一、肝细胞癌抑癌基因和癌基因甲基化水平的检测及意义（论文文献综述）
刘文峥,陈勇军[1]（2021）在《甲基胞嘧啶双加氧酶1在肿瘤中的研究进展》文中研究说明甲基胞嘧啶双加氧酶1（TET1）蛋白是一种5-甲基胞嘧啶（5-mC）羟化酶, 属于人类α-酮戊二酸加氧酶TET蛋白家族。其功能是识别并结合到基因组5’-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序（CpG）-3’二核苷酸密度高的区域如CpG岛, 启动DNA去甲基化程序, 维持DNA甲基化和去甲基化平衡, 以保持基因组甲基化稳态, 实现表观遗传调控。TET1表达和/或功能异常与肿瘤的发生和进展密切相关, 在不同来源的肿瘤中可以表现为原癌基因或者抑癌基因属性。本文综述近年来TET1在肿瘤中的作用及机制的研究进展。
武坤,晋臻,李轶勋,李昕,程沈菊,李艳红,郭翀[2]（2021）在《沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响》文中认为目的:探讨沉默DNA甲基转移酶（DNMT1）对人慢性髓系白血病细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1（WIF-1）基因启动子甲基化的影响。方法:构建DNMT1 siRNAi质粒,将DNMT1 siRNAi转染至慢性髓系白血病K562细胞中,采用RT-PCR和Western blot法检测DNMT1基因和相关蛋白的表达,并利用甲基化PCR检测WIF-1基因启动子甲基化水平,台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Western blot法检测沉默DNMT1基因后Wnt/β-catenin及其下游信号通路蛋白的表达情况。结果:实验组DNMT1 mRNA和相关蛋白表达水平显着低于对照组和阴性对照组（P<0.05）;成功转染72 h后,对照组和阴性对照组WIF-1基因处于完全甲基化状态,而实验组WIF-1基因启动子区域甲基化水平显着降低。MSP检测结果显示,实验组未甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显着增加,而甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显着降低。转染成功48 h后,实验组的OD值、活细胞数及集落形成数均显着低于阴性对照组和对照组（P<0.05）。实验组的细胞凋亡率显着高于阴性对照组和对照组（P<0.05）。实验组K562细胞中β-actin、myc、cyclin D1和TCF-1蛋白表达水平均显着低于阴性对照组和对照组(P<0.05。结论:沉默DNMT1基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。
朱其舟,舒宽勇,陈和平,肖仲清[3]（2021）在《子宫内膜癌组织中miR-128-2基因启动子DNA甲基化水平与miR-128-2、DJ-1表达及临床病理因素相关性的研究》文中认为目的检测新鲜子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中miR-128-2基因启动子区DNA甲基化水平以及miR-128-2和DJ-1（RS/PARK7/CAP1）表达水平,并分析其相关性,拟从组织学水平寻找miR-128-2基因启动子DNA甲基化可能参与子宫内膜癌DJ-1表达调控的相关证据。方法收集江西省妇幼保健院经手术切除的63例子宫内膜癌组织标本及其相配对的癌旁正常子宫内膜组织,采用荧光实时定量甲基化特异性PCR（q MSP）方法检测组织中miR-128-2基因启动子区DNA甲基化水平、荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测miR-128-2以及DJ-1 mRNA表达丰度、Western blot检测DJ-1蛋白表达水平,同时比较分析miR-128-2基因启动子DNA甲基化与miR-128-2、DJ-1表达与临床病理因素间的相关性。结果与癌旁正常子宫内膜组织相比较,子宫内膜癌组织中miR-128-2启动子区DNA甲基化水平显着增加（P <0.01）,同时miR-128-2表达下调而DJ-1 mRNA及蛋白表达上调（P <0.01）;通过相关性分析发现子宫内膜癌组织中miR-128-2基因启动子区DNA甲基化程度与miR-128-2表达负相关（Pearson相关系数r=-0.9693,P <0.01）而与DJ-1 mRNA表达正相关（Pearson相关系数r=0.8762,P <0.01）。此外,通过临床病理资料发现miR-128-2甲基化水平、miR-128-2以及DJ-1 mRNA表达水平均与子宫内膜癌患者的病理类型、分化程度无关,而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和临床分期相关（P <0.05）。结论在组织水平佐证了子宫内膜癌中DJ-1表达上调可能与miR-128-2基因启动子区高DNA甲基化及其表达沉默有关。
冷雪,刘萍,陈桢,周亮[4]（2021）在《肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移》文中指出目的 :研究肝细胞癌抗原587（HCA587）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达和启动子区甲基化状态,探讨HCA587对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的调节机制。方法 :纳入肝细胞癌肿瘤组织114例,分为HCC组和癌旁非癌组织（NT）组。荧光定量PCR检测HCA587的mRNA表达量;免疫组织化学和免疫印迹检测HCC组和NT组组织中HCA587的蛋白表达。基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切,并结合荧光定量PCR方法分析肝细胞癌组织中HCA587基因启动子区甲基化状态。构建重组HCA587过表达质粒（pcDNA3.1-HCA587）,培养人肝细胞癌细胞系BEL-7404,转染pcDNA3.1-HCA587或者使用甲基化抑制剂5-Azacytidin处理细胞。细胞分为对照组、5-Azacytidin组、pcDNA3.1-HCA587组和pcDNA3.1-HCA587空载体（EV）组。免疫沉淀法分析HCA587与TATA盒结合蛋白相关因子9（TAF9）的结合,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 :与癌旁非癌组织组比,HCC组的HCA587在mRNA和蛋白水平均上调。免疫组织化学证实HCC组组织中HCA587阳性表达。HCC组中HCA587的启动子区CpG岛甲基化水平降低。体外实验结果显示,5-Azacytidin促进BEL-7404中HCA587的表达、HCA587与TAF9的结合、BEL-7404细胞的迁移和侵袭能力,但抑制HCA587甲基化水平;另外,HCA587过表达增强BEL-7404细胞的迁移和侵袭能力。结论 :HCA587高表达或抑制其启动子区甲基化可以促进HCA587与TAF9的结合及导致肝细胞癌细胞的迁移和侵袭。
荆潇宽,姜棋予,李丛舒,张年荣,柴燕涛,冯帆,李伯安,李炎坤[5]（2021）在《应用二代测序技术检测肝细胞癌组织样本中抑癌基因 PTEN基因启动子甲基化率》文中提出目的旨在采用二代测序（NGS）的技术平台检测肝细胞癌（HCC）组织样本中肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因（PTEN）基因启动子区的甲基化率, 并对其与接受索拉非尼治疗患者预后相关性进行分析。方法 2019年6月至2020年12月期间, 对在解放军总医院第五医学中心收集和保存的52例单纯接受索拉非尼治疗患者的HCC成对肿瘤组织与癌旁组织样本, 提取样本中的总DNA样品;使用亚硫酸氢盐处理DNA样品并设计特异性引物对PTEN启动子区进行扩增, 进一步对扩增产物进行二代测序分析。在对PTEN甲基化的临床意义分析中通过log-rank统计学分析方法计算患者组间生存期是否具有统计学差异。结果肿瘤组织中PTEN启动子区甲基化率（29.17%±9.58%）显着高于癌旁组织（4.17%±2.86%）（t=19.970, P<0.05）。同时, 在HCC组织中, PTEN启动子区甲基化率与其表达负相关（F=47.270, P<0.000 1;Y=-1 800×X+38.03）, PTEN甲基化率与患者接受分子靶向药物索拉非尼治疗的预后负相关（χ2=4.313, P<0.05）。结论本研究成功建立了新型PTEN启动子区甲基化的检测方法, PTEN甲基化率可能是HCC诊断及靶向治疗的靶标之一。
孙小杰[6]（2021）在《CFIm25对结直肠癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究》文中研究指明背景和目的:癌症正在影响着全世界人民的健康,在全球范围内,2020年约有1930万新的癌症病例发生,其中结直肠癌以10%的高发率排名第三。而在癌症死亡的主要原因中,结直肠癌以9.4%的比例居于第二位,仅次于肺癌。随着人们生活水平的提高与饮食结构的改变,结直肠癌在我国的发病率呈现逐年上升的趋势。目前,外科手术仍然是早期结直肠癌的主要治疗方法。但是由于该病的高度异质性,起病隐匿、发展迅速等特点,许多结直肠癌患者确诊时已处于疾病的中晚期,往往需要联合化疗和放疗等其他治疗手段。尽管过去的十年里,人们对于结直肠癌的研究已取得一些进展并应用于中晚期结直肠癌治疗,但治愈率仍较低。改善结直肠癌患者的预后生存,依然是结直肠癌治疗中亟待解决的重点问题。随着对结直肠癌研究的不断深入,人们开始从基因水平寻找肿瘤发生发展和预后的指标,目前发现了许多结直肠癌相关的突变基因及信号通路,这些发现促进了分子靶向治疗的兴起。如靶向KRAS野生型的结直肠癌患者的EGFR单克隆抗体西妥昔单抗,展示了较好的抗肿瘤效果,彰显了分子靶向治疗的重要性。针对结直肠癌的相关差异基因的分析可以筛选出结直肠癌关键基因,进一步对关键基因的表达和功能进行深入研究将能为结直肠癌的分子靶向治疗提供新思路。研究方法:1.回顾性分析2010年1月至2017年12月期间在我院诊断为结直肠癌的344例50岁以下的结直肠癌患者,作为本文研究对象。收集患者一般资料、治疗资料与随访资料,内容包括性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤分期、病理分型、原发肿瘤位置、淋巴结转移情况、CEA、CA19-9、Ki-67、p53、手术方式、接受化疗/放疗/生物治疗情况等。利用统计学方法分析344名结直肠癌患者的临床特征,患者生存率的影响因素,利用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,进行预后分析。2.以从GEO数据库和TCGA数据库下载的数据集作为研究对象。得到肿瘤组织和正常组织的差异表达miRNA。选取靶基因集合,对靶基因编码的蛋白之间的相互作用进行PPI及可视化分析,选取关键子模块中的基因进行GO功能注释分析和KEGG通路富集分析。然后应用Kaplan-Meier方法计算关键子模块内的基因的表达与总生存期之间的关系,找到影响结直肠癌生存的关键基因,并进行文献检索。3.应用Western blotting法对临床21例成对结直肠癌及癌旁组织样本中CFIm25的表达量进行分析,同时应用Western blotting检测CFIm25在结直肠癌细胞及正常结肠细胞中的表达。4.体外实验:（1）应用慢病毒感染技术,以CFIm25表达较高的HT-29细胞系及表达较低的DLD-1细胞系为研究对象,分别构建了敲减和过表达CFIm25的结直肠癌细胞系。将HT-29细胞系分为两组:对照组（Control组）和感染si-CFIm25组（si CFIm25组）;将DLD-1细胞系分为两组:空载质粒组（Vector）和感染CFIm25组（CFIm25组）。采用Western blotting法检测HT-29和DLD-1各组细胞中CFIm25的表达水平。（2）通过克隆形成实验、CCK8实验检测高/低表达CFIm25后对结直肠癌细胞增殖能力的影响。（3）通过Transwell迁移侵袭实验和细胞划痕实验检测高/低表达CFIm25后对结直肠癌细胞迁移侵袭能力的影响。（4）应用流式细胞术和Western blotting法检测高/低表达CFIm25对细胞周期及周期相关蛋白（Cyclin D1和CDK4）的表达水平的影响。应用Western blotting法检测高/低表达CFIm25后EMT相关蛋白E-cadherin（E-钙黏蛋白）、N-cadherin（N-钙黏蛋白）和Vimentin（波形蛋白）的表达水平的变化。（5）应用Western blotting法检测CFIm25对JNK和p38 MAPK信号通路中关键蛋白表达水平的影响。再向HT-29和DLD-1各组细胞中分别加入两种通路的抑制剂,通过CCK8实验,细胞划痕实验进一步验证CFIm25通过以上通路调控结直肠癌细胞的增殖及转移的能力。5.体内实验:裸鼠随机分为四组,分别注射si CFIm25组和Control组HT-29细胞及CFIm25组和Vector组DLD-1细胞,构建裸鼠移植瘤模型,测量移植瘤的体积和质量并做统计分析。研究结果:1.50岁以下结直肠癌患者诊断时的平均年龄为42.87岁,常见症状包括腹痛（42.7%）、排便习惯改变（38.4%）、便血（31.1%）,肿瘤最好发于左半结肠,58.2%的患者诊断时为III、IV期,88%诊断为经典腺癌,90.4%的患者接受了根治性手术,术后52.9%的患者接受了化疗/放疗/生物治疗等辅助治疗。肿瘤分期、病理分型、有无淋巴结转移、CA199水平、是否进行辅助治疗是患者5年生存率的影响因素（P<0.05）。生存分析显示:肿瘤分期为IV期,病理分型为粘液腺癌或印戒细胞癌,伴淋巴结转移,CA199≥27U/ml,术后未接受辅助治疗是50岁以下结直肠癌患者临床预后的危险因素。2.通过对数据库进行分析,共得到542个差异表达miRNA。使用miRDB预测了差异表达miRNA的靶基因,共得到464个靶基因。对靶基因编码的蛋白之间的相互作用进行PPI及可视化分析,选取关键子模块中69个基因进行深入研究。GO功能注释结果显示:差异表达基因多富集在胞质、质膜、核质相关功能区域。KEGG通路富集分析结果显示:差异表达的基因主要富集在肿瘤相关通路、PI3K-Akt信号通路。应用Kaplan-Meier方法计算PPI网络中关键子模块内69个基因的表达与总生存期之间的关系。结果显示NUDT21、FNBP1L、SLC30A9、UNC5D等4个基因的表达与总生存期之间存在关联（P<0.05）,通过文献检索发现,NUDT21（CFIm25或cpsf5）对许多肿瘤的发生发展有调控作用,而该基因在结直肠癌中的研究尚未见报道。3.Western blotting结果显示CFIm25蛋白在癌旁组织的表达水平高于结直肠癌组织,在正常结肠细胞NCM460中的表达水平高于结直肠癌细胞。在结直肠癌细胞中,HT-29细胞表达相对较高,DLD-1细胞表达相对较低。4.体外实验:（1）通过慢病毒感染技术,成功构建了CFIm25表达下调的HT-29细胞系和CFIm25表达上调的DLD-1细胞系。（2）与Control组相比,si CFIm25组HT-29细胞增殖能力明显增强,与Vector组相比,CFIm25组DLD-1细胞增殖能力明显减弱。（3）细胞划痕实验显示,与Control组相比,si CFIm25组伤口闭合更快,即迁移能力更强。而CFIm25组比Vector组伤口闭合更慢,迁移能力下降。Transwell小室结果显示:CFIm25下调后HT-29细胞发生迁移和侵袭的数量比Control组增加,而CFIm25过表达的DLD-1细胞发生迁移和侵袭的数量比Vector组减少。（4）与Control组相比,siCFIm25组HT-29细胞S期细胞分布比例增加,Cyclin D1、CDK4表达增加。与Vector组相比,CFIm25组DLD-1细胞S期细胞分布比例减少,Cyclin D1、CDK4表达下调。相比于Control组,si-CFIm25组的细胞中E-cadherin的表达明显减少,N-cadherin和Vimentin的表达明显增多,相比于Vector组,CFIm25组的E-cadherin的表达明显增多,N-cadherin和Vimentin的表达明显减少。（5）与Control组相比,si CFIm25组JNK/c-Jun和p38的磷酸化水平升高;与Vector组相比,CFIm25组JNK/c-Jun和p38的磷酸化水平下降。加入通路的抑制剂SP600125或SB202190后,由过表达CFIm25引起的增殖和转移抑制得以恢复。5.体内实验:裸鼠皮下移植瘤模型构建成功。与Control组相比,si CFIm25组移植瘤体的质量和体积均明显增加。与Vector组相比,CFIm25组移植瘤体的质量和体积均明显降低。结论:1.肿瘤分期为IV期,病理分型为粘液腺癌或印戒细胞癌,伴淋巴结转移,CA199≥27U/ml,术后未接受辅助治疗是50岁以下结直肠癌患者临床预后的危险因素。2.CFIm25、FNBP1L、SLC30A9、UNC5D是本研究筛选出的关键基因。3.CFIm25在结直肠癌组织样本中表达下调。4.敲减和过表达CFIm25能够分别促进和抑制结直肠癌的增殖、迁移和侵袭。5.CFIm25参与调控细胞周期、上皮间质细胞转化,并且可以通过JNK和p38MAPK信号通路抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移。6.CFIm25参与结直肠癌的发生发展,是潜在的治疗靶点。
杨明瑞[7]（2021）在《5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对人食管癌细胞生物学特性及SOX1基因表达的影响》文中研究指明背景食管癌是常见的恶性肿瘤,高发地区发病率约为0.05%,其中食管鳞状细胞癌占90%。性别决定区Y框蛋白1（Sex determining region Y-box 1,SOX1）属于高迁移率族蛋白DNA结构域转录因子,在多种肿瘤中的表达受到抑制。已有研究表明,SOX1基因在食管鳞癌组织中的表达显着降低,与肿瘤浸润深度、进展分期和淋巴结转移数目等预后不良指标显着相关;且其启动子区域的Cp G位点呈现高甲基化状态。近年来甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的联合应用成为肿瘤生物学治疗的研究热点。因此,本论文拟采用甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠（NaBu）联合应用研究其对食管癌细胞系增殖、凋亡等的作用及对SOX1表达的影响。结果为深入研究SOX1基因表达调控在食管癌发生发展中的分子机制,寻找特异的食管癌肿瘤生物标志物奠定实验和理论基础。目的1.甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR和组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBu联合处理对食管癌细胞Eca109和EC9706增殖、凋亡及细胞周期等细胞生物学特性的影响;2.5-Aza-CdR和NaBu联合处理对食管癌细胞Eca109和EC9706中SOX1基因表达的影响。方法1.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞增殖的影响。实验采用两种食管癌细胞株Eca109和EC9706,设为八个实验组:三个5-Aza-CdR浓度组（2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L）,三个NaBu浓度组（l.0 mmol/L、2.5 mmol/L、5 mmol/L）,联合用药组（10μmol/L 5-Aza-CdR+2.5mmol/L NaBu）,以及对照组。各实验组食管癌细胞加药处理后正常培养48 h,MTT法检测5-Aza-CdR和NaBu单用、联合应用对肿瘤细胞增殖的抑制率。2.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞凋亡及周期的影响。实验分组如下:10μmol/L5-Aza-CdR组、2.5 mmol/L NaBu组、10μmol/L 5-Aza-CdR+2.5 mmol/L NaBu、食管癌细胞对照组。各实验组食管癌细胞加药处理后正常培养48 h,应用Annexin V/PI双染色法和流式细胞分析法,检测分析5-Aza-CdR和NaBu单用、联合应用对Eca109和EC9706细胞凋亡率及周期分布影响。3.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞SOX1基因的表达影响。收集上述2的各实验组食管癌细胞,分别提取总RNA反转录为c DNA并进行实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测,采用2-△△Ct法分析SOX1基因m RNA相对表达水平;分别提取各实验组食管癌细胞的总蛋白质进行Western blot实验,检测分析SOX1的蛋白表达变化。结果1.MTT检测结果显示:5-Aza-CdR和NaBu处理后,食管癌细胞株EC9706和Eca109的生长明显受到抑制,其作用具有时间和剂量依赖性。在相同的时间点及药物剂量条件下,两种药物联合应用组对食管癌细胞的抑制率相对于单一用药组更明显（P<0.05）。2.流式细胞术检测表明:相对于空白对照组,5-Aza-CdR和NaBu作用细胞48 h后,EC9706和Eca109两种食管癌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;联合用药组凋亡率明显强于单用药组（P<0.05）。细胞周期分析结果表明,处于对数生长期的对照组食管癌细胞株主要分布于G0/G1期和S期,G2/M期相对较低。单独用NaBu处理细胞48 h后,G0/G1期细胞明显增加;大部分细胞阻滞在G0/G1期;单独应用5-Aza-CdR处理细胞48 h后,处于S期的细胞明显增多,细胞周期多数阻滞在S期;联合用药组G0/G1期阻滞相对于对照组最为显着（P<0.05）。3.qRT-PCR结果显示,与对照组细胞相比,单独用5-Aza-CdR或联合用药组作用EC9706和Eca109细胞48 h后SOX1的m RNA表达增加（P<0.05）。Western Blot结果表明5-Aza-CdR或联合用药组促进了SOX1蛋白的表达。结论1.5-Aza-CdR和NaBu及二者的联合应用均能显着抑制人食管癌细胞的增殖,其抑制作用可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。2.5-Aza-CdR及其与NaBu的联合应用可上调食管癌细胞SOX1基因m RNA和蛋白的表达。
易呈风[8]（2021）在《RRAD基因在多发性骨髓瘤中的作用机制研究》文中指出目的:RRAD高甲基化导致基因表观遗传失活对多发性骨髓瘤的生物学特性的影响。方法:研究收集了2019年1月至2020年6月期间遵义医科大学附属医院血液内科收治的20例初诊多发性骨髓瘤患者和9例健康志愿者的骨髓标本。应用RT-qPCR的方法检测20例初诊多发性骨髓瘤患者、9例健康供者和人多发性骨髓瘤细胞株U266、H929、SKO-007中RRAD的转录水平;通过慢病毒转染在SKO-007和H929中构建RRAD过表达细胞系,用流式细胞术、RT-qPCR和Western Blot验证其过表达的效率;采用CCK8法研究RRAD对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞凋亡。用地西他滨处理U266、H929、SKO-007细胞系,通过RT-qPCR检测RRAD基因表达水平的变化;采用CCK8检测地西他滨处理对U266、H929、SKO-007细胞系增殖的影响;采用流式细胞术检测地西他滨处理对U266、H929、SKO-007细胞系凋亡和周期的影响;MSP法检测U266、H929、SKO-007细胞系RRAD甲基化情况。结果:与9例健康供者相比,RRAD在20例初诊多发性骨髓瘤患者中表达水平显着降低（0.52±0.63 Vs 1.16±0.63,P=0.017）;与9例健康供者相比,多发性骨髓瘤细胞株U266、H929、SKO-007中RRAD的表达水平也明显降低,结果分别为U266（0.0003±0.00004 Vs 1.16±0.63,P=0.012）、H929（0.0017±0.00009Vs 1.16±0.63,P=0.012）、SKO-007（0.004±0.00027 Vs 1.16±0.63,P=0.012）;ROC曲线结果表明RRAD表达水平诊断多发性骨髓瘤的最佳临界点是0.59,敏感度为75%、特异度88.89%、约登指数为0.639、AUC值为0.792（P<0.001）。RRAD基因过表达可促进SKO-007细胞凋亡（9.68±3.92 Vs 3.21±0.35,P=0.046）。地西他滨处理U266、H929、SKO-007后,各细胞系的RRAD表达量明显升高,结果分别为U266（25.00±4.12 Vs 1.02±10.14,P=0.001）、H929（6.50±1.37Vs1±0.0002,P=0.02）、SKO-007（4.24±1.07Vs1.02±0.17,P=0.035）。与对照组进行比较,地西他滨处理能明显抑制各骨髓瘤细胞系的增殖,且抑制作用呈现剂量依赖性;可促进U266、H929、SKO-007细胞凋亡,结果分别为U266（12.12±1.23 Vs 5.62±1.89,P=0.003）、H929（11.98±1.33Vs8.69±0.84,P=0.03）、SKO-007（12.77±2.66Vs7.4±0.92,P=0.023）,可阻滞细胞周期为S期或G2期。此外,经地西他滨处理后,可观察到SKO-007细胞RRAD甲基化水平显着下降。结论:1.与健康供者相比较,RRAD在多发性骨髓瘤患者中呈低表达状态;2.与健康供者相比较,RRAD在多发性骨髓瘤细胞系中也呈低表达状态;3.RRAD过表达可以促进MM细胞凋亡;4.去甲基化药物地西他滨能上调多发性骨髓瘤细胞系中RRAD的表达并抑制细胞增殖、促进细胞凋亡;5.RRAD在多发性骨髓瘤中的高甲基化导致表观遗传学的失活使RRAD的表达量降低。
史学佳[9]（2021）在《肝细胞癌干性分型及其预后特征研究》文中提出
荆潇宽[10]（2021）在《PTEN启动子区甲基化对肝细胞癌分子靶向药物敏感性的影响》文中提出目的:本研究旨在检测肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中肿瘤抑制因子PTEN启动子区甲基化率,探讨PTEN启动子区甲基化的调控机制及其对HCC分子靶向药物敏感性的影响。方法:收集并保存52例接受分子靶向药物索拉非尼（Sorafenib）治疗的HCC患者的肿瘤组织和癌旁组织标本,使用q PCR技术和二代测序（next generation sequencing,NGS）技术分别对组织标本中的PTEN m RNA表达水平和PTEN启动子区域的甲基化率进行检测。根据PTEN表达水平或PTEN启动子区甲基化率的中位数将患者分为2组（高水平组和低水平组）,通过比较和分析两组患者的进展时间（TTP）和总生存期（OS）评价PTEN启动子区甲基化在HCC中的临床意义。体外培养两种代表性HCC细胞（MHCC97-H和Hep G2）,用DNA甲基转移酶1（DNA-methyltransferase 1,DNMT1）抑制剂地西他滨（Decitabine）处理细胞后检测Decitabine对MHCC97-H和Hep G2细胞PTEN启动子区甲基化率和PTEN表达水平的影响,并通过染色质免疫沉淀（Ch IP）检测DNMT-1在PTEN启动子区域的募集。用Decitabine和分子靶向药物联合处理MHCC97-H和Hep G2细胞后,采用MTT法测定细胞IC50值,采用transwell实验检测细胞体外转移或侵袭情况。结果:PTEN m RNA在HCC组织中的表达水平显着低于其在癌旁组织中的表达水平（p<0.05）,PTEN启动子区甲基化率在HCC组织中显着高于癌旁组织（p<0.05）。PTEN高表达组患者接受分子靶向药物Sorafenib治疗的预后好于PTEN低表达组患者,两组患者之间的TTP和OS均有统计学差异（p<0.05）;PTEN启动子区低甲基化组患者接受Sorafenib治疗的预后好于PTEN启动子区高甲基化组患者,两组患者之间TTP和OS均有统计学差异（p<0.05）。PTEN启动子区的甲基化作用受DNMT-1的调控,Decitabine处理可下调MHCC97-H和Hep G2细胞PTEN启动子区的甲基化水平、上调PTEN的表达水平,并抑制DNMT-1在PTEN启动子区的募集作用。MHCC97-H和Hep G2细胞用Decitabine处理或者直接过表达PTEN均能够显着降低分子靶向药物对细胞的IC50值,Decitabine（5μmol/L）联合Sorafenib（1μmol/L）应用能够显着增强Sorafenib对HCC细胞体外迁移和侵袭的抑制作用。结论:本研究成功建立了基于二代测序的新型PTEN启动子区甲基化水平检测的方法,可用于HCC组织中PTEN启动子区甲基化率的检测。发现PTEN启动子区甲基化率与HCC患者预后负相关。PTEN启动子区甲基化率受DNMT1调控,降低PTEN启动子区甲基化水平可增强HCC细胞对分子靶向药物的敏感性。本研究的结果提示PTEN启动子区甲基化或可作为HCC的诊断指标或治疗靶标。
二、肝细胞癌抑癌基因和癌基因甲基化水平的检测及意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝细胞癌抑癌基因和癌基因甲基化水平的检测及意义（论文提纲范文）
（2）沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响（论文提纲范文）
| 材料和方法 |
| 试剂与仪器 |
| 慢病毒颗粒载体DNMT1 si RNAi的构建 |
| 细胞的培养及转染方法 |
| 转染后K562细胞中DNMT1 m RNA表达的RT-PCR法检测 |
| 转染后K562细胞中DNMT1蛋白表达的Western blot法检测 |
| WIF-1基因启动子甲基化的甲基化特异性PCR(MSP）法检测 |
| 细胞增殖的台盼蓝拒染法检测 |
| 细胞增殖的MTT法检测 |
| 细胞集落形成能力的集落形成实验检测 |
| 细胞凋亡的流式细胞术检测 |
| 转染后K562细胞Wnt/β-catenin及其下游信号通路相关蛋白变化的Western blot法检测 |
| 统计学分析 |
| 结果 |
| DNMT1 si RNAi对K562细胞中DNMT1 m RNA和蛋白表达的影响RT-PCR检测 |
| DNMT1 si RNAi对K562细胞中WIF-1基因启动子甲基化的影响 |
| DNMT1 si RNAi对K562细胞增殖和集落形成能力的影响 |
| DNMT1 si RNAi对K562细胞凋亡的影响 |
| DNMT1 si RNAi对K562细胞Wnt/β-catenin及其下游信号通路的影响 |
| 讨论 |
（3）子宫内膜癌组织中miR-128-2基因启动子DNA甲基化水平与miR-128-2、DJ-1表达及临床病理因素相关性的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 组织标本 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 荧光实时定量 |
| 1.2.1. 1 组织DNA提取及转化 |
| 1.2.1. 2 定量甲基化特异性PCR检测 |
| 1.2.2 Real time quantitative-PCR (qRT-PCR)法检测子宫内膜癌组织中miR-128-2和DJ-1 mRNA表达水平 |
| 1.2.2. 1 组织中总RNA提取 |
| 1.2.2. 2 miRNA逆转录和实时定量PCR反应 |
| 1.2.2. 3 mRNA逆转录和实时定量PCR反应 |
| 1.2.3 Western Blot测定组织中DJ-1蛋白表达水平 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 DJ-1 mRNA及蛋白在子宫内膜癌组织与癌旁组织中的表达差异 |
| 2.2 miR-128-2在子宫内膜癌组织与癌旁组织中的表达差异 |
| 2.3 miR-128-2基因启动子区DNA甲基化水平在子宫内膜癌组织与癌旁组织中的差异 |
| 2.4 子宫内膜癌组织中miR-128-2 DNA甲基化与miR-128-2、DJ-1 mRNA表达的相关性 |
| 2.5 miR-128-2 DNA甲基化水平、miR-128-2及DJ-1mRNA表达水平与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系 |
| 3 讨论 |
（4）肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 患者和组织样本 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 RT-PCR检测肝细胞癌组织中HCA587的表达 |
| 1.4 HCA587基因启动子区甲基化检测 |
| 1.5 免疫印迹检测 |
| 1.6 细胞培养和转染 |
| 1.7 免疫沉淀 |
| 1.8 Transwell迁移和侵袭实验 |
| 1.9 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 肝细胞癌患者临床病理指标 |
| 2.2 HCA587的表达 |
| 2.3 肝细胞癌组织中HCA587翻译水平和表达变化 |
| 2.4 HCA587启动子区甲基化水平 |
| 2.5 5-Azacytidine抑制HCA587的甲基化，并促进HCA587的m RNA表达 |
| 2.6 5-Azacytidine促进HCA587和TAF9的结合 |
| 2.7 5-Azacytidine或过表达HCA587上调HCC细胞的迁移和侵袭 |
| 3 讨论 |
（6）CFIm25对结直肠癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 结直肠癌概述 |
| 1.1.1 结直肠癌流行病学概况 |
| 1.1.2 结直肠癌发病的分子机制 |
| 1.1.3 转移性结直肠癌靶向治疗的研究进展 |
| 1.2 CFIm25 在实体肿瘤中的研究进展 |
| 1.2.1 CFIm25及APA概述 |
| 1.2.2 CFIm25 在实体肿瘤中的肿瘤抑制作用 |
| 1.2.3 CFIm25 在白血病和胶质母细胞瘤中的不同作用 |
| 第2章 50 岁以下结直肠癌的回顾性分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 资料收集 |
| 2.3.2 统计学处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 50 岁以下结直肠癌患者的临床特征 |
| 2.4.2 50 岁以下结直肠癌患者生存率的影响因素 |
| 2.4.3 50 岁以下结直肠癌患者的生存分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 结直肠癌差异miRNA筛选及靶基因预测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 差异表达miRNA筛选 |
| 3.3.2 miRNA靶基因预测 |
| 3.3.3 PPI网络构建与分析 |
| 3.3.4 GO功能注释及KEGG通路富集分析 |
| 3.3.5 生存分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 数据集筛选 |
| 3.4.2 差异表达miRNA的筛选。 |
| 3.4.3 miRNA靶基因预测 |
| 3.4.4 PPI网络的构建及关键子模块筛选 |
| 3.4.5 GO功能注释 |
| 3.4.6 KEGG通路富集分析 |
| 3.4.7 生存分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 结直肠癌中CFIm25 的表达 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 病理标本 |
| 4.2.2 实验细胞 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 实验试剂及耗材 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞培养 |
| 4.3.2 细胞传代 |
| 4.3.3 细胞冻存 |
| 4.3.4 细胞复苏 |
| 4.3.5 Western blotting |
| 4.3.6 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CFIm25 在结直肠癌组织中的表达 |
| 4.4.2 CFIm25 在结直肠癌细胞株中的表达 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 CFIm25 对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验仪器 |
| 5.2.2 实验试剂及耗材 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 病毒感染结直肠癌细胞 |
| 5.3.2 CCK8 实验 |
| 5.3.3 克隆形成实验 |
| 5.3.4 细胞划痕实验 |
| 5.3.5 Transwell迁移侵袭实验 |
| 5.3.6 裸鼠皮下移植瘤模型建立及处理 |
| 5.3.7 实验数据统计 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 CFIm25 的干扰和过表达 |
| 5.4.2 CFIm25 对结直肠癌细胞增殖的影响 |
| 5.4.3 CFIm25 对结直肠癌细胞迁移侵袭的影响 |
| 5.4.4 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 CFIm25 调控结直肠癌细胞增殖迁移的分子机制研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 实验仪器 |
| 6.2.2 实验试剂 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 流式细胞术 |
| 6.3.3 统计学方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 CFIm25 对结直肠癌细胞细胞周期的影响 |
| 6.4.2 CFIm25 对结直肠癌细胞EMT的影响 |
| 6.4.3 CFIm25对JNK、p38 信号通路的影响 |
| 6.4.4 CFIm25 调控JNK、p38 信号通路对结直肠癌增殖转移的验证 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对人食管癌细胞生物学特性及SOX1基因表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一节 5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对人食管癌细胞生物学特性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第二节 5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对SOX1 基因表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:食管鳞状细胞癌的基础研究和防治综述 |
| 参考文献 |
| 附录 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）RRAD基因在多发性骨髓瘤中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 RRAD在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 RRAD对MM细胞系生物学功能的影响及其机制研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 RRAD在恶性肿瘤中的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）PTEN启动子区甲基化对肝细胞癌分子靶向药物敏感性的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.前言 |
| 1.1 分子靶向治疗是进展期HCC治疗的重要策略 |
| 1.2 PTEN对恶性肿瘤细胞耐药性的调控作用 |
| 1.3 抑癌基因启动子区甲基化在细胞癌变中的作用 |
| 1.4 现有启动子区甲基化研究方法的不足之处 |
| 1.5 本研究的概况 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 PTEN 启动子区甲基化检测 |
| 3.2 HCC组织中PTEN启动子区高甲基化的临床意义 |
| 3.3 DNMT-1 调控PTEN启动子区的甲基化水平 |
| 3.4 降低PTEN启动子区甲基化对分子靶向药物杀伤HCC细胞的影响 |
| 4.讨论 |
| 本研究主要创新点 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 肝细胞癌治疗策略的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
四、肝细胞癌抑癌基因和癌基因甲基化水平的检测及意义（论文参考文献）
- [1]甲基胞嘧啶双加氧酶1在肿瘤中的研究进展[J]. 刘文峥,陈勇军. 中华实验外科杂志, 2021(12)
- [2]沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响[J]. 武坤,晋臻,李轶勋,李昕,程沈菊,李艳红,郭翀. 中国实验血液学杂志, 2021(06)
- [3]子宫内膜癌组织中miR-128-2基因启动子DNA甲基化水平与miR-128-2、DJ-1表达及临床病理因素相关性的研究[J]. 朱其舟,舒宽勇,陈和平,肖仲清. 中国计划生育和妇产科, 2021(11)
- [4]肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移[J]. 冷雪,刘萍,陈桢,周亮. 解剖学杂志, 2021(05)
- [5]应用二代测序技术检测肝细胞癌组织样本中抑癌基因 PTEN基因启动子甲基化率[J]. 荆潇宽,姜棋予,李丛舒,张年荣,柴燕涛,冯帆,李伯安,李炎坤. 中华预防医学杂志, 2021(10)
- [6]CFIm25对结直肠癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究[D]. 孙小杰. 吉林大学, 2021(01)
- [7]5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对人食管癌细胞生物学特性及SOX1基因表达的影响[D]. 杨明瑞. 新乡医学院, 2021(01)
- [8]RRAD基因在多发性骨髓瘤中的作用机制研究[D]. 易呈风. 遵义医科大学, 2021(01)
- [9]肝细胞癌干性分型及其预后特征研究[D]. 史学佳. 南京师范大学, 2021
- [10]PTEN启动子区甲基化对肝细胞癌分子靶向药物敏感性的影响[D]. 荆潇宽. 湖北科技学院, 2021(07)