一、HIF-1α表达与膀胱癌分级与复发相关性研究（论文文献综述）
陈彦斌,张波,夏先鹍,袁建林,杨帆[1]（2021）在《Hsp60表达下调通过促进TGFBI分泌增强膀胱癌细胞侵袭转移》文中指出目的探索Hsp60蛋白表达对膀胱癌细胞侵袭转移的影响。方法免疫组化检测膀胱癌组织芯片Hsp60蛋白的表达,统计学分析其与膀胱癌患者临床参数的相关性;利用慢病毒载体构建Hsp60稳定干涉的膀胱癌细胞株,Transwell及划痕实验检测Hsp60表达对膀胱癌细胞侵袭转移的影响。RNA-seq分析Hsp60稳定干涉后基因表达的差异,筛选出与侵袭转移相关的基因。Western-bolt及ELISA验证差异基因在蛋白水平的变化,功能学验证差异基因在Hsp60诱导的膀胱癌侵袭转移中的作用,并探索干涉Hsp60表达影响差异基因表达的机制。结果 Hsp60蛋白特异性表达在膀胱癌细胞的胞质中,且在浸润性膀胱癌组织中的表达显着降低。统计学结果显示:Hsp60的表达与膀胱癌的转移、临床分级及复发显着相关;细胞学实验证实:干涉Hsp60表达后膀胱癌细胞的侵袭迁移能力显着增强的同时TGFBI的表达及分泌显着升高;利用siRNA阻断Hsp60稳定干涉膀胱癌细胞的TGFBI表达后,可显着抑制Hsp60干涉所造成的膀胱癌细胞侵袭迁移增强。进一步研究发现:Hsp60干涉后膀胱癌细胞线粒体ROS水平及HIF1α的表达均显着升高。利用MitoEMPO降低ROS水平或者利用siRNA阻断HIF1α表达后,Hsp60干涉引起的TGFBI表达及分泌升高可被显着抑制。结论 Hsp60表达降低通过促进TGFBI表达增强膀胱癌细胞的侵袭转移,Hsp60表达降低通过ROS/HIF1α信号通路促进TGFBI的表达。
韦高猛[2]（2020）在《DJ-1在前列腺癌组织中的表达及对LNCap细胞增殖和侵袭能力的影响》文中进行了进一步梳理目的:研究DJ-1在前列腺癌组织中的表达,结合临床病理特征,探索DJ-1与前列腺癌的关系。探讨DJ-1对前列腺癌LNCap细胞增殖和侵袭能力影响。方法:（1）选取51例前列腺癌患者组织样本作为实验组,50例良性前列腺增生患者组织样本作为对照组。实验组中患者均是未经内分泌治疗及放化疗的初诊患者,并根据Gleason评分水平进行亚分组（Gleason评分≤6、Gleason评分=7分和Gleason评分≥8分组）。采用免疫组化SP法检测50例良性前列腺增生和51例前列腺癌术后标本组织中DJ-1表达情况,分析DJ-1表达水平与前列腺癌的临床和病理参数之间的相关性;通过TCGA数据库挖掘前列腺癌组织和癌旁组织间DJ-1的表达及甲基化修饰水平差距。（2）培养前列腺癌LNCap细胞株并构建细胞转染模型,然后分成3组:空白对照组（CON）、阴性对照组（NC）和LNCap-si RNA组（KD）。通过绿色荧光检验转染效率,并采用Western blot和RT-q PCR验证沉默效率,然后采用CCK-8技术、平板克隆形成技术、Transwell小室实验和细胞划痕实验技术检测前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力。结果:（1）DJ-1在前列腺癌中的表达水平（IRS:3.7±0.51）明显高于前列腺增生（IRS:2.2±0.57）,差异有统计学意义（P<0.05）;Gleason评分≥8分组IRS:7.9±0.9,Gleason评分=7分组IRS:4.7±0.6,Gleason评分≤6分组IRS:2.7±0.6,其存在统计学显着性差异（P<0.05）,DJ-1表达水平与前列腺癌Gleason评分呈正性相关。DJ-1表达高低与前列腺癌的分期、Gleason评分、TPSA值、转移病灶数有明显相关性（P<0.05）。TCGA数据库的挖掘前列腺癌组织的DJ-1 m RNA的表达量明显高于癌旁正常组织,而甲基化修饰水平显着低于正常组织,差异有统计学意义（P<0.05）。生存分析显示DJ-1表达与PCa患者生化复发显着相关（P=0.032）。（2）经过慢病毒感染72h,绿色荧光检验转染效率在达80%以上。通过Western Blot和RT-q PCR分析沉默效率表明,KD组DJ-1的m RNA和蛋白表达水平显着低于CON组和NC组（P<0.01）,而CON组与NC组间的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。CCK-8实验显示KD组的细胞生长速度随着时间的推移明显低于NC组和CON组（P<0.01）;平板克隆形成实验显示KD组的细胞增殖和克隆形成率明显低于NC组和CON组（P<0.05）;Transwell显示KD组的侵袭细胞数明显低于CON组和NC组（P<0.01）,CON组和NC组间侵袭细胞数差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验显示KD组的划痕愈合度（12.26%）显着低于CON组（49.28%）和NC组（47.88%）（P<0.001）。结论:DJ-1在前列腺癌组织中显着上调,且与前列腺癌患者Gleason评分呈正性相关,并与前列腺癌的病理分期、TPSA值、转移灶数量有一定的关系,且DJ-1高表达与患者生化复发相关;沉默DJ-1表达可显着降低前列腺癌LNCap细胞增殖、侵袭及迁移能力。DJ-1可能成为前列腺癌新的肿瘤标志物及治疗新耙点。
王丽强[3]（2020）在《长链非编码RNA FAL1在结直肠癌中的作用及机制的研究》文中提出目的:研究长链非编码RNA FAL1基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭迁移能力及上皮间质化的影响和相关作用机制,为结直肠癌预后评估和靶向治疗提供新方向。方法:1.我们选取临床术后切除结直肠癌标本及相应癌旁组织共50组,通过实时定量PCR（RT-q PCR）技术定量分析lnc RNA FAL1在结直肠癌及癌旁组织中的表达差异情况,同时分析在正常结肠上皮细胞HCo Epi C及5种结直肠癌细胞系中lnc RNA FAL1的表达情况。将50组标本按照lnc RNA FAL1表达情况分为高表达组及低表达组,依据临床信息统计分析lnc RNA FAL1与癌组织大小、TNM分期及淋巴结转移情况等临床病例资料的相关性,并作Kaplan-Meier生存曲线分析。2.通过人工合成lnc RNA FAL1过表达及敲低质粒载体,转染结直肠癌细胞系HCT116和HT29细胞,筛选稳定的lnc RNA FAL1过表达及敲低细胞株,确认lnc RNA FAL1的过表达及敲低情况,通过MTT及细胞克隆形成实验,细胞增殖、侵袭和迁移实验观察等方法研究lnc RNA FAL1对结直肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。通过RT-q PCR和western blot测定对lnc RNA FAL1上皮间质化（EMT）相关因子E-cadherin和Vimentin的表达情况的影响。3.通过Reg RNA网站预测靶定lnc RNA FAL1的mi RNA,运用双荧光素酶报告实验验证lnc RNA FAL1与mi R-637之间直接的靶向关系,运用RT-q PCR进一步验证lnc RNA FAL1及mi R-637的相互影响关系。为深入发现mi R-637在结直肠癌中的作用,运用RT-q PCR技术测定50组结直肠癌及癌旁组织标本中mi R-637表达水平,通过Pearson相关检验分析结直肠癌组织中mi R-637与lnc RNA FAL1表达量的相关性。通过合成mi R-637 mimics及ASO-mi R-637转染HCT116和HT29细胞,人为过表达及敲低这两种细胞中mi R-637的表达水平,运用MTT、细胞克隆形成实验、侵袭和迁移实验方法观察细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化,通过RT-q PCR和western blot测定EMT相关因子E-cadherin和Vimentin的表达情况。4.通过Target Scan 7.1网站预测分析mi R-637潜在下游靶基因,使用双荧光素酶报告实验检测mi R-637和NUPR1之间的直接靶向关系,运用RT-q PCR进一步验证细胞中mi R-637对NUPR1的影响。RT-q PCR和Pearson相关检验分析结直肠癌及癌旁组织标本中NUPR1 m RNA的表达水平及mi R-637与NUPR1表达量的相关性。通过人工合成载体质粒过表达或沉默NUPR1,运用MTT、克隆形成、侵袭和迁移实验分析NUPR1对HCT116和HT29细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,RT-q PCR和western blot测定EMT相关因子E-cadherin和Vimentin的表达量。5.通过文献检索发现NUPR1与HIF-1α存在相关性,而HIF-1α与LASP1存在关联,通过RT-q PCR及western blot检测过表达或敲低NUPR1的HCT116和HT29细胞中HIF-1α与LASP1的表达水平,同时分析过表达NUPR1同时沉默HIF-1α对HCT116和HT29细胞恶性表型的影响。6.同时过表达Lnc RNA FAL1和mi R-637,观察HCT116和HT29细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化,运用RT-q PCR和western blot分析NUPR1、HIF-1α和LASP1表达水平的变化情况。结果:1.通过RT-q PCR对50组结直肠癌和癌旁组织分析发现lnc RNA FAL1在结直肠癌组织中显着高表达（P<0.01）,相对于正常结肠上皮细胞Hco Epi C,HCT116、HT29、SW620、SW480和Lo Vo结直肠癌细胞系中lnc RNA FAL1的表达水平显着增高,尤其以HCT116（P<0.001）和HT29（P<0.01）细胞系中表达量最高。通过统计分析临床数据资料,发现lnc RNA FAL1表达水平与患者性别、年龄及病理类型是无关的,与肿瘤的大小、TNM分期及淋巴结转移情况有关（P<0.05）。同时,Kaplan-Meier生存曲线结果提示lnc RNA FAL1高表达的结直肠癌患者生存率显着低于lnc RNA FAL1低表达的患者（P<0.05）。2.RT-q PCR结果提示pc DNA3-lnc RNA FAL1可显着提高HCT116和HT29细胞中lnc RNA FAL1（P<0.001）,psh R-lnc RNA FAL1则可高效率敲低lnc RNA FAL1（P<0.01）。MTT结果表明,HCT116和HT29细胞接种后48h,pc DNA3-lnc RNA FAL1组细胞增殖活性较对照组显着提高（P<0.05）,并且随时间推移（72h、96h）增殖活性逐步增高,psh R-lnc RNA FAL1组细胞增殖活性则显着降低（P<0.05）,随时间（72h、96h）持续降低。平板克隆实验结果表明过表达lnc RNA FAL1可显着增强HCT116和HT29细胞的集落形成能力（P<0.01）,沉默lnc RNA FAL1则集落形成能力受到抑制（P<0.01）。侵袭和迁移实验结果揭示过载lnc RNA FAL1可显着提高HCT116和HT29细胞侵袭和迁移能力（P<0.01）,下调lnc RNA FAL1侵袭和迁移细胞显着减少（P<0.01）。RT-q PCR和western blot结果表明上调lnc RNA FAL1可促进EMT进程,反之亦然（P<0.01）。3.Reg RNA网站检索结果提示lnc RNA FAL1的122-144位有mi R-637的结合位点,推测lnc RNA FAL1可能是mi R-637作用靶点。双荧光素酶报告实验结果显示,p GL/Luc-lnc RNA FAL1 WT和ASO-mi R-637共转染组荧光素酶活性明显提高（P<0.001）,p GL/Luc-lnc RNA FAL1 WT和mi R-637 mimics共转染组荧光素酶活性显着降低（P<0.001）,同时过表达mi R-637及敲低mi R-637会导致lnc RNA FAL1的低表达及高表达,而过表达及敲低lnc RNA FAL1会导致mi R-637的低表达及高表达,辅证两者的直接靶向关系。结直肠癌及癌旁组织RT-q PCR结果提示mi R-637在结直肠癌组织中显着低表达（P<0.01）,且lnc RNA FAL1和mi R-637表达水平呈显着负相关（R=-0.44,P<0.05）。MTT实验、平板克隆实验、侵袭和迁移实验结果表明上调或下调mi R-637可导致HCT116和HT29细胞增殖能力、集落形成能力、侵袭和迁移能力下降或增强,同时引起细胞上皮间质化能力减弱或增强。4.Target Scan 7.1检索结果提示NUPR1为mi R-637潜在靶基因。双荧光素酶报告实验结果证明p GL/Luc-NUPR1 WT和mi R-637 mimics共转染组荧光素酶活性显着降低,p GL/Luc-NUPR1 WT和ASO-mi R-637共转染组荧光素酶活性则显着提高（P<0.01）。RT-q PCR结果提示mi R-637 mimics转染组细胞NUPR1 m RNA表达明显下降,反之亦然（P<0.01）,辅证二者直接靶向关系。同时通过RT-q PCR结果发现NUPR1在癌组织中显着高表达（P<0.01）,与mi R-637的表达水平呈负相关（R=-0.37,P<0.01）。MTT实验、平板克隆实验、侵袭和迁移实验结果表明上调或下调NUPR1可导致HCT116和HT29细胞增殖、集落形成、侵袭和迁移能力增强或减弱（P<0.001）。5.通过文献检索发现NUPR1可以影响HIF-1α的表达,而HIF-1α和LASP1的表达呈相关性,RT-q PCR结果证实敲低或上调NUPR1可有效下调或上调HIF-1α和LASP1的表达水平。沉默HIF-1α可有效逆转NUPR1对HCT116和HT29细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响（P<0.01）。6.过表达mi R-637可在一定程度上逆转lnc RNA FAL1对HCT116和HT29细胞增殖、侵袭和迁移能力的促进效应（P<0.01）,RT-q PCR和western blot结果证实lnc RNA FAL1可在m RNA和蛋白水平显着上调NUPR1、HIF-1α和LASP1表达,mi R-637则可在一定程度上逆转lnc RNA FAL1的效应（P<0.001）。结论:Lnc RNA FAL1在结直肠癌中高表达,并与结直肠癌的不良预后有关。Lnc RNA FAL1在结直肠癌中发挥促癌基因效应,可能显着增强肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移、EMT的能力。Lnc RNA FAL1在结直肠癌中主要通过靶向调控mi R-637/NUPR1通路而发挥促癌基因效应,在结直肠癌的临床诊断和治疗的研究上具有一定价值。
王景雨[4]（2020）在《CNF1通过活化RhoC促进膀胱癌血管生成》文中进行了进一步梳理目的:尿道致病性大肠杆菌（Uropathogenic Escherichia coli,UPEC）是尿道感染（Urinary tract infections,UTIs）的主要致病因素,UPEC引起的UTIs能导致膀胱炎、前列腺炎以及肾盂肾炎。有研究表明,UTIs与膀胱癌（Bladder cancer,BC）的发生和发展密切相关。但是,UPEC引起的UTIs参与BC发生、发展的分子机制目前尚不清楚。细胞毒性坏死因子1（Cytotoxic necrotizing factor 1,CNF1）是UPEC产生的关键蛋白毒素,在UPEC导致的UTIs中发挥重要作用。有研究表明,从膀胱炎患者的膀胱组织样本中分离出的UPEC中可以检测到cnf1基因;表达cnf1基因的大肠杆菌在结直肠癌患者的活检中存在率高于憩室病患者。我们前期研究发现CNF1可以促进前列腺癌的发展。但是CNF1在BC进展中的作用机制目前尚无报道。本论文主要研究UPEC产生的CNF1在BC发展中的作用并阐述CNF1参与BC发展的分子机制。方法:1.通过Transwell和明胶酶谱实验,检测CNF1对膀胱癌细胞及血管内皮细胞（HUVEC）运动能力产生的影响。2.利用ELISA和体外血管形成实验,检测CNF1对HUVEC形成管状结构能力的影响。3.利用qPCR、Western blotting实验检测CNF1是否调控膀胱癌细胞表达VEGF以及HIF1?在CNF1调控VEGF表达中的作用。4.利用siRNA技术,检测RhoC在CNF1调控膀胱癌细胞表达HIF1?和VEGF中的作用,并通过Western blotting和Pull-down验证CNF1对RhoC的活化作用。在膀胱癌细胞中过表达活化Rho C（Q63E）或敲低RhoC,检测Q63E和RhoC对HIF1α及VEGF表达的影响。5.通过转录组测序（RNA-seq）技术,分析缺氧条件下过表达Q63E的膀胱癌细胞中与HIF1α降解相关基因表达谱的变化,并通过qPCR和Western blotting验证HSP90α的表达。6.利用Western blotting检测膀胱癌细胞过表达Q63E或用CNF1处理后HSP90α的表达。并通过免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）技术,检测过表达Q63E是否影响HSP90α和HIF1α之间的相互作用。7.利用Western blotting和荧光素酶报告基因实验,检测HSF1和NF-κB是否参与调控膀胱癌细胞中HSP90α的表达以及Q63E和CNF1对HSF1表达水平、磷酸化水平的影响。通过使用抑制剂或者si RNA分别抑制HSF1或NF-κB信号通路,检测CNF1或Q63E对HSP90α、HIF1α和VEGF表达的影响。8.通过在裸鼠皮下异种移植人源膀胱癌细胞,检测Q63E对膀胱癌发展的影响。并通过免疫组化技术（IHC）和免疫荧光实验（IF）检测Q63E分别对肿瘤组织中VEGF、HSP90α、HIF1α的表达水平以及血管生成的影响。9.通过临床膀胱组织样本分析VEGF、HSP90α和HIF1α的表达水平与膀胱癌发展的相关性,并通过数据库分析人类膀胱癌组织中HSP90α和HIF1α的mRNA水平以及HSP90α和HIF1α的表达水平与膀胱癌患者生存率之间的相关性。结果:1.CNF1促进膀胱癌细胞和血管内皮细胞的迁移和侵袭能力。2.CNF1诱导膀胱癌细胞分泌VEGF进而促进HUVEC血管生成。3.HIF1α参与CNF1诱导膀胱癌细胞分泌VEGF。4.CNF1通过活化膀胱癌细胞的RhoC调控HIF1α的稳定和VEGF的分泌。5.CNF1诱导的RhoC活化通过上调HSF1-HSP90α进而调控膀胱癌细胞中HIF1α的稳定。6.活化的RhoC促进异种移植小鼠模型中膀胱癌肿瘤相关的血管生成。7.HSP90α、HIF1α和VEGF与人类膀胱癌的进展相关。结论:通过体外实验,我们发现UPEC产生的CNF1促进膀胱癌细胞和血管内皮细胞的运动能力,并阐明CNF1通过活化膀胱癌细胞中的RhoC提高HSF1的磷酸化水平,诱导HSP90α表达增加,进而调控缺氧条件下HIF1α的稳定性,从而促进VEGF表达和血管生成。我们通过体内实验证明活化型RhoC可以促进膀胱癌发展以及肿瘤组织血管生成。进一步,通过对临床膀胱组织样本和数据库的分析,证实HSP90α、HIF1α和VEGF与膀胱癌的恶性发展有关。
宋剑婵[5]（2020）在《HIF-1α、E-cadherin和N-cadherin在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义》文中研究指明目的:研究发现上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关。EMT的分子特征之一是钙粘蛋白转换,即在EMT过程中,上皮细胞表型标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）表达受到抑制,而间质细胞表型标志物N-钙粘蛋白（N-Cadherin,N-cad）表达上调。另外,缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor,HIFs）是在缺氧环境下特异性表达的调控蛋白,能使肿瘤细胞耐受缺氧环境,并促使肿瘤细胞在缺氧环境中生长。HIF-1α在缺氧诱导的哺乳动物细胞中广泛表达,为全局性调控缺氧应答的因子。本研究通过检测不同卵巢上皮性肿瘤中HIF-1α、E-cadherin和N-cadherin三种蛋白的表达水平,探讨钙粘素（E-cadherin、N-cadherin）和缺氧诱导因子（HIF-1α）两类蛋白在卵巢上皮性肿瘤发生发展中的作用,并分析三种标志蛋白之间的相关性。方法:选取2011年1月至12月间,天津市中心妇产科医院收治的161例原发卵巢上皮性肿瘤且术前未予任何放/化疗的病例为研究对象,其中包括:其中良性肿瘤51例（浆液性肿瘤17例,粘液性肿瘤17例,宫内膜样肿瘤17例）,交界性肿瘤48例（浆液性肿瘤25例,粘液性肿瘤14例,浆粘液性肿瘤6例,宫内膜样肿瘤2例,透明细胞肿瘤1例;FIGO分期Ⅰ期44例,Ⅱ期3例,Ⅲ期1例,Ⅳ期0例）,恶性肿瘤62例,浆液性癌41例（低级别浆液性癌11例,高级别浆液性癌30例）,粘液性癌4例,宫内膜样癌5例,透明细胞癌12例,Kurman分型Ⅰ型癌29例（低级别浆液性癌11例,粘液性癌4例,低级别宫内膜样癌2例,透明细胞癌12例）,Ⅱ型癌33例（高级别浆液性癌30例,中、高级别宫内膜样癌3例）;FIGO分期Ⅰ期20例,Ⅱ期12例,Ⅲ期28例,Ⅳ期2例。通过免疫组织化学SP法检测HIF-1α、E-cadherin及N-cadherin三种抗体在不同组分标本中的表达水平。统计分析采用SAS 9.4软件进行处理,P<0.05时认为差异有统计学意义。定性资料采用“例数（百分比）”表示,根据资料类型和数据特点,采用χ2检验、Fisher精确检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis检验或Spearman秩相关分析。结果:1.HIF-1α在卵巢良性、交界性、恶性肿瘤中的表达呈上升趋势,差异具有统计学意义（P<0.0001）;HIF-1α在组织学分级高分化组的表达明显高于低分化组,差异具有统计学意义（P=0.0041）;HIF-1α的表达与卵巢癌不同分期之间表达不同,差异具有统计学意义（P=0.0003）。2.E-cadherin的低表达在良性、交界性、恶性肿瘤中呈上升趋势,差异具有统计学意义（P<0.001）;E-cadherin在不同组织学分级中,由于评分3分的正常表达列合计为0,无法计算统计量和P值,因此无统计学意义;E-cadherin在不同FIGO分期中表达差异无统计学意义（P=1.0000）。3.N-cadherin过表达在良性、交界性、恶性肿瘤中呈上升趋势,差异具有统计学意义（P<0.001）;N-cadherin在不同组织学分级中的表达差异无统计学意义（P=0.5934）;N-cadherin表达与FIGO分期呈正相关,分期越高,其阳性程度越高,差异具有统计学意义（P=0.0201）。4.随着HIF-1α的阳性表达增加,E-cadherin的低表达增加,差异具有统计学意义（P=0.0016）;N-cadherin过表达也呈上升趋势,差异具有统计学意义（P=0.0115）。结论:1.肿瘤分型与HIF-1α、N-cadherin的表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关,说明随着肿瘤恶性程度的增加,HIF-1α的表达、N-cadherin过表达和E-cadherin低表达均逐渐增加,提示HIF-1α可能通过对肿瘤缺氧微环境的调控,促进卵巢上皮性肿瘤的发展,并且肿瘤细胞逐渐失去上皮特性而获得间质特性。2.HIF-1α在卵巢癌组织学分级高分化组中的表达明显高于低分化组,说明HIF-1α可能与恶性肿瘤细胞的分化有关,缺氧可能通过特定的分子机制促进癌细胞的分化。3.卵巢癌FIGO分期与HIF-1α和N-cadherin的表达呈正相关,说明HIF-1α和N-cadherin的表达可能与肿瘤细胞的侵袭性和转移性有关,促进了卵巢癌的浸润和转移。4.HIF-1α与E-cadherin表达呈负相关,与N-cadherin表达呈正相关,提示了缺氧微环境可能促进了肿瘤细胞的EMT过程,三种标志物在促进卵巢上皮性肿瘤的进展中起着协同作用。
王林昂[6]（2020）在《DNA损伤修复基因APE1抑制尿路上皮癌免疫微环境的研究》文中指出研究背景:尿路上皮癌是起源于尿路上皮的一种多源性的恶性肿瘤,包括膀胱癌以及上尿路尿路上皮癌,是最常见的免疫相关性恶性肿瘤。近年免疫检查点抑制剂使尿路上皮癌的治疗带来了巨大进步,但总体有效率不高。除了肿瘤细胞PD-L1表达和肿瘤突变负荷外,免疫微环境也是影响疗效的重要因素。肿瘤细胞DNA损伤修复的失衡或缺陷可影响肿瘤新抗原的产生,以及免疫微环境的改变进而影响肿瘤的免疫治疗,但目前研究较少。本研究旨在研究DNA损伤修复基因APE1与尿路上皮癌免疫微环境的关系,为进一步阐明尿路上皮癌免疫抑制微环境的机制,以及ICI治疗患者个体化和联合ICI治疗提供研究证据。研究材料和方法:1.公共临床数据库使用:TCGA数据库2.细胞模型:采用不同人体膀胱肿瘤细胞系T24和BIU87等,小鼠膀胱肿瘤细胞系MB49以及炎症细胞系THP-1和RAW264.7细胞。3.动物模型:（1）采用C57小鼠,4周大小时皮下种植小鼠膀胱癌细胞MB49,随机分为4组,分比为对照组,E3330组,PD-1组和E3330联合PD-1组,评估APE1抑制剂对膀胱肿瘤免疫治疗的作用。4.病人标本:A.收集在我院诊断为上尿路尿路上皮癌并行手术的病例及其手术病灶石蜡标本,通过免疫组化的方法评估BER通路和STING通路相关蛋白以及TILS之间的相关性以及与UTUC预后的关系;B.收集在我院诊断为膀胱尿路上皮癌并行膀胱癌根治术的病例及其手术病灶石蜡块标本,通过免疫组化的方法评估APE1、VEGFA及CD163与膀胱癌预后的关系。5.实验方法:本研究采用了生物信息学分析、免疫组化、Western blot、多重免疫荧光、细胞转染、RNA测序、流式细胞分析实验等。研究结果:1.TCGA数据库分析发现APE1表达是MIBC患者PFI的独立预后因素,APE1高表达总体上与膀胱癌免疫抑制显着相关,后者包括免疫评分、免疫细胞和多种炎症因子。APE1联合M2巨噬细胞可更好地将MIBC分为低危险组与高风险组。两组基因表达存在显着差异,在高风险组中除APE1表达和M2巨噬细胞丰度较高,其余所有抗肿瘤活性的因子表达在高风险组中均显着降低,特别是M1巨噬细胞、细胞毒性T细胞丰度和IFNγ评分、IFNG基因表达水平以及ICC。2.APE1敲低的膀胱癌细胞BIU-87进行差异基因分析,在GO分析中分子功能方面富集分析前3位分别是受体调节活性,受体配体活性,以及细胞因子活性;KEGG富集分析的前10个通路中的细胞因子-细胞因子受体的相互作用、类风湿性关节炎、IL-17信号通路以及TNF信号通路都与细胞因子密切相关。3.在上尿路尿路上皮癌中IRF3高表达与较好的预后相关,而APE1、polβ高表达与不良预后相关;CD8+T细胞浸润是UTUC预后良好的因素,并且Polβ与T细胞的浸润具有相关性。4.通过免疫组化和多重免疫荧光染色证实膀胱癌组织中高CD163+TAMs比率与预后不良有关,APE1表达与VEGFA表达水平和CD163+TAM的浸润增加呈正相关,提示APE1可能通过VEGFA参与巨噬细胞极化的调节。此外,APE1的高表达与膀胱癌中LVI的存在有关,LVI阳性、APE1的高表达和膀胱癌中CD163+TAM的高比率可能导致患者生存时间缩短。5.膀胱癌MB49小鼠移植瘤模型实验,进一步表明发现APE1抑制剂E3330与PD-1Ab具有协同抑制肿瘤的效应。E3330可显着抑制肿瘤血管形成,以及M2巨噬细胞的浸润;PD-1Ab有显着促进CD8细胞浸润的作用。免疫组化和流式细胞检测两种方法在评估肿瘤免疫细胞浸润方面具有互相补充的意义。结论:DNA损伤修复基因APE1可能是影响尿路上皮癌免疫微抑制环境和患者预后的重要因素;抑制APE1对膀胱癌的免疫治疗具有协同作用;APE1作为标志物或协同治疗靶点对今后尿路上皮癌的免疫治疗个体化具有重要的科学意义和潜在的应用价值。
张永建[7]（2019）在《MCT1对膀胱癌侵袭作用及糖代谢的调节》文中研究表明目的:单羧酸转运蛋白1（MCT1）是介导乳酸转运的重要因子。由于瓦伯格效应的存在,癌症细胞即使在氧气充足的环境中也是通过将葡萄糖转换为乳酸产生能量,因此,乳酸的产生及清除过程是癌症细胞代谢的重要信号传导途径。最近的相关研究表明MCT1在癌细胞发展过程中起着重要的致癌作用,在不同系统肿瘤中均发现存在MCT1的高表达,并且其表达与肿瘤的恶性程度密切相关。同时上皮间质转化过程在各种肿瘤细胞的进展和转移等一系列复杂的过程中起着至关重要的作用,同时发现上皮间质转换与膀胱癌细胞转移及耐药性的产生有关。膀胱癌（BCa）是威胁人群健康的常见泌尿系统恶性肿瘤。虽然治疗手段在不断进步,但膀胱癌患者的远期预后仍不十分理想。本研究的主要目的是通过对MCT1在膀胱癌中的表达情况分析其余患者预后之间的关系,并通过分析MCT1在膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,分析其在膀胱癌细胞中的作用机制及其对膀胱癌糖代谢的调节。方法:本研究主要旨在探讨MCT1在膀胱癌细胞中的表达情况及其作用。我们选取了124例患者的膀胱癌组织,通过免疫组织化学染色的方法研究其中MCT1的表达情况,对比MCT1在有和没有淋巴转移患者中的表达情况。通过检测MCT1的表达情况,将患者分为MCT1高表达组以及MCT1低表达组,通过分析两组患者的预后情况,分析MCT1的表达与膀胱癌患者预后的关系。我们还利用癌症基因组图谱数据库（TCGA数据库）选取了426例患者,通过同样的分组研究探讨了MCT1与膀胱癌的预后的关联。利用si RNA转染技术下调膀胱癌细胞中MCT1的表达,利用CCK8法及体内成瘤实验研究下调MCT1的表达对膀胱癌细胞增殖活性的影响,并且通过划痕实验分析下调MCT1的表达对体外膀胱癌细胞迁移作用的影响,最后利用Transwell实验分析下调膀胱癌细胞中MCT1的表达对膀胱癌细胞体外侵袭作用的影响。本实验还通过分析低氧环境对MCT1、HIF-1α的表达影响,以及乳酸的转运情况,着重利用蛋白印记法分析下调MCT1的表达对膀胱癌细胞有氧糖酵解的影响及其与HIF-1α之间的关系。结果:本研究发现存在淋巴结转移（P=0.022）及远处转移（P=0.005）的膀胱癌患者细胞中MCT1的表达高于无淋巴结及远处转移患者。通过对124例患者中MCT1的表达情况与患者总生存期的比较,发现MCT1高表达患者的生存期明显低于MCT1低表达患者（P﹤0.001）。通过下调MCT1基因的表达,利用CCK8法及体内成瘤实验发现下调MCT1的表达明显抑制膀胱癌细胞的增殖活性。通过划痕实验分析发现下调MCT1的表达明显抑制膀胱癌细胞的迁移作用。利用Transwell实验分析发现下调膀胱癌细胞中MCT1的表达明显抑制了膀胱癌细胞的侵袭作用。利用蛋白印记法分析发现抑制MCT1在膀胱癌细胞中的表达抑制了上皮间质转化的过程,使得E-钙粘蛋白的表达明显升高,同时使得N-钙粘蛋白、波形蛋白和Snail的表达下降。MCT1表达的下调可以降低细胞培养基中的乳酸的水平,以及HK2,GLUT1和LDHB等于糖酵解相关基因的表达,同时MCT1部分依赖于HIF-1α基因的表达,低氧环境可以使MCT1和HIF-1α的表达上升,抑制HIF-1α的表达MCT1的表达也相应下调,可以发现MCT1的表达与肿瘤细胞的糖代谢密切相关。结论:1、MCT1的高表达与膀胱癌患者的不良预后密切相关。2、下调MCT1表达后膀胱癌细胞增殖、侵袭及迁移作用减弱;3、MCT1可影响膀胱癌细胞糖代谢过程。4、MCT1可能通过影响上皮间质转化和有氧糖酵解影响膀胱癌的进展和转移。
崔嘉晗[8]（2019）在《低氧诱导因子1α表达与膀胱尿路上皮癌预后不良有关》文中指出目的:低氧诱导因子1-α（HIF1-α）是缺氧细胞的重要转录调控因子,通过调控下游基因的转录,对抗缺氧的造成的细胞功能紊乱,增强糖酵解代谢,调节细胞的生物学过程。本文通过检测HIF1-α在膀胱尿路上皮癌组织中的表达。方法:收集于青岛大学附属医院84位行膀胱癌根治性手术的膀胱尿路上皮癌患者,对收集到的84例膀胱癌组织行免疫组织化学方法进行染色,检测HIF1-α蛋白表达情况,我们分析了膀胱癌患者中的HIF1-α表达以及与年龄、性别、肿瘤分化、肿瘤最大直径、肿瘤数量、有无脉管及神经侵犯等临床和生物学参数的相关性。采用Kaplan-Meier方法和Cox比例风险回归模型研究这些因素的预后作用。结果:84位膀胱癌患者,男性共72例,其中42例HIF1-α阴性表达,30例HIF1-α阳性表达。女性共12例,其中11例HIF1-α阴性表达,1例HIF1-α阳性表达,差异具备统计学意义（P值<0.05）。其中平均年龄68.9±10.8岁,低度恶性70例,其中44例HIF1-α阴性表达,28例HIF1-α阳性表达。高度恶性12例,其中9例HIF1-α阴性表达,3例HIF1-α阳性表达,差异不具备统计学意义（P值>0.05）。无脉管侵犯73例,其中45例HIF1-α阴性表达,28例HIF1-α阳性表达;有脉管侵犯11例,其中8例HIF1-α阴性表达,3例HIF1-α阳性表达,差异不具备统计学意义（P值>0.05）。无神经侵犯共76例,其中47例HIF1-α阴性表达,29例HIF1-α阳性表达。有神经侵犯8例,其中6例HIF1-α阴性表达,2例HIF1-α阳性表达。差异不具备统计学意义（P值>0.05）。HIF1-α阴性表达患者肿瘤最大直径4.5±2.0cm,HIF1-α阳性表达患者肿瘤最大直径4.0±1.6cm,差异不具备统计学意义（P值>0.05）。HIF1-α阴性表达患者肿瘤数量1.9±1.5,HIF1-α阳性表达患者肿瘤数量1.8±1.5,差异不具备统计学意义（P值>0.05）。HIF1-α阴性表达患者年龄67.4±11.5岁,HIF1-α阳性表达患者肿瘤年龄71.6±8.9岁,差异不具备统计学意义（P值>0.05）。通过单变量和多变量分析,HIF1-α阳性表达被确定为膀胱癌总生存期的重要危险因素。Kaplan-Meier生存分析显示,与HIF1-α阴性染色的患者相比,HIF1-α阳性表达的患者的总生存期更差。结论:研究结果表明,低氧诱导因子1-α的阳性表达在成年膀胱尿路上皮癌患者中具有性别差异,男性患者的阳性率高于女性患者。缺氧诱导因子1-α的阳性表达是行膀胱癌根治性手术的膀胱尿路上皮癌患者存活率低独立预测因子。HIF1α表达可作为行膀胱癌根治性手术的膀胱尿路上皮癌患者的预后标志物,帮助医生为每位患者选择最佳治疗方案。
周辉[9]（2019）在《EZH2相关通路参与前列腺癌及膀胱癌进展及其机制研究》文中研究表明EZH2参与介导缺氧诱导的TGFBR2表达沉默和前列腺癌进展目的:转化生长因子β（Transforming Growth Factor β,TGF-β）信号通路和缺氧微环境的变化都被证明在包括前列腺癌（prostate cancer,PCa）在内的许多肿瘤的进展中发挥作用。新的证据也表明,TGF-β通路的重要调节蛋白转化生长因子β受体2（transforming growth factor β receptor Ⅱ,TGFBR2）的下调在PCa的发生发展中担当重要角色,但其在PCa中的生物学功能和分子生物学调控机制还有待进一步阐明。本研究中我们旨在阐明缺氧微环境和TGF-β信号通路间的调控网络,更好明确PCa中的分子调控机制。方法:通过在缺氧或正常氧条件下培养前列腺癌细胞系来评价缺氧对TGFBR2表达的影响。利用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation specific polymerase chain reaction,MSP）和去甲基化药物处理,来验证TGFBR2的启动子可发生甲基化沉默。此外通过特异性小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）或小分子抑制剂沉默Zeste增强子同源物 2（Enhancer of zeste homolog 2,EZH2）用于验证 EZH2 对 TGFBR2 的表观遗传学沉默调节。此外我们进行了 PCR、蛋白质印迹和荧光素酶检测,研究miR-93和TGFBR2在PCa细胞系和标本中的关系。我们还检测了缺氧处理对EZH2和miR-93表达的影响,并进一步检测了 miR-93对PCa细胞增殖和上皮间充质转化的影响。结果:缺氧条件下TGFBR2的表达减弱。缺氧可诱导EZH2表达上调,从而促进组蛋白 H3 的第 27 位赖氨酸的三甲基化（Histone H3 Lys27 trimethylation,H3K27me3）,其引起TGFBR2启动子高甲基化并造成其在PCa中表观遗传学沉默。此外,miR-93在PCa组织和细胞系中显着上调,且与TGFBR2的表达呈负相关。miR-93的异常过表达促进PCa细胞增殖、迁移和侵袭,且其表达也可以被缺氧处理所诱导。此外,TGFBR2是miR-93的真正靶标,miR-93可通过下调TGFBR2促进PCa的进展。结论:我们的研究结果阐明了 PCa处于缺氧环境时可通过包括EZH2介导的高甲基化和miR-93诱导的转录后机制,减少TGFBR2的表达水平,从而促进PCa的癌症进展。长链非编码RNA TUG1通过EZH2参与的miR-194-5p表观遗传学沉默介导膀胱癌增殖及化疗药物抵抗目的:牛磺酸上调基因1（TUG1）已被证实参与一些人类癌症的肿瘤发生,但其在膀胱癌中的确切生物学作用及机制仍未阐明。方法:通过实时定量PCR测定基因的mRNA表达水平,利用甲基化特异性PCR测定基因启动子的甲基化水平,利用蛋白质印迹实验检测蛋白表达。通过荧光素酶报告基因系统明确miRNA和靶标基因是否结合,通过MTS实验、集落形成试验观察对细胞增殖的影响,利用流式细胞术明确实验处理对细胞凋亡的影响。结果:在本研究中,我们发现TUG1在膀胱癌中上调,TUG1的表达与CCND2和miR-194-5p分别呈正相关和负相关。MiR-194-5p表达在膀胱癌中常通过启动子高甲基化而降低,而经顺铂和去甲基化药物5-Aza-DC处理后其表达上升。此外,敲减TUG1可下调表观遗传调节因子EZH2的表达,减弱miR-194-5p的启动子高甲基化并诱导其表达。miR-194-5p表达增加或TUG1表达降低使膀胱癌细胞对顺铂敏感,抑制增殖并诱导细胞凋亡。此外,CCND2是miR-194-5p的直接靶标,而miR-194-5p是由TUG1调节的。过表达CCND2可部分恢复TUG1沉默造成对细胞增殖和顺铂耐药的抑制作用。此外,TUG1在膀胱癌中表达水平与临床分期、淋巴转移和患者预后相关。结论:总之,TUG1通过EZH2相关的miR-194-5p沉默调节CCND2,促进膀胱癌细胞生长和化疗耐药。我们的研究有助于阐明其分子机制,为膀胱癌提供新的治疗靶点和生物标志物。
孟旭英[10]（2019）在《TRIB3在高糖介导的膀胱癌细胞增殖、迁移中的作用机制研究》文中研究说明目的:随着社会经济的逐渐发展2型糖尿病发病逐年升高,与此同时全球膀胱癌的发病率和病死率也在增加。2型糖尿病是膀胱癌的独立危险因素,会明显增加膀胱癌的发生率及死亡率。虽然二者许多共同的危险因素,但其内在联系机制至今仍不非常明确,因此找到糖尿病与膀胱癌相关性背后的原因迫在眉睫。基因芯片一种常用技术手段,其可用于检测不同状态下差异基因表达情况。本研究旨在通过检测高糖及低糖条件下膀胱癌细胞差异基因表达情况,筛选目的基因加以验证,并通过进一步的细胞学实验了解其可能的作用机制,了解2型糖尿病易并发肿瘤的分子机制,为2型糖尿病预防膀胱癌的发生和靶向治疗提供实验依据。方法:一、基因芯片研究:膀胱癌T24细胞分别于5.5mmol/L（低糖）和25mmol/L（高糖）葡萄糖浓度下培养,使用Affymetrix人类Clariom D,Hu芯片系统地检测CircRNAs、LncRNA、miRNA和mRNA的表达,筛选差异倍数≥1.5的差异RNA。利用生物信息学靶定与高糖密切相关基因变化,筛选出目标基因。二、人群验证:我们回顾并收集天津医科大学第二医院泌尿外科就诊所有新发的膀胱癌癌患者的医疗资料,将46例膀胱癌患者依据是否合并糖尿病平均分为两组:单纯膀胱癌组及膀胱癌合并糖尿病组;同时我们收集了23例膀胱癌患者在合并糖尿病前后的临床资料。所有患者均进行TRIB3免疫组化染色及TRIB3表达与患者临床病理特征的相关性分析。三、细胞实验:高糖与低糖状态T24、EJ细胞应用克隆形成实验、MTT、transwell检测增殖、迁移水平,应用RT-PCR、WB检测高糖与低糖状态下T24、EJ细胞TRIB3mRNA及蛋白水平,应用MTT、transwell检测转染TRIB3siRNA前后T24、EJ增殖、迁移水平,进一步研究TRIB3通过MAPK/ERK1/2途径参与高糖促进T24细胞的增殖和迁移。结果:一、差异基因中以上调基因为主其中18922个基因表达上调,16776个基因表达下调。差异CircRNAs、Lnc RNA、miRNA、m RNA分别有3203、9355、1571、4792条。差异基因影响的生物学过程主要集中在内质网应激、蛋白质转录、DNA复制等方面;差异基因细胞组成主要集中细胞表面、细胞质、细胞浆、线粒体等部位;差异基因分子功能主要在成纤维细胞生长因子受体结合、蛋白活性、蛋白结合等方面;差异基因信号通路富集于NF-KB、TNF、NOD类受体信号通路等;差异基因改变所致信号通路改变主要集中于感染性疾病、免疫性疾病、肿瘤性疾病。通过筛选初步选定TRIB3作为研究对象。二、膀胱癌合并糖尿病组对比BMI更高P=0.024,合并高血压人数更多P=0.036,血红蛋白低P=0.004,空腹血糖高P<0.01,肿瘤分期高P=0.006,肿瘤分级高P=0.040,高表达TRIB3 P<0.001,且TRIB3与肿瘤分级分期正相关P=0.016;膀胱癌患者合并糖尿病前后TRIB3高表达P=0.032,肿瘤分期、分级更高P<0.01、空腹血糖更高P<0.01。三、高糖对比低糖培养条件下T24、EJ细胞的克隆形成明显增强、增殖明显增强、迁移明显增强,TRIB3在T24和EJ细胞中的mRNA和蛋白水平均明显升高,T24、EJ细胞转染TRIB3siRNA后检测细胞增殖、迁移水平下降,干扰TRIB3前后检测p-ERK1/2、ERK1/2、CCND1、MMP9的表达,p-ERK1/2、ERK1/2存在明显改变,加入MAPK通路抑制剂U0126明显抑制T24细胞TRIB3促进细胞增殖、迁移作用。结论:一、通过基因芯片检测发现,膀胱癌细胞在高糖浓度下对比低糖浓度存在大量差异表达的RNA,这些差异表达的分子可能与高糖促进膀胱癌发展和迁移过程密切相关,为后续进一步筛选与高糖下膀胱癌进展提供了基础,通过筛选初步选定TRIB3作为研究对象。二、膀胱癌合并糖尿病组对比单纯膀胱癌组BMI更高、合并高血压比例更高、血红蛋白较低、空腹血糖更高、具有更高的肿瘤分级及分期、TRIB3表达量升高;膀胱癌合并糖尿病后较合并糖尿病前肿瘤组织标本高表达TRIB3,肿瘤分期、分级更高、空腹血糖更高。三、高糖通过过表达TRIB3能促进膀胱癌细胞的迁移和增殖,TRIB3通过激活MAPK通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移。
二、HIF-1α表达与膀胱癌分级与复发相关性研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、HIF-1α表达与膀胱癌分级与复发相关性研究（论文提纲范文）
（1）Hsp60表达下调通过促进TGFBI分泌增强膀胱癌细胞侵袭转移（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 免疫组化检测膀胱癌组织Hsp60的表达 |
| 1.3 qPCR检测Hsp60稳定干涉膀胱癌细胞Hsp60的干涉效果 |
| 1.4 Western-blot检测Hsp60、TGFBI及HIF-1α等的表达 |
| 1.5 Hsp60稳定干涉细胞系的建立 |
| 1.6 siRNA干涉膀胱癌细胞TGFBI或者HIF1α的表达 |
| 1.7 ELISA检测细胞培养上清TGFBI的浓度 |
| 1.8 Transwell实验检测干涉Hsp60表达后膀胱癌细胞侵袭转移能力的改变 |
| 1.9 划痕实验检测干涉Hsp60表达后膀胱癌细胞迁移能力的改变 |
| 1.1 0 MitoSOX检测线粒体活性氧的变化 |
| 1.1 1 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 膀胱癌组织Hsp60表达降低与膀胱癌的分化及临床密切相关 |
| 2.2 干涉Hsp60表达膀胱癌细胞的侵袭迁移能力显着增强 |
| 2.3 干涉膀胱癌细胞Hsp60表达促进TGFBI的表达 |
| 2.4 膀胱癌细胞中Hsp60表达降低通过促进TGFBI促进膀胱癌细胞转移 |
| 2.5 干涉Hsp60表达降低通过ROS/HIF1a通路促进TGFBI的表达 |
| 3 讨论 |
（2）DJ-1在前列腺癌组织中的表达及对LNCap细胞增殖和侵袭能力的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 第一部分 :DJ-1在前列腺癌中的表达研究 |
| 前言 |
| 一、资料和方法 |
| 1.材料和试剂 |
| 2.方法 |
| 3.统计学方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :沉默DJ-1 对前列腺癌LNCap细胞增殖和侵袭能力的影响研究 |
| 前言 |
| 一、资料和方法 |
| 1.材料和试剂 |
| 2.方法 |
| 3.统计学方法: |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 第三部分 :DJ-1在肿瘤中表达及作用机制研究进展 |
| 1.DJ-1在肿瘤中的表达 |
| 2.DJ-1在肿瘤的发生、发展中可能的分子机制 |
| 3.展望和结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及获得的科研成果 |
（3）长链非编码RNA FAL1在结直肠癌中的作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 综述 |
| 1.1 LncRNAS的调节作用 |
| 1.2 CRC中异常表达的LncRNAS及其作用 |
| 1.3 CRC中LncRNAS相关信号通路 |
| 1.4 LncRNAS对CRC的临床意义 |
| 第2章 LncRNA FAL1在结直肠癌中的表达情况 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法及步骤 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 LncRNA FAL1在结直肠癌组织及细胞系中的表达 |
| 2.2.2 LncRNA FAL1的表达量与临床病例资料分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 LncRNA FAL1在结直肠癌细胞中的功能研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法与步骤 |
| 3.1.3 统计学处理 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 pcDNA3-lncRNA FAL1和pSilencer2.1- lncRNA FAL1可显着上调和下调细胞中lncRNA FAL1的表达水平 |
| 3.2.2 LncRNA FAL1可促进结直肠癌细胞的增殖活性 |
| 3.2.3 LncRNA FAL1可促进结直肠癌细胞侵袭和迁移能力 |
| 3.2.4 LncRNA FAL1促进结直肠癌细胞EMT现象 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 LncRNA FAL1调控miR-637/NUPR1对结直肠癌的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 统计学处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 LncRNA FAL1的靶向miRNA筛选与验证 |
| 4.2.2 miR-637 在结直肠癌组织中低表达 |
| 4.2.3 miR-637 mimics和inhibitor-miR-637 可显着上调和下调细胞中miR-637 的表达水平 |
| 4.2.4 miR-637 可抑制结直肠癌细胞增殖能力 |
| 4.2.5 miR-637 可抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力 |
| 4.2.6 miR-637 抑制结直肠癌细胞EMT现象 |
| 4.2.7 miR-637 靶基因筛选 |
| 4.2.8 双荧光素酶实验证实miR-637 和NUPR1的直接靶向关系 |
| 4.2.9 RT-q PCR验证miR-637 和NUPR1的靶向关系 |
| 4.2.10 NUPR1在结直肠癌组织中高表达 |
| 4.2.11 pc DNA3-NUPR1和psh-NUPR1转染效率验证 |
| 4.2.12 NUPR1可促进结直肠癌细胞增殖能力 |
| 4.2.13 NUPR1可促进结直肠癌细胞侵袭和迁移能力 |
| 4.2.14 NUPR1促进结直肠癌细胞EMT现象 |
| 4.2.15 NUPR1在结直肠癌中发挥原癌基因效应的机制 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间科研成果 |
| 致谢 |
（4）CNF1通过活化RhoC促进膀胱癌血管生成（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 目的和方法 |
| 一、CNF1促进膀胱癌细胞和内皮细胞体外的迁移和侵袭 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 CNF1促进膀胱癌细胞体外迁移和侵袭 |
| 1.2.2 CNF1促进膀胱癌细胞分泌的基质金属蛋白酶活性 |
| 1.2.3 CNF1 促进HUVEC体外迁移和侵袭 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、CNF1 诱导膀胱癌细胞分泌VEGF促进HUVEC血管生成 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 缺氧条件下CNF1 促进膀胱癌细胞分泌VEGF |
| 2.2.2 CNF1 诱导膀胱癌细胞分泌VEGF进而促进血管生成 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、HIF1α参与CNF1 诱导膀胱癌细胞分泌VEGF |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 缺氧条件下CNF1 促进HIF1α的积累 |
| 3.2.2 CNF1 通过调控HIF1α促进膀胱癌细胞分泌VEGF |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、CNF1 通过激活RhoC调控HIF1α的稳定和VEGF的分泌 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 CNF1 通过RhoC上调膀胱癌细胞HIF1α |
| 4.2.2 CNF1 可以激活膀胱癌细胞中RhoC |
| 4.2.3 活化型RhoC促进膀胱癌细胞表达HIF1α |
| 4.2.4 活化型RhoC促进膀胱癌细胞分泌VEGF |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 五、CNF1 活化RhoC并通过HSF1-HSP90α调控HIF1α的稳定 |
| 5.1 对象和方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 活化型RhoC促进膀胱癌细胞表达HSP90α |
| 5.2.2 CNF1 促进膀胱癌细胞表达HSP90α |
| 5.2.3 活化型RhoC促进HSP90α和HIF1α相互作用 |
| 5.2.4 HSF1 参与调控HSP90α和HIF1α的表达 |
| 5.2.5 HSF1 参与CNF1 促进膀胱癌细胞分泌VEGF |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 六、活化的RhoC促进体内膀胱癌肿瘤相关的血管生成 |
| 6.1 对象和方法 |
| 6.1.1 所需材料 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 活化型RhoC促进膀胱癌发展 |
| 6.2.2 活化型RhoC促进膀胱癌组织中HSP90α、HIF1α和VEGF的表达 |
| 6.2.3 活化型RhoC促进血管生成 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 七、HSP90α 、HIF1α和 VEGF与人类膀胱癌的进展相关 |
| 7.1 对象和方法 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 实验方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 HSP90α 、HIF1α和 VEGF高表达与膀胱癌的进展相关 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 血管生成在肿瘤发展中的研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）HIF-1α、E-cadherin和N-cadherin在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 对象和方法 |
| 1 研究对象 |
| 2 试剂和仪器 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 主要溶液配制方法 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 组织切片制备 |
| 3.2 苏木素-伊红(HE)染色 |
| 3.3 免疫组织化学SP染色法 |
| 3.4 免疫组织化学对照试验 |
| 3.5 结果判定 |
| 4 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 HIF-1α的表达与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型、组织学分级及FIGO分期的关联 |
| 1.1 HIF-1α与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型的关联 |
| 1.2 HIF-1α与卵巢癌组织学分级的关联 |
| 1.3 HIF-1α与卵巢癌FIGO分期的关联 |
| 2 E-cadherin的表达与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型、组织学分级及FIGO分期的关联 |
| 2.1 E-cadherin与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型的关联 |
| 2.2 E-cadherin与卵巢癌组织学分级的关联 |
| 2.3 E-cadherin与卵巢癌FIGO分期的关联 |
| 3 N-cadherin的表达与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型、组织学分级及FIGO分期的关联 |
| 3.1 N-cadherin与卵巢上皮性肿瘤的肿瘤分型的关联 |
| 3.2 N-cadherin与卵巢癌组织学分级的关联 |
| 3.3 N-cadherin与卵巢癌FIGO分期的关联 |
| 4 HIF-1α与 E-cadherin、N-cadherin的相关性 |
| 4.1 HIF-1α与E-cadherin的相关性 |
| 4.2 HIF-1α与N-cad的相关性 |
| 讨论 |
| 1 HIF-1α在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义 |
| 2 E-cadherin在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义 |
| 3 N-cadherin在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义 |
| 4 HIF-1α、E-cadherin和 N-cadherin的相关性分析 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 上皮间质转化的分子机制与其在肿瘤中的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）DNA损伤修复基因APE1抑制尿路上皮癌免疫微环境的研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 APE1表达与膀胱癌免疫微环境基因相关性分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 APE1对膀胱癌细胞系基因表达的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 上尿路尿路上皮癌中BER、STING通路蛋白与TILs的相关性及其预后意义 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 膀胱癌APE1与VEGFA、CD163+巨噬细胞浸润的相关性及其预后意义 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 抑制APE1促进PD-1抗体抑制小鼠膀胱癌生长及其机制的实验研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 DNA损伤与修复与肿瘤分子靶向和免疫治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 浸润性尿路上皮癌新辅助治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
（7）MCT1对膀胱癌侵袭作用及糖代谢的调节（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1、实验材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 实验试剂 |
| 2、实验方法 |
| 2.1 患者与组织样本 |
| 2.2 免疫组化 |
| 2.3 细胞培养 |
| 2.4 RNA提取与实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR) |
| 2.5 siRNA转染 |
| 2.6 建立稳定的转染细胞系 |
| 2.7 体外细胞增殖、迁移和侵袭试验 |
| 2.8 裸鼠移植模型建立 |
| 2.9 乳酸的测定 |
| 2.10 蛋白质印迹分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 结果 |
| 3.1 MCT1的表达与膀胱癌的预后有关 |
| 3.2 MCT1对膀胱癌细胞增殖活性的影响 |
| 3.3 MCT1基因对体外膀胱癌细胞迁移和侵袭作用的影响 |
| 3.4 MCT1对体外膀胱癌细胞有氧糖酵解过程的影响 |
| 3.5 MCT1的表达与HIF-1α之间的相关性 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 1、MCT1的结构及其基本功能 |
| 2、MCT1在多种肿瘤中的作用 |
| 3、MCT1在膀胱癌诊治中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录或缩略词表 |
| 致谢 |
（8）低氧诱导因子1α表达与膀胱尿路上皮癌预后不良有关（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 研究对象与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 组织材料 |
| 1.3 主要试剂及实验仪器 |
| 1.4 免疫组织化学法染色步骤 |
| 1.5 研究方法 |
| 结果 |
| 2.1 低氧诱导因子-1α与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系 |
| 2.2 HIF1-α表达与患者总生存期的关系 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤组织中低氧诱导因子-1对T细胞分化和功能的影响 |
| 1 低氧诱导因子1诱导T细胞代谢重塑 |
| 2 低氧诱导因子-1与CD4+T淋巴细胞 |
| 3 低氧诱导因子-1与细胞毒T细胞 |
| 4 低氧诱导因子-1与辅助T细胞 |
| 5 低氧诱导因子-1与调节T细胞 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表（附录） |
| 致谢 |
（9）EZH2相关通路参与前列腺癌及膀胱癌进展及其机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词一览表 |
| 第一部分:EZH2及mi R-93 介导缺氧诱导的TGFBR2 表达沉默和前列腺癌进展 |
| 1.1 中文摘要 |
| 1.2 英文摘要 |
| 1.3 绪言 |
| 1.4 材料与方法 |
| 1.5 实验结果 |
| 1.6 实验讨论 |
| 1.7 实验结论 |
| 1.8 参考文献 |
| 第二部分 :长链非编码RNATUG1 通过EZH2 参与的mi R-194-5p表观遗传学沉默介导膀胱癌增殖及化疗药物抵抗 |
| 2.1 中文摘要 |
| 2.2 英文摘要 |
| 2.3 绪言 |
| 2.4 材料与方法 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.6 实验讨论 |
| 2.7 实验结论 |
| 2.8 参考文献 |
| 第三部分:附录 |
| 3.1 综述:EZH2 在泌尿系统肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文目录 |
（10）TRIB3在高糖介导的膀胱癌细胞增殖、迁移中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、不同糖浓度状态下膀胱癌细胞基因芯片筛查差异表达 |
| 1.1 对象和材料 |
| 1.1.1 芯片简介 |
| 1.1.2 研究对象 |
| 1.1.3 主要仪器及耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 主要试剂的配制 |
| 1.2.2 细胞的复苏 |
| 1.2.3 细胞的传代与培养 |
| 1.2.4 细胞冻存 |
| 1.2.5 T24、EJ细胞的分组干预 |
| 1.2.6 LG和 HG组 T24、EJ细胞总RNA的提取 |
| 1.2.7 总RNA的纯化 |
| 1.2.8 实验样品要求 |
| 1.2.9 目的基因的逆转录 |
| 1.2.10 去除基因组DNA反应 |
| 1.2.11 逆转录反应体系 |
| 1.2.12 定量即时聚合酶链锁反应 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 实验样品质检结果 |
| 1.3.2 T24 细胞HG组与LG组相比总体差异基因表达情况 |
| 1.3.3 T24 细胞HG组与LG组相比差异CircRNAs、Lnc RNA、miRNA、m RNA表达情况 |
| 1.3.4 T24 细胞HG组与LG组相比差异基因生物学过程分析 |
| 1.3.5 T24 细胞HG组与LG组相比差异因细胞位置分布分析 |
| 1.3.6 T24 细胞HG组与LG组相比差异基因分子功能分析 |
| 1.3.7 T24 细胞HG组与LG组相比差异基因信号通路富集分析 |
| 1.3.8 T24 细胞HG组与LG组相比差异基因相关疾病分析 |
| 1.3.9 高糖与低糖状态下差异mRNA的初步筛选 |
| 1.3.10 高糖与低糖状态下差异mRNA在 GEPIA数据库进行筛选 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 二、单纯膀胱癌及膀胱癌合并糖尿病患者的临床病理特征 |
| 2.1 研究材料与方法 |
| 2.1.1 免疫组化常用试剂 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.2 实验方法(一) |
| 2.2.1 载玻片处理 |
| 2.2.2 石蜡切片处理 |
| 2.2.3 TRIB3 免疫组化染色 |
| 2.2.4 结果判定 |
| 2.2.5 统计学方法 |
| 2.3 结果(一) |
| 2.3.1 患者临床病理特征 |
| 2.3.2 TRIB3 表达与患者临床病理特征的相关性 |
| 2.4 研究对象(二) |
| 2.5 收集录入资料(二) |
| 2.6 实验方法(二) |
| 2.7 结果(二) |
| 2.8 讨论 |
| 2.9 小结 |
| 三、TRIB3 对膀胱癌细胞增殖、迁移影响机制的研究 |
| 3.1 对象与方法 |
| 3.1.1 细胞系 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及耗材 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养、传代、冻存与复苏 |
| 3.2.2 细胞总RNA的提取 |
| 3.2.3 总RNA的定量和纯度分析 |
| 3.2.4 目的基因的逆转录 |
| 3.2.5 定量即时聚合酶链锁反应 |
| 3.2.6 将含TRIB3siRNA转染T24、EJ细胞 |
| 3.2.7 Western Blot检测蛋白含量 |
| 3.2.8 细胞克隆形成实验 |
| 3.2.9 构建低表达TRIB3的T24、EJ细胞 |
| 3.2.10 MTT法检测TRIB3对T24、EJ细胞增殖作用的效应 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 高糖对膀胱癌细胞系T24、EJ细胞克隆形成水平的影响 |
| 3.3.2 高糖对T24、EJ细胞增殖水平的影响 |
| 3.3.3 高糖对T24、EJ细胞迁移水平的影响 |
| 3.3.4 高糖对T24、EJTRIB3mRNA及蛋白表达的影响 |
| 3.3.5 高糖状态下T24、EJ转染TRIB3siRNA后 TRIB3mRNA及蛋白水平 |
| 3.3.6 高糖状态下T24、EJ敲减TRIB3 细胞迁移的变化 |
| 3.3.7 高糖状态下T24、EJ转染TRIB3siRNA细胞增殖水平 |
| 3.3.8 TRIB3对p-ERK_(1/2)、ERK_(1/2)、CCND1、MMP9 的影响 |
| 3.3.9 T24 转染TRIB3siRNA及 MAPK通路抑制剂U0126后p-ERK_(1/2)、ERK_(1/2)的表达 |
| 3.3.10 T24 转染TRIB3siRNA及 MAPK通路抑制剂U0126 后迁移变化 |
| 3.3.11 T24 转染TRIB3siRNA及 MAPK通路抑制剂U0126 后增殖变化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 糖尿病高糖状态诱导膀胱癌细胞TRIB3 高表达促进膀胱癌进展的机制研究 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、HIF-1α表达与膀胱癌分级与复发相关性研究（论文参考文献）
- [1]Hsp60表达下调通过促进TGFBI分泌增强膀胱癌细胞侵袭转移[J]. 陈彦斌,张波,夏先鹍,袁建林,杨帆. 现代泌尿外科杂志, 2021(12)
- [2]DJ-1在前列腺癌组织中的表达及对LNCap细胞增殖和侵袭能力的影响[D]. 韦高猛. 右江民族医学院, 2020(03)
- [3]长链非编码RNA FAL1在结直肠癌中的作用及机制的研究[D]. 王丽强. 吉林大学, 2020(08)
- [4]CNF1通过活化RhoC促进膀胱癌血管生成[D]. 王景雨. 天津医科大学, 2020(06)
- [5]HIF-1α、E-cadherin和N-cadherin在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义[D]. 宋剑婵. 天津医科大学, 2020(06)
- [6]DNA损伤修复基因APE1抑制尿路上皮癌免疫微环境的研究[D]. 王林昂. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [7]MCT1对膀胱癌侵袭作用及糖代谢的调节[D]. 张永建. 青岛大学, 2019(02)
- [8]低氧诱导因子1α表达与膀胱尿路上皮癌预后不良有关[D]. 崔嘉晗. 青岛大学, 2019(03)
- [9]EZH2相关通路参与前列腺癌及膀胱癌进展及其机制研究[D]. 周辉. 华中科技大学, 2019(04)
- [10]TRIB3在高糖介导的膀胱癌细胞增殖、迁移中的作用机制研究[D]. 孟旭英. 天津医科大学, 2019(02)