骨肉瘤细胞MG-63内；（3） RT-PCR、Western Bloting检测转染核仁素反义寡核苷酸后人骨肉瘤细胞MG-63中核仁素mRNA及蛋白表达的变化。结果：（1）荧光显微镜下观察,可见约65%的细胞染上绿色荧光；（2） RT-PCR及Western Bloting检测转染核仁素反义寡核苷酸后人骨肉瘤细胞MG-63中核仁素mRNA及蛋白表达,结果显示：核仁素反义寡核苷酸抑制了人骨肉瘤细胞MG-63中核仁素mRNA和蛋白的表达,可使其表达水平下调。结论：（1）成功构建核仁素反义寡核苷酸；（2）有效地将核仁素反义寡核苷酸转染进入人骨肉瘤细胞MG-63中。第二部分核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63增殖抑制及诱导凋亡的实验研究目的：探讨核仁素反义寡核苷酸在抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖以及体外下调核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达与诱导细胞凋亡的作用。方法：（1）将人骨肉瘤细胞MG-63随机分为四组：对照组、转染随机寡核苷酸组、转染正义寡核苷酸组与转染反义寡核苷酸组;（2）采用阳离子脂质体介导的寡核苷酸技术将核仁素随机、正义和反义寡核苷酸转染进入人骨肉瘤细胞MG-63中；（3）用MTT法检测各组MG-63细胞的增殖率,并用Western Bloting和RT-PCR检测各组MG-63细胞中核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况；（4）用流式细胞术检测各组MG-63细胞的凋亡率。结果：（1）MTT检测各组MG-63细胞增殖率显示：核仁素反义寡核苷酸着抑制了人骨肉瘤细胞MG-63的增殖,与对照组、转染随机寡核苷酸组、转染正义寡核苷酸组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）；（2） Western Bloting和RT-PCR检测各组MG-63细胞中核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况,结果显示：转染反义寡核苷酸组与对照组、转染随机寡核苷酸组、转染正义寡核苷酸组相比较,核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）；转染随机寡核苷酸组、转染正义寡核苷酸组与对照组相比较,核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达无明显影响,差异无统计学意义（p>0.05）；（3）流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,结果显示转染反义寡核苷酸组与对照组、转染随机寡核苷酸组、转染正义寡核苷酸组相比较,细胞凋亡率增高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：（1）核仁素反义寡核苷酸能抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖；（2）核仁素反义寡核苷酸能诱导入骨肉瘤细胞MG-63凋亡。第三部分核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用目的：探讨核仁素反义寡核苷酸在抑制人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的生长以及在体内下调核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达与诱导细胞凋亡的作用。方法：（1）将人骨肉瘤细胞MG-63悬液的细胞浓度调整为1x108/ml,每只裸鼠右前腿背侧皮下注射0.2m1细胞悬液（细胞数为2x107/只）,建立人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤动物模型；（2）将构建成功的动物模型随机分为4组：对照组、随机寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、反义寡核苷酸组；（3）采用瘤旁注射的方式,随机寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、反义寡核苷酸组分别于瘤旁注射2mg/kg体重的随机、正义及反义寡核苷酸；对照组瘤旁注射等量生理盐水,每日1次,共15次,观察裸鼠及移植瘤的生长状态；（4）每3天以游标卡尺测量肿瘤1次,HE染色观察移植瘤组织学形态,免疫组化检测各组荷瘤鼠移植瘤组织中核仁素及Bcl-2的表达情况,Western Bloting和RT-PCR检测各组荷瘤鼠移植瘤组织中核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达变化情况,流式细胞术检测各组荷瘤鼠移植瘤组织细胞凋亡率。结果：（1）以人骨肉瘤细胞株MG-63成功构建人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤动物模型；（2）反义寡核苷酸组与对照组、随机寡核苷酸组、正义寡核苷酸组相比较,反义寡核苷酸组移植瘤体积明显小于对照组、随机寡核苷酸组及正义寡核苷酸组,差异有统计学意义（P<0.05）；（3）免疫组化检测各组荷瘤鼠移植瘤组织中核仁素及Bcl-2的表达情况,结果显示核仁素反义寡核苷酸在裸鼠体内能够抑制移植瘤组织中核仁素、Bcl-2的表达,与对照组、随机寡核苷酸组及正义寡核苷酸组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）,随机寡核苷酸组、正义寡核苷酸组与对照组相比较,移植瘤组织中核仁素、Bcl-2的表达无明显影响,差异无统计学意义（p>0.05）；（4） Western Bloting和RT-PCR检测各组荷瘤鼠移植瘤组织中核仁素、Bcl-2蛋白和]mRNA的表达变化情况,结果显示核仁素反义寡核苷酸在裸鼠体内能够抑制移植瘤组织中核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达,与对照组、随机寡核苷酸组及正义寡核苷酸组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）,随机寡核苷酸组、正义寡核苷酸组与对照组相比较,移植瘤组织中核仁素、Bcl-2蛋白和mRNA的表达无明显影响,差异无统计学意义（p>0.05）；（5）流式细胞术检测各组荷瘤鼠移植瘤组织细胞凋亡率,结果显示反义寡核苷酸组移植瘤组织细胞凋亡率明显高于对照组、随机寡核苷酸组及正义寡核苷酸组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：（1）核仁素反义寡核苷酸在体内能够抑制人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的生长；（2）核仁素反义寡核苷酸在体内能够下调移植瘤组织内核仁素的表达。
二、核仁素在细胞增殖与细胞凋亡中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、核仁素在细胞增殖与细胞凋亡中的作用（论文提纲范文）
（1）细胞表面核仁素交联诱导肿瘤细胞凋亡研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写符号对照表 |
| 第1章 论文选题依据 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 研究现状及存在的主要问题 |
| 1.2.1 细胞膜概述 |
| 1.2.2 细胞表面受体概述 |
| 1.3 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 |
| 1.3.1 研究目标 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 拟解决的关键问题 |
| 1.4 技术路线和研究手段 |
| 第2章 探针的制备及长时间细胞膜成像 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 GC-chol-apt-cDNA复合物的制备 |
| 2.2.4 GC-chol-apt-cDNA复合物的表征 |
| 2.2.5 Aptamer含量的测定 |
| 2.2.6 GC-chol-apt-cDNA特异性靶向细胞表面核仁素 |
| 2.2.7 GC-chol-apt-cDNA与细胞膜核仁素的亲和力考察 |
| 2.2.8 GC-chol-apt-cDNA细胞膜锚定稳定性考察 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 GC-chol-apt-cDNA复合物的合成及表征 |
| 2.3.2 Aptamer含量的测定 |
| 2.3.3 GC-chol-apt-cDNA特异性靶向细胞表面核仁素 |
| 2.3.4 GC-chol-apt-cDNA与细胞膜上核仁素的亲和力考察 |
| 2.3.5 GC-chol-apt-cDNA细胞膜锚定稳定性考察 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 核仁素交联诱导体内外细胞凋亡及作用途径分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 GC-chol-apt-cDNA复合物的制备 |
| 3.2.4 GC-chol-apt-cDNA介导的核仁素交联 |
| 3.2.5 细胞毒性考察 |
| 3.2.6 细胞水平凋亡效果评价 |
| 3.2.7 动物水平抗肿瘤效果评价 |
| 3.2.8 凋亡途径分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 GC-chol-apt-cDNA介导的核仁素交联 |
| 3.3.2 核仁素交联诱导细胞凋亡 |
| 3.3.3 细胞水平凋亡效果评价 |
| 3.3.4 动物水平抗肿瘤效果评价 |
| 3.3.5 凋亡途径分析 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 全文总结与展望 |
| 4.1 全文总结 |
| 4.2 论文创新点 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 科研成果 |
| 致谢 |
（2）基于石墨烯的共振能量转移在细胞凋亡成像分析中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状及发展动态分析 |
| 1.2.1 细胞凋亡的研究现状 |
| 1.2.2 共振能量转移及其在细胞凋亡中的应用 |
| 1.2.3 基于氧化石墨烯的共振能量转移在细胞凋亡中的应用 |
| 1.3 存在的主要问题 |
| 1.4 研究的出发点与研究目标 |
| 1.5 研究内容和技术路线 |
| 第二章 DNA/氧化石墨烯能量转移纳米复合探针用于mi R-21 的精准检测 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.2.3 探针的制备 |
| 2.2.4 荧光检测 |
| 2.2.5 细胞复苏和传代培养 |
| 2.2.6 细胞毒性考察 |
| 2.2.7 荧光显微成像 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 纳米探针的构建 |
| 2.3.2 miR-21的分析检测 |
| 2.3.3 探针的抗干扰能力及选择性 |
| 2.3.4 细胞内miR-21成像 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 DNA/氧化石墨烯双重能量转移纳米复合探针用于细胞凋亡相关mi RNA的低背景精准监测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器 |
| 3.2.2 试剂 |
| 3.2.3 探针的制备 |
| 3.2.4 荧光检测 |
| 3.2.5 探针的稳定性考察 |
| 3.2.6 细胞培养 |
| 3.2.7 细胞毒性考察 |
| 3.2.8 荧光显微成像 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 双重能量转移纳米复合探针的构建 |
| 3.3.2 能量转移效率考察 |
| 3.3.3 探针的高抗干扰能力和选择性 |
| 3.3.4 miRNA的分析检测 |
| 3.3.5 探针的酶稳定性及细胞毒性 |
| 3.3.6 探针在活细胞中低背景、高准确成像 |
| 3.3.7 凋亡细胞中miR-630的动态监测 |
| 3.3.8 凋亡细胞中的miR-630和miR-21 同时动态监测 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 DNA/氧化石墨烯双重能量转移纳米复合探针用于癌细胞的靶向成像及细胞凋亡过程的精准监测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 仪器 |
| 4.2.2 试剂 |
| 4.2.3 探针的制备 |
| 4.2.4 荧光检测 |
| 4.2.5 细胞培养 |
| 4.2.6 细胞毒性考察 |
| 4.2.7 荧光显微成像 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 纳米探针的构建 |
| 4.3.2 实验条件的优化 |
| 4.3.3 Cytc的分析检测 |
| 4.3.4 探针的细胞毒性 |
| 4.3.5 探针靶向成像癌细胞 |
| 4.3.6 凋亡细胞中Cytc的动态监测 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 全文总结及展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 论文创新点 |
| 5.3 展望 |
| 5.3.1 高能量转移效率的共振能量转移探针的构建 |
| 5.3.2 基于共振能量转移对细胞凋亡过程中复杂信号通路的区分 |
| 5.3.3 基于共振能量转移对细胞凋亡和细胞焦亡的区分 |
| 参考文献 |
| 论文发表情况 |
| 致谢 |
（3）基于功能性适配体修饰的磁性纳米粒子载药体系构建及抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 纳米材料在生物学及医学中的应用 |
| 1.1.1 肿瘤细胞微环境 |
| 1.1.2 纳米材料载体在医学中的应用 |
| 1.1.3 基于脂质的纳米颗粒 |
| 1.1.4 聚合物纳米载体 |
| 1.1.5 无机纳米粒子 |
| 1.1.6 磁性纳米粒子 |
| 1.2 功能性核酸在肿瘤治疗中的应用 |
| 1.3 小干扰RNA技术在医学中的应用 |
| 1.3.1 RNAi和癌症即RNAi的沉默机制 |
| 1.3.2 RNAi的递送方式 |
| 1.3.3 RNAi降低肿瘤的耐药性 |
| 1.4 选题意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 第二章 核酸适体-磁性微球药物运载体系的构建及抗肿瘤活性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.0 试剂和仪器 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 主要反应溶液的配置 |
| 2.2.3 DNA适配体与COOH-SPION的合成 |
| 2.2.4 凝胶阻滞实验 |
| 2.2.5 透射电子显微镜(TEM)分析 |
| 2.2.6 Apt-gc34@SPION和 Apt-S8@SPION的退火 |
| 2.2.7 ABTS法验证G-四链体结构 |
| 2.2.8 CD光谱分析 |
| 2.2.9 分子模拟Autodock计算小分子药物与DNA结合情况 |
| 2.2.10 药物的固载 |
| 2.2.11 稳定性检验 |
| 2.2.12 体外缓释率的研究 |
| 2.2.13 细胞的培养 |
| 2.2.14 普鲁士蓝染色试验 |
| 2.2.15 磁靶向实验 |
| 2.2.16 细胞摄取及活性氧含量的检测 |
| 2.2.17 细胞毒性实验 |
| 2.2.18 细胞迁移实验研究 |
| 2.2.19 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.20 蛋白免疫印迹法检测蛋白表达 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 纳米载药体系的表征 |
| 2.3.2 理论计算结果与药物固载量 |
| 2.3.3 稳定性实验 |
| 2.3.4 药物缓释 |
| 2.3.5 普鲁士蓝染色实验 |
| 2.3.6 磁靶向实验 |
| 2.3.7 细胞内化及活性氧检测 |
| 2.3.8 体外细胞毒性 |
| 2.3.9 细胞迁移 |
| 2.3.10 细胞凋亡的研究 |
| 2.3.11 WB实验结果分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 DNM&TMPyP&Apt-PSA&PEI@SPION体系的构建及抗肿瘤活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.0 试剂材料与仪器 |
| 3.2.1 主要试剂的配制 |
| 3.2.2 Apt-PSA&PEI@SPION纳米体系的构建 |
| 3.2.3 药物的固载量 |
| 3.2.4 稳定性考察 |
| 3.2.5 药物体外缓释 |
| 3.2.6 细胞培养 |
| 3.2.7 普鲁士蓝染色 |
| 3.2.8 磁靶向实验 |
| 3.2.9 细胞内活性氧检测 |
| 3.2.10 细胞毒性实验-CCK-8 实验 |
| 3.2.11 细胞迁移实验 |
| 3.2.12 细胞凋亡实验 |
| 3.2.13 反转录PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Wersten Blot)实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 Apt-PSA&PEI@SPION纳米微球的表征 |
| 3.3.1.1 非变性聚丙烯酰胺凝(native-PAGE)胶实验 |
| 3.3.1.2 凝胶阻滞实验 |
| 3.3.1.3 TEM、Zeta和DLS实验 |
| 3.3.2 ABTS反应与CD光谱验证G-四链体 |
| 3.3.3 药物的固载量 |
| 3.3.4 稳定性 |
| 3.3.5 体外缓释 |
| 3.3.6 普鲁士蓝染色 |
| 3.3.7 磁靶向实验 |
| 3.3.8 细胞内活性氧检测 |
| 3.3.9 细胞毒性实验-CCK-8实验 |
| 3.3.10 细胞迁移实验 |
| 3.3.11 细胞凋亡实验 |
| 3.3.12 反转录PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Wersten Blot)实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 DNM&TMPyP&PND&Bio-gc34&PSA&PEI@SPION体系的构建及抗肿瘤活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂材料与仪器 |
| 4.2.2 Bio-gc34&PSA&PEI@SPION纳米体系的构建 |
| 4.2.3 药物的固载量 |
| 4.2.4 药物体外缓释 |
| 4.2.5 细胞培养 |
| 4.2.6 普鲁士蓝染色 |
| 4.2.7 磁靶向实验 |
| 4.2.8 药物在细胞内定位及活性氧检测 |
| 4.2.9 细胞毒性实验-CCK-8 实验 |
| 4.2.10 细胞周期实验 |
| 4.2.11 反转录PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Wersten Blot)实验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 琼脂糖凝胶实验 |
| 4.3.2 药物的固载量 |
| 4.3.3 体外缓释 |
| 4.3.4 普鲁士蓝染色 |
| 4.3.5 磁靶向实验 |
| 4.3.6 细胞内定位及活性氧检测 |
| 4.3.7 细胞毒性实验-CCK-8 实验 |
| 4.3.8 细胞周期实验 |
| 4.3.9 反转录PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Wersten Blot)实验 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（4）核仁素参与淋巴瘤细胞株CA46耐药机制的研究（论文提纲范文）
| 主要英文词缩略表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 慢病毒介导的NCL沉默和NCL过表达CA46 细胞株的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 NCL通过BCL-2 抗凋亡途径介导CA46 细胞对药物的耐受 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 NCL通过调节细胞周期蛋白cyclinD3、cyclinE1 的表达来介导CA46 细胞对药物的耐受 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 NCL与 CA46 耐阿霉素细胞株(CA46/ADR)中多药耐药基因MDR1 的相关性探讨 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第五部分 NCL通过调节microRNA-221 的表达增强CA46 细胞对药物的耐受 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）MARVELD1与核仁素相互作用及其与DNA损伤关系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及目的和意义 |
| 1.2 国内外研究现状及分析 |
| 1.2.1 MAEVELD1 简介 |
| 1.2.2 核仁素简介 |
| 1.2.3 DNA损伤及修复简介 |
| 1.2.4 本文的研究假设 |
| 1.3 主要研究内容 |
| 1.4 课题来源 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系、载体及菌株 |
| 2.1.2 抗体 |
| 2.1.3 实验试剂及材料 |
| 2.1.4 试剂及配方 |
| 2.1.5 实验分析软件 |
| 2.1.6 PCR 扩增引物及 RNAi 片段序列 |
| 2.1.7 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞的传代培养 |
| 2.2.2 细胞转染 |
| 2.2.3 全细胞蛋白提取 |
| 2.2.4 细胞浆和细胞核蛋白提取 |
| 2.2.5 RNA提取 |
| 2.2.6 逆转录合成cDNA |
| 2.2.7 pGEX-4T-2/Nucleolin重组体构建系列方法 |
| 2.2.8 CaCl2 化学法感受态细胞制备 |
| 2.2.9 GST融合蛋白诱导表达 |
| 2.2.10 Western Blot免疫印记杂交 |
| 2.2.11 免疫荧光实验 |
| 2.2.12 免疫共沉淀（Co-IP） |
| 2.2.13 GST-pulldown |
| 第3章 MARVELD1 与核仁素的相互作用分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 GST-MARVELD1 与核仁素相互作用分析 |
| 3.3 Co-IP检测MARVELD1 与核仁素的相互作用 |
| 3.3.1 MARVELD1 与核仁素免疫共沉淀 |
| 3.3.2 核仁素与MARVELD1 免疫共沉淀 |
| 3.4 GST-Nucleolin重组体构建及诱导表达 |
| 3.4.1 pGEX-4T2Nucleolin重组体构建 |
| 3.4.2 pGEX-4T2Nucleolin重组体筛选及验证 |
| 3.4.3 重组子质粒转化表达菌株及融合蛋白体外诱导表达 |
| 3.5 GST-Nucleolin与MARVELD1 相互作用分析 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 本章小结 |
| 第4章 DNA损伤修复中MARVELD1 与核仁素的关系 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 MARVELD1 与核仁素的共定位分析 |
| 4.3 DNA损伤修复中MARVELD1 与核仁素的表达情况分析 |
| 4.3.1 UV诱导后MARVELD1 与核仁素的表达 |
| 4.3.2 射线（IR）照射后MARVELD1 与核仁素的表达 |
| 4.3.3 Etoposide诱导后MARVELD1 与核仁素的表达 |
| 4.3.4 UV及Etoposide联合处理后MARVELD1 与核仁素的表达变化 |
| 4.4 DNA损伤修复过程中MARVELD1 与核仁素结合情况变化 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 MARVELD1 对核仁素亚细胞定位的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 DNA损伤时核仁素亚细胞定位的改变 |
| 5.2.1 UV诱导后核仁素亚细胞定位的改变 |
| 5.2.2 UV及Etoposide联合处理后核仁素亚细胞定位的改变 |
| 5.3 MARVELD1 表达沉默对核仁素亚细胞定位的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（6）鱼藤酮对SH-SY5Y细胞中核仁素、α-突触核蛋白和DJ-1相互作用的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（7）组织激肽释放酶结合蛋白细胞膜受体的分离鉴定与其抗肿瘤分子机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文符号对照表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 研究背景 |
| 1.2.1 抗血管生成 |
| 1.2.2 Kal 结构与功能 |
| 1.2.2.1 Kal 结构与分布 |
| 1.2.2.2 Kal 细胞膜结合蛋白 |
| 1.2.2.3 Kal 功能研究 |
| 1.2.3 核仁素的结构与功能 |
| 1.2.3.1 核仁素的结构特点 |
| 1.2.3.2 核仁素的细胞定位和穿梭特性 |
| 1.2.3.3 核仁素的功能 |
| 1.2.4 整合素的功能 |
| 1.2.4.1 整合素与肿瘤的血管生成 |
| 1.2.4.2 整合素与肿瘤转移 |
| 1.2.5 蛋白相互作用的研究方法 |
| 1.2.5.1 酵母双杂交法 |
| 1.2.5.2 免疫共沉淀技术 |
| 1.2.5.3 双分子荧光互补技术 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.4.1 Kal 抗血管生成活性分析 |
| 1.4.2 Kal 细胞膜受体的分离、鉴定 |
| 1.4.3 细胞膜结合蛋白在 Kal 抗肿瘤活性中的影响 |
| 1.4.4 整合素β3 介导 Kal 发挥抗肿瘤活性 |
| 1.5 论文结构 |
| 1.5.1 引言 |
| 1.5.2 Kal 抗血管生成作用 |
| 1.5.3 Kal 细胞膜受体的分离与鉴定 |
| 1.5.4 Nucleolin 在 Kal 抗肿瘤活性中的作用 |
| 1.5.5 整合素β3 介导 Kal 抗肿瘤活性 |
| 第2章 rhKal 的表达、纯化和抗血管生成活性 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验质粒、菌株和细胞株 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 rhKal 的表达、纯化与鉴定 |
| 2.2.2 rhKal(his)的表达、纯化与鉴定 |
| 2.2.3 Western Blotting |
| 2.2.4 HUVEC 细胞活力的检测——MTT 法 |
| 2.2.5 HUVEC 细胞增殖活性的检测—— Edu 法 |
| 2.2.6 HUVEC 细胞小管形成 |
| 2.2.7 HUVEC 细胞迁移的检测—— Transwell 法 |
| 2.2.8 HUVEC 细胞迁移的检测——划痕实验 |
| 2.2.9 HUVEC 细胞克隆的形成 |
| 2.2.10 HUVEC 细胞凋亡的检测—— Annexin V-PI 双染 |
| 2.2.11 HUVEC 细胞凋亡的检测——Hoechst 33258 染色 |
| 2.2.12 数据统计 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 重组质粒 pPIC-9-Kal 的鉴定 |
| 2.3.2 rhKal 蛋白的鉴定 |
| 2.3.3 rhKal 蛋白的纯化 |
| 2.3.4 重组质粒 pPIC-9-Kal(his)鉴定 |
| 2.3.5 rhKal-his 蛋白的鉴定 |
| 2.3.6 rhKal-his 蛋白的纯化 |
| 2.3.7 rhKal 对 HUVEC 细胞活力的影响 |
| 2.3.8 rhKal 抑制 HUVEC 细胞增殖 |
| 2.3.9 rhKal 抑制 HUVEC 小管形成 |
| 2.3.10 rhKal 抑制 HUVEC 的迁移 |
| 2.3.11 rhKal 抑制 HUVEC 集落形成 |
| 2.3.12 rhKal 诱导 HUVEC 细胞凋亡 |
| 2.3.13 Caspase 激活介导 rhKal 诱导 HUVEC 凋亡 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 Kal 膜结合蛋白的分离与鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验细胞株 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞膜蛋白提取 |
| 3.2.2 Pull-Down 方法 |
| 3.2.3 免疫共沉淀 |
| 3.2.4 测定蛋白浓度—— BCA 法 |
| 3.2.5 细胞免疫荧光 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Pull-Down 技术分离 Kal 膜结合蛋白 |
| 3.3.2 LC-MS／MS 技术鉴定 Kal 膜结合蛋白 |
| 3.3.3 免疫共沉淀方法鉴定 Kal 膜结合蛋白 |
| 3.3.4 免疫荧光实验结果 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 核仁素介导 rhKal 体外抗血管生成作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验细胞株 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 siRNA 转染 |
| 4.2.2 HUVEC 细胞活力 |
| 4.2.3 HUVEC 细胞迁移—— Transwell 法 |
| 4.2.4 流式细胞仪检测细胞膜上核仁素分布 |
| 4.2.5 流式细胞仪检测细胞中 rhKal |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 siRNA 对 Kal 膜结合蛋白的沉默效果评价 |
| 4.3.2 Kal 膜结合蛋白介导 rhKal 对 HUVEC 活力的抑制 |
| 4.3.3 核仁素、整合素β3 介导 rhKal 对 HUVEC 迁移的抑制 |
| 4.3.4 核仁素在 HUVEC 细胞中的表达与分布 |
| 4.3.5 核仁素介导 rhKal 入胞 |
| 4.3.6 rhKal 抑制核仁素磷酸化 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 核仁素介导 rhKal 体内抗肿瘤活性 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验细胞株与动物 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 Hela 细胞裸鼠移植瘤模型 |
| 5.2.2 石蜡标本的制备 |
| 5.2.3 HE 染色 |
| 5.2.4 免疫组织化学检测 |
| 5.2.5 Tunel 法检测细胞凋亡 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 核仁素介导 rhKal 的肿瘤生长抑制 |
| 5.3.2 肿瘤组织形态学观察 |
| 5.3.3 rhKal 抑制肿瘤组织中新生血管的形成 |
| 5.3.4 rhKal 降低肿瘤组织中 Ki67 的表达 |
| 5.3.5 rhKal 抑制肿瘤组织中 Hsp90 的表达 |
| 5.3.6 rhKal 诱导肿瘤组织细胞凋亡 |
| 5.3.7 rhKal 安全性的考察 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 整合素β3 介导 rhKal 抗肿瘤分子机制 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 实验细胞株与动物 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 试剂配制 |
| 6.1.4 实验仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 NCI-H446 细胞活力检测——MTT 法 |
| 6.2.2 NCI-H446 细胞增殖活性检测—— Edu 法 |
| 6.2.3 整合素β3 对 rhKal 抑制 NCI-H446 细胞活力的影响 |
| 6.2.4 NCI-H446 细胞迁移——划痕实验 |
| 6.2.5 NCI-H446 细胞迁移—— Transwell 法 |
| 6.2.6 NCI-H446 细胞凋亡检测—— Annexin V-PI 双染 |
| 6.2.7 NCI-H446 细胞凋亡检测——Hoechst 33258 染色 |
| 6.2.8 NCI-H446 细胞裸鼠移植瘤模型 |
| 6.2.9 石蜡标本的制备 |
| 6.2.10 HE 染色 |
| 6.2.11 免疫组织化学方法 |
| 6.2.12 Tunel 法检测细胞凋亡 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 rhKal 抑制 NCI-H446 细胞活力 |
| 6.3.2 整合素β3 介导 rhKal 抑制 NCI-H446 细胞活力 |
| 6.3.3 rhKal 抑制 NCI-H446 细胞增殖 |
| 6.3.4 rhKal 抑制 NCI-H446 细胞迁移 |
| 6.3.5 rhKal 诱导 NCI-H446 细胞凋亡 |
| 6.3.6 rhKal 诱导 NCI-H446 细胞凋亡分子机制 |
| 6.3.7 rhKal 对整合素信号通路的影响 |
| 6.3.8 rhKal 抗肿瘤体内活性分析 |
| 6.3.9 肿瘤组织形态学观察 |
| 6.3.10 rhKal 抑制肿瘤组织中新生血管形成 |
| 6.3.11 rhKal 降低肿瘤组织中 Ki67 的表达 |
| 6.3.12 rhKal 降低肿瘤组织中 Hsp90 表达 |
| 6.3.13 rhKal 诱导肿瘤组织细胞凋亡 |
| 6.3.14 rhKal 安全性考察 |
| 6.4 小结 |
| 第7章 结论 |
| 7.1 主要工作 |
| 7.2 主要成果 |
| 7.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历、发表的学术论文 |
（8）JNK抑制剂及RNA干扰核仁素对U251细胞增殖与凋亡的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 JNK 抑制剂对 U251 细胞增殖及核仁素表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 RNA 干扰核仁素对 U251 细胞增殖和凋亡的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 核仁素结构和功能的研究进展及其与肿瘤的关系 |
| 参考文献 |
| 缩略词表（Abbreviation） |
| 攻读学位期间公开发表和待发表论文 |
| 致谢 |
（9）核仁素（C23）在Ⅰ-Ⅲ期胃癌组织中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第1章 实验材料 |
| 1.1 组织标本 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 化学试剂 |
| 1.4 试剂配制 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 免疫组织化学方法检测的表达 |
| 2.2 统计分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 核仁素在胃腺癌组织及癌旁正常组织中的表达特点 |
| 3.2 核仁素表达与临床病理学特征间的关系 |
| 3.3 胃癌核仁素表达与生存时间的关系 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63抑制作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一部分 核仁素反义寡核苷酸的合成及功能鉴定 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 人骨肉瘤细胞株来源 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.2.3 主要仪器及设备 |
| 1.2.4 主要试剂的配制 |
| 1.2.5 实验方法 |
| 1.2.6 统计学处理 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论与分析 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63增殖抑制及诱导凋亡的实验研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 人骨肉瘤细胞株来源 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要仪器及设备 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 |
| 2.2.5 实验方法 |
| 2.2.6 统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论与分析 |
| 2.5 结论 |
| 第三部分 核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 人骨肉瘤细胞株来源 |
| 3.2.2. 实验动物来源 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要仪器设备 |
| 3.2.5 主要试剂的配制 |
| 3.2.6 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论与分析 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要成果和获奖情况 |
四、核仁素在细胞增殖与细胞凋亡中的作用（论文参考文献）
- [1]细胞表面核仁素交联诱导肿瘤细胞凋亡研究[D]. 程凤. 西南大学, 2021
- [2]基于石墨烯的共振能量转移在细胞凋亡成像分析中的应用[D]. 姜永健. 西南大学, 2020
- [3]基于功能性适配体修饰的磁性纳米粒子载药体系构建及抗肿瘤活性研究[D]. 孙翔玉. 广东药科大学, 2019(02)
- [4]核仁素参与淋巴瘤细胞株CA46耐药机制的研究[D]. 梅序桥. 福建医科大学, 2016
- [5]MARVELD1与核仁素相互作用及其与DNA损伤关系的研究[D]. 彭林辉. 哈尔滨工业大学, 2015(02)
- [6]鱼藤酮对SH-SY5Y细胞中核仁素、α-突触核蛋白和DJ-1相互作用的影响[J]. 张楠,杨洪彩,胡红,郑珊,敬海明,周春艺,谭壮生,李煜,赵超英,马玲,宁钧宇,李国君. 毒理学杂志, 2015(01)
- [7]组织激肽释放酶结合蛋白细胞膜受体的分离鉴定与其抗肿瘤分子机制的研究[D]. 黄晓平. 华侨大学, 2014(01)
- [8]JNK抑制剂及RNA干扰核仁素对U251细胞增殖与凋亡的影响研究[D]. 孙雪萍. 苏州大学, 2013(S2)
- [9]核仁素（C23）在Ⅰ-Ⅲ期胃癌组织中的表达及临床意义[D]. 周方. 青岛大学, 2013(S1)
- [10]核仁素反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞MG-63抑制作用的实验研究[D]. 崔俊成. 中南大学, 2012(03)