一、脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响（论文文献综述）
张丹丹[1]（2020）在《通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究》文中研究说明脑梗死又称缺血性脑卒中,是指因脑部供血障碍,缺血、缺氧所导致的局限性脑组织缺血性坏死或软化,属中医“中风病”范畴。通络化痰胶囊（Tongluo Huatan Capsule,THC）有活血通络、化痰熄风的功效,用于治疗中风病中经络痰瘀阻络证。团队课题组前期已完成该药Ⅳ期临床试验资料采集,但未对数据进行总结,现基于前期收集的临床数据进行系统性总结及分析,进一步评价通THC治疗中风恢复期的疗效和安全性。同时,基于中医“异病同治”思想,痰瘀阻络证也是缺血性卒中后引发血管性痴呆（Vescular Dementia,VD）常见证型,由此提出假设:THC对VD是否也会有效?据最新研究显示,上调网格蛋白（clathrin）及其内吞标记物Rab5B能够促进神经元表面N-甲基D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）的内吞,减少神经元膜表面的NMDAR分布,从而减轻兴奋性氨基酸毒性造成的神经元损伤,改善VD大鼠学习记忆能力,但是clathrin和NMDA受体在这一过程中各个时点的变化还未明确。故本研究拟针对VD大鼠模型,早期给药干预后造模,取海马组织,按照造模后3h/1d/3d/7d/14d不同时点,采用动物行为学及Western blotting（WB）、RT-PCR检测clathrin及其内吞标记物Rab5B、NMDAR1（NMDAR功能亚单位）的表达,探索脑缺血再灌注海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点,同时探讨THC在VD早期干预中可能存在的作用,从而从微观表征层面证明中药异病同治的疗效。临床研究目的:进一步评价THC治疗中风病中经络恢复期痰瘀阻络证患者的疗效和安全性,为临床用药提供参考。方法:采用多中心、前瞻性、单臂队列临床研究,纳入34家二级甲等以上医院中符合西医脑梗死恢复期及中医中风病中经络痰瘀阻络证诊断标准的病例,予THC治疗4周。运用统计学方法对课题组前期采集的临床试验数据进行分析。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评定神经功能缺损,中医证候评分及改良Rankin量表（Modified Rankin Scale,mRS）为疗效评价指标;以血常规、肝功能、肾功能为安全性评价指标。结果:（1）2012年01月-2016年12月于34家二级甲等以上的医院纳入的受试者共2169例,THC治疗后神经功能缺损综合疗效、中医证候疗效总有效率分别为84.09%、81.01%;mRS总分减少50%及以上者817例（37.67%）,总分下降至0-1者1187例（54.73%）;（2）影响NIHSS综合疗效的多因素分析显示年龄（OR=1.024,95%CI 1.009-1.039,P=0.002）、基线合并高血压（OR=4.720,95%CI 3.513-6.341,PP=0.000）、冠心病（OR=2.601,95%CI 1.530-4.421,P=0.000）、高脂血症（OR=2.234,95%CI1.234-4.407,P=0.008）、基线 NIHSS 评分（OR=0.902,95%CI 0.849-0.957,P=0.001）影响临床神经功能缺损程度综合疗效。（3）影响中医证候疗效的多因素分析显示基线中医证候评分对中医证候疗效有影响（OR=62.023,95%CI 37.407-113.026,P=0.000）;（4）影响mRS改善的多因素分析显示年龄（OR=1.019,95%CI 1.007-1.031,P=0.001）、基线合并高血压（OR=2.898,95%CI 2.144-3.917,P=0.000）冠心病（OR=3.625,95%CI 1.516-8.673,P=0.004）对 mRS 的改善有影响;（5）THC不良反应总体发生率为0.00%。结论:（1）THC在中风恢复期的治疗中单用或联用其他西医基础治疗对于改善患者神经功能缺损程度、减轻残障及中医症状均有较好的疗效及安全性。（2）THC在中风恢复期的治疗中,年龄小、基线病情轻、没有基础疾病的患者疗效越好。实验研究目的:（1）探索VD大鼠海马区神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点;（2）探索THC在VD早期干预中可能存在的作用。方法:大鼠适应性饲养7天后随机分为假手术组、模型组、THC组、美金刚组（MH组）、参知健脑方组（SZJN组）,分别予相应药物灌胃,假手术组、模型组予等量的蒸馏水灌胃,1次/日,连续7日。采用2VO+腹腔注射硝普纳的方法制备VD大鼠模型,假手术组大鼠分离双侧颈总动脉但不夹闭血管,不注射硝普钠。造模后进行跳台实验、新物体识别实验、Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;造模后3h、1d、3d、7d、14d分别取大鼠海马组织通过RT-PCR、WB检测海马clathrin、NMDAR1、Rab5B在造模后不同时间点的表达水平。结果:（1）行为学①跳台试验（模型评价）结果显示:假手术组大鼠与正常组大鼠相比潜伏期以及错误次数无统计学差异;VD大鼠与正常组、假手术组相比,潜伏期缩短,错误次数增加（P<0.05）;②新物识别实验,模型组与假手术组比较,新物辨别指数下降（P<0.01）;THC组、SZJN组、MH组辨别指数均比模型组高（P<0.01）;③水迷宫:各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度缩短（P<0.01）。不同分组对逃避潜伏期的影响有差异（P<0.05）,模型组与其他四组大鼠相比逃避潜伏期延长;撤去平台后,模型组与其他四组大鼠相比在目标限停留时间缩短（P<0.01）。和模型组相比,假手术组、SZJN组穿越平台次数增加（P<0.01）。（2）病理学HE染色显示,假手术组海马CA1区结构形态未见异常,神经元形态完整,排列整齐,胞核与胞质界限清晰可见无坏死。VD大鼠海马CA1区神经元形态不完整,排列紊乱,间隙增大,胞质稀少,神经元胞核深染,固缩呈三角形或不规则形,核仁不明显。造模后随着时间延长,VD大鼠海马CA1区神经元形态排列紊乱程度加重,间隙增加明显。与模型组比较,THC组、SZJN组大鼠海马CA1区整体组织损伤情况均有明显改善,神经元排列较为整齐,细胞形态结构较完整,胞质较均匀,胞核与胞质界限较清晰,少数细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显。MH组大鼠海马CA1区细胞层次减少,神经元排列稀松,形态较模型组有明显改善,部分细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形。尼氏染色显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐紧凑,染色后呈现为颗粒或状块状,染色浓密且规则。VD大鼠海马CA1区神经元排列散乱,造模后随着时间延长,细胞带出现了断裂,细胞凋亡数量增加,大量神经细胞出现尼氏体碎裂。THC组、SZJN组海马CA1区神经细胞排列较为整齐,少数细胞间隙增宽,细胞带稍有变薄,少量的神经细胞可见到有尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。MH组海马CA1区神经元细胞形态和排列较模型组有所改善,部分神经元细胞凋亡,细胞带变薄。RT-PCR结果①与假手术组相比,造模后3h、1d、3d、7d、14dVD大鼠clathrin mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,MHG组（P<0.01）、THC组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马clathrin mRNA相对表达量增加;②与假手术组相比,术后3h、7d、14d模型组大鼠NMDAR1 mRNA表达增加（P<0.01）,术后1d NMDAR1 mRNA表达下降（P<0.01）;与模型组相比,术后3h SZJN组NMDAR1 mRNA 表达降低（P<0.01）,术后 7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）NMDAR1 mRNA 表达降低;③与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d VD大鼠Rab5B mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,术后 3h、1d、3d、7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马Rab5B mRNA相对表达量增加。（3）WB结果①与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d模型组大鼠clathrin蛋白表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,THC组大鼠在术后3h（P<0.01）、1d（P<0.05）clathrin 蛋白表达升高,SZJN 组在术后 3h（P<0.01）、1d（P<0.05）、7d（P<0.05）、14d（P<0.05）clathrin蛋白表达升高,MH组在术后3h（P<0.01）clathrin蛋白表达增加。②与假手术组相比,术后3h（P<0.01）、7d（P<0.01）、14d（P<0.01）模型组大鼠的膜蛋白NMDAR1表达增加,术后1d表达减少（P<0.01）;与模型组相比,THC组大鼠术后3h（P<0.05）、7d（P<0.01）NMDAR1表达减少,1d时表达增多（P<0.01）,SZJN组、MH组大鼠术后3h、7d NMDAR1表达减少（P<0.01）。结论:（1）THC早期干预可减轻VD大鼠海马CA1区的病理损伤,提高学习及记忆能力,具有脑保护作用;（2）VD大鼠在脑缺血再灌注损伤后,海马神经元NMDAR1表达的动态演变在造模后先升后降再上升。clathrin及Rab5B表达降低导致神经元表面NMDAR内吞减少加重了兴奋性氨基酸毒性,导致学习记忆能力降低。（3）THC早期干预VD大鼠,可通过上调clathrin表达使神经元表面的NMDAR内吞增加,或下调NMDAR表达来减少兴奋性毒性作用对神经元的损伤,从而起到脑保护作用。
李凤萍[2]（2020）在《钩藤碱对氧糖剥夺星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达的影响》文中研究表明目的观察在氧糖剥夺/复氧（1h/24h）条件下,大鼠海马区星形胶质细胞（As）高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和细胞周期依赖蛋白激酶5（CDK5）mRNA的表达变化,并观察钩藤碱对氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5mRNA表达的影响。方法取刚出生（1-3d内）SD大鼠海马区组织进行星形胶质细胞原代培养,经细胞换液、细胞传代培养去除其它细胞后取第3代细胞进行细胞爬片,行星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光鉴定,星形胶质细胞阳性率达90%-95%以上时细胞可用于后续实验。将实验分为四组:空白对照组、缺血缺氧组、钩藤碱低剂量组(0.02mg.ml-1)、钩藤碱高剂量组(0.2mg.ml-1)。将细胞培养瓶置于厌氧罐内建立体外细胞缺血缺氧模型,收集各组细胞提取各组总RNA,进行实时荧光定量PCR检测各组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达。结果1、星形胶质细胞原代培养6-7天细胞已基本铺满细胞培养瓶瓶底,主要为星形胶质细胞,形态不规则。传代培养的星形胶质细胞,可见其形态不规则,大多为多角形,细胞体积增大,胞浆丰富,细胞核偏于胞体一侧,呈圆形或卵圆形,折光性较低,部分细胞的突起变得细长,6-7天后细胞基本铺满瓶底;氧糖剥夺1小时后,细胞失去原来的形态,变为长梭形,胞体水肿,胞核内可见细颗粒样物质,突起变得更为细长,各细胞间相互交织成网状。荧光显微镜下观察到GFAP阳性细胞形态不规则,呈扁平状,细胞边缘清晰,有部分粗大突起,大多数细胞显示绿色荧光,星形胶质细胞的阳性率大约为90%-95%。2、缺血缺氧组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达较空白对照组明显升高（p<0.05）;3、钩藤碱低剂量组及高剂量组较缺血缺氧组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达明显下调（p<0.05）,钩藤碱高剂量组与低剂量组表达差异并不是很明显（p>0.05）。结论1、海马组织通过胰酶消化法原代培养、换液、传代培养去除其它细胞后可获得较高纯度的星形胶质细胞。2、氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达上调;钩藤碱干预可下调氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达,提示钩藤碱可能对缺氧缺氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5的表达具有抑制作用。
杨光[3]（2020）在《电针对4月龄APP/PS1转基因鼠海马突触可塑性相关蛋白的影响》文中研究表明随着全球社会老龄化的不断发展,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）越来越受到人们的重视。国际AD协会（Alzheimer’s Disease International）发布的《2016年全球阿尔茨海默症报告》显示,2016年全球患老年痴呆病的人数高达4700万人,到2050年或将增加近两倍,达到1.32亿人。有研究者认为突触功能障碍是造成AD认知功能损害的始动因素。除了突触丢失,突触功能紊乱以及突触可塑性受损也是AD进程中认知功能下降的主要特征。突触可塑性分为突触结构可塑性和突触功能可塑性,其功能可塑性发挥作用主要依靠相关谷氨酸受体的活性及其信号通路的激活,突触可塑性相关蛋白主要作用于NMDA受体和AMPA受体通路部分。因此突触可塑性在认知功能以及AD发展过程中起着重要的作用。临床研究显示,中医针灸治疗痴呆效果较好,患者的日常生活和认知能力均得到一定程度的改善。动物实验也发现针刺可以改善痴呆动物模型的突触传递效能、突触超微结构和学习记忆能力。本实验期望从突触可塑性角度进一步探讨电针改善AD认知功能的作用机制。实验目的以APP/PS1双转基因小鼠为动物模型,观察电针干预对突触可塑性相关蛋白PSD-95、SYN和GluN2B表达水平的影响。从突触可塑性相关蛋白表达的角度探讨电针在AD病理前期改善其认知功能的机制。实验方法将12只4月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为电针组和模型组;以同月龄同性别的C57BL/6小鼠为正常组。将小鼠以自制鼠袋固定于操作台上,取“百会”、“涌泉”穴,刺入2～3mm,双侧“涌泉穴”接电针仪,采用疏密波,频率为1/50Hz,以针柄震颤为宜。每次针刺持续15min,一周三次,每周二、四、六进行干预,共干预6周。模型组和正常组采用相同方式束缚,每次15mim,一周三次,每周二、四、六,共6周。6周后进行取材,灌注后取脑。用免疫组化法观察PSD-95和SYN的表达情况;免疫荧光法观察Aβ的表达情况;Western Blot法检测小鼠海马内PSD-95、SYN和GluN2B的表达水平。实验结果免疫组化结果:PSD-95阳性表达呈棕黄色,主要分布在胞质、胞膜及突起上。正常组阳性表达着色较深,突起有较多的表达。模型组的阳性表达明显较少,着色浅,在突起上很少有分布。与模型组相比,电针组的阳性表达更多更为密集且着色更深。SYN的阳性表达呈棕黄色,主要分布在神经元外,而神经元胞体、轴突及树突不被标记,并且各组间阳性表达差异不明显。但模型组的阳性表达颜色比正常组阳性表达的颜色浅,电针组阳性表达的颜色较模型组更深。与模型组相比,正常组的突起结构完整,分布连续规则,而模型组突起形态结构不完整,电针组的突起较模型组来说,形态结构更为完整,分布更规则连续。免疫荧光结果:免疫荧光结果显示5月龄的APP/PS1双转基因小鼠海马内已经出现Aβ的表达,但未见成团的老年斑。正常组小鼠脑内未见Aβ的表达。并且正常组海马神经细胞排列整齐,细胞核清晰,主要呈圆形或椭圆形,且数量较多;而模型组海马神经元细胞排列散乱,细胞核不清晰;与模型组比较,电针组神经细胞排列更为规则整齐,细胞核也更为清晰。Western Blot结果:与正常组比较,模型组海马PSD-95表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,电针组PSD-95表达水平增高,差异有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较,模型组海马SYN表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,电针组SYN表达水平增高,差异有统计学意义（P<0.01）。与正常组比较,模型组海马GluN2B表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,电针组GluN2B表达水平增高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论电针可以升高病理前期APP/PS1双转基因小鼠海马内突触可塑性相关蛋白PSD-95、GluN2B和SYN水平,改善突触可塑性可能是电针改善AD认知功能的机制之一。
吴东南[4]（2020）在《基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制》文中研究指明目的:本课题理论研究部分通过总结中医对失眠、学习记忆障碍与酸枣仁汤的认识,旨在为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆障碍提供理论依据;实验研究部分通过构建慢性睡眠剥夺大鼠模型,并予酸枣仁汤干预,观察干预前后大鼠学习记忆功能、突触可塑性、NLRP3炎性小体等的变化,旨在明确酸枣仁汤介导突触可塑性与神经炎症改善大鼠学习记忆的作用机制。方法:1.理论部分:基于中医古籍与近年来的文献资料,总结中医对失眠病症、学习记忆障碍病名、病因、病机的认识,对失眠与学习记忆障碍之间的关联进行阐述,并结合酸枣仁汤的组方分析和临床实验研究,为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆障碍提供理论依据。2.实验部分:将60只SD雄性大鼠随机分为5组,即正常对照组（Normal control Group,NG）、模型组（Model Group,MOD）、艾司唑仑组（ESTazolam Group,EST）、酸枣仁汤低剂量组（Suanzaoren Decoction Low-dose Group,SZRDL）和酸枣仁汤高剂量组（Suanzaoren Decoction High-dose Group,SZRDH）,每组12只。NG组常规饲养,不造模,其他4组通过多平台水环境法建立慢性睡眠剥夺模型。除NG组外,其他4组每天连续睡眠剥夺12h,持续剥夺30d。造模和给药同时进行,NG组和MOD组按照10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃纯水,EST组按照0.54mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃艾司唑仑药液,SZRDL组按照4.59g·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃酸枣仁汤药液,SZRDH组按照18.36mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃酸枣仁汤药液。观察造模及给药期间各组大鼠的精神、饮食、摄水及体重等一般情况。灌胃结束之后进行以下的实验:通过Morris水迷宫实验与跳台实验评价各组大鼠的学习记忆能力;采用自主活动箱观察各组大鼠的自主活动的能力;采用尼氏染色法和高尔基染色法观察各组大鼠海马CA3区神经元突触的病理形态变化;通过免疫荧光和免疫组化观察突触可塑性关键蛋白PSD95、SYP及突触信号传递的关键蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表达水平;采用ELISA检测血清和海马中IL-1β和TNF-α的表达水平;采用Real time-PCR检测海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;采用Real time-PCR、免疫组化和western bolt检测NLRP3炎症小体通路中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18关键因子的蛋白和mRNA表达水平。结果:1.理论研究结果失眠属于中医“不寐”病症范畴,失眠的中医病因复杂繁多,以情志异常、饮食不节、外淫邪气等多见,这些病因引起阴阳失调、脏腑功能失调、气血亏虚进而导致失眠病症。学习记忆障碍属于中医“健忘”范畴,失眠与学习记忆障碍关系密切,一方面,阴血亏虚,神失所养是两者重要的共同病机;另一方面,失眠可引起学习记忆损害。因此,养血安神法是防治失眠与学习记忆损害重要的治法。酸枣仁汤作为养血安神法的代表方剂,近年来研究显示酸枣仁汤不仅能改善睡眠,减轻焦虑抑郁,还能改善学习记忆,为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆损害提供理论依据。2.实验一结果2.1各组大鼠一般情况:睡眠剥夺及给药期间,NG组大鼠一般情况良好,毛发致密有光泽,尾巴、爪子颜色色红有光泽,精神良好,反应灵敏,摄食、饮水和二便无明显异常。与NG组比较,MOD组大鼠在睡眠剥夺前3天,摄食稍有增加,烦躁易激怒,但此后出现摄食和饮水明显减少,毛发无光泽易脱落,尾巴、爪子色泽偏淡无光泽,精神萎靡,神情呆滞,反应迟钝,时有落水现象。与MOD组比较,SZRDL组和SZRTH组大鼠摄食和饮水明显增加,毛发脱落较少,精神较振奋,警觉力增加。但EST组大鼠表现有精神萎靡、反映迟钝、嗜睡等趋向。2.2各组大鼠体重变化:睡眠剥夺及给药期间,NG组大鼠体重迅速增加。MOD组大鼠体重略有增加,但其增幅明显低于NG组大鼠。EST组、SZRDL组和SZRTH组大鼠体重也有增加,但其增幅明显低于NG组大鼠。与NG组大鼠比较,MOD组大鼠体重偏低,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与MOD组大鼠比较,EST组、SZRDL组和SZRTH组大鼠体重有所增加,差异也没有统计学意义（P>0.05）2.3 Morris水迷宫实验结果:定位航行试验结果:与NG组比较,MOD组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程明显增加（P<0.01）。与MOD比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程均有不同程度减少（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程也有减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程均有减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。空间探查试验:与NG组比较,MOD组大鼠穿越平台的次数与目标象限时间显着减少（P<0.01）,而第1次抵原平台时间则明显增加（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠穿越平台次数和目标象限时间有所增加（P<0.01,P<0.05）,而第1次抵原平台时间则有所减少（P<0.05）;与MOD组比较,EST组大鼠大鼠穿越平台次数和目标象限时间增加、第1次抵原平台时间则减少,但差异无统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠穿越平台次数、目标象限时间和第1次抵原平台时间均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。2.4跳台实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠出错次数明显增加（P<0.01）,而潜伏期则明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠出错次数均有不同程度减少（P<0.01,P<0.05）,而潜伏期则有不同程度增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠大鼠出错次数减少、潜伏期增加,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠出错次数和潜伏期均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。2.5自主活动实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠活动时间和运动距离显着增加（P<0.01）,静止时间有所减少（P<0.05）。与MOD组比较,EST组、SZRDL组和SZRDH组大鼠活动时间和运动距离减少（P<0.01,P<0.05）,静止时间增加（P<0.01,P<0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠运动距离、活动时间和静止时间均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。3.实验二结果3.1尼氏染色结果:NG组大鼠海马CA3区神经元清晰完整,排列紧密,细胞结构完整,细胞内核仁清晰,胞质内可见丰富的尼氏小体。MOD组大鼠神经元排列欠规则,细胞周围间隙增宽,胞质内尼氏小体明显减少。而给予睡眠剥夺大鼠酸枣仁汤后,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区神经元排列好转,尼氏体减少得以改善。但给予睡眠剥夺大鼠艾司唑仑,EST组大鼠海马CA3区神经元排列紊乱和尼氏体数量减少情况改善不明显。通过对各组大鼠海马CA3区神经元数量统计,我们发现MOD组大鼠海马CA3区神经元数量明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组海马CA3区神经元数量有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区神经元数量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区神经元数量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.2高尔基染色结果:NG组大鼠海马CA3区神经元树突棘数量丰富且密度较高。与NG组比较,MOD组大鼠CA3区神经元树突棘密度明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组海马CA3区神经元树突棘密度有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区神经元树突棘密度也有所增加,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区神经元树突棘密度变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.3免疫组化实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.4免疫荧光实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量明显减少。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量有所增加,而EST组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量变化不明显。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量变化不明显。4.实验三结果4.1ELISA实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α的表达量变化也不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。4.2Real time-PCR实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA的表达量变化也不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.实验四结果5.1Real time-PCR实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量也有所减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.2免疫组化实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.3Western bolt实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量有所减少,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。结论:1.理论研究结论:阴血亏虚,神失所养是失眠与学习记忆障碍重要的共同病机,酸枣仁汤作为养血安神法的代表方剂是防治失眠与学习记忆障碍的重要方药。2.慢性睡眠剥夺可引起大鼠出现学习记忆障碍和焦虑样行为,酸枣仁汤可以改善睡眠剥夺引起的学习记忆障碍和焦虑样行为;3.睡眠剥夺可以导致大鼠海马神经元突触受损,酸枣仁汤则可通过调节突触可塑性关键蛋白PSD95、SYP及突触信号传递关键蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表达水平以改善神经元突触损伤;4.睡眠剥夺可引起大鼠血清和海马中出现炎性反应,酸枣仁汤可通过抑制IL-1β和TNF-α的表达水平减轻睡眠剥夺模型大鼠脑内神经炎症;5.酸枣仁汤可通过抑制NLRP3炎性小体通路,减轻神经炎症防治睡眠剥夺引起的学习记忆障碍和焦虑样行为。
朱昆[5]（2021）在《APP/PS1/Tau三转基因小鼠中Aβ寡聚体以及Tau蛋白年龄相关性改变的研究》文中研究表明目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）是引起痴呆的疾病中最常见的一种类型,其临床表现主要以进行性的记忆力减退,认知功能障碍以及激越等相关的精神症状为主,给患者、家属以及社会都带来了巨大的精神和经济负担。AD的主要病理表现为由病理性淀粉样蛋白（Amyloid beta,Aβ）沉积所形成的老年斑（Senile Plaque,SP）,以及由与微管相关的Tau蛋白的异常磷酸化所导致的神经原纤维缠结（Neurofibrillar Tangles,NFTs）,并且伴有突触功能的改变和神经炎症反应。目前,AD的发病机制尚不清楚,目前主要的假说包括Aβ级联假说,Tau蛋白假说,氧化应激假说,以及神经炎症假说等,其中Aβ级联假说最为广泛认可。近十年来,Aβ寡聚体的研究最为热点,越来越多的证据证明,Aβ寡聚体才是AD真正的致病物质。同时,针对AD研究的动物模型也层出不穷,包括APP和Tau的单转基因小鼠,APP/PS1双转基因小鼠,以及APP/PS1/Tau的三转基因小鼠,还有5x FAD转基因小鼠等,他们分别从各自的角度模拟了Aβ或者Tau的产生过程。其中,APP/PS1/Tau于2003年由Oddo等人建立,是目前研究AD较为成熟的一种转基因小鼠。同时,由于Aβ与Tau也存在着相互作用,因此该品系小鼠中转入的Tau蛋白基因也参与了疾病的进程,因此该品系的小鼠也被认为是目前模拟AD进程的最佳工具。AD的发病机制异常复杂,Aβ寡聚体依据其聚集程度的不同又可以细分为二聚体、四聚体、六聚体、Aβ56、原纤维体和纤维体等等,而Tau蛋白的磷酸化又有着多达30个位点。目前对于AD发病机制的研究层出不穷,多数文章对于AD发病机制的研究非常细致,但大多数研究仅涉及Aβ或者Tau的其中之一。并且,由于产生Aβ的APP蛋白为跨膜蛋白,水解产生的Aβ可能存在于细胞内或者细胞外,又可能在疾病的进程中扮演着不同的角色。因此,我们拟以APP/PS1/Tau为蓝本,根据疾病进程中连续的Aβ和Tau蛋白的变化,从宏观的角度揭示疾病的进程,并寻找Aβ与Tau蛋白可能的相关关系,为进一步揭示AD的病理进程提供理论依据。研究方法:我们选取APP/PS1/Tau三转基因小鼠,2-15月龄,每月龄4只,共56只,同时按照相同方式选取相应的对照组（非转基因）2-15月龄小鼠,均为雌性。按照月龄,每月对8只小鼠进行取材,然后进行相关指标的检测。包括经心脏灌流,全脑匀浆后采用Western Blot以及Dot Blot方法测定脑组织中细胞内,细胞外,可溶性和不可溶性,不同聚集程度的Aβ寡聚体的相对浓度,以及不同位点磷酸化的Tau蛋白的浓度;以及其他相关指标的年龄相关性变化,并与同月龄的背景鼠相比较。结果:本研究中,我们采用了APP/PS1/Tau三转基因小鼠,按照1月龄的间隔收集了脑组织,对不同聚集程度的Aβ寡聚体,几种与AD密切相关的不同位点磷酸化的Tau蛋白以及相关的突触蛋白和通路蛋白进行了时间上变化的分析,同时研究了Aβ,Tau和其他蛋白三者之间可能的关系,给出了关于上述指标较为严谨的信息。在复杂的Aβ寡聚体和不同磷酸化位点的Tau蛋白中,（1）细胞外以二聚体,四聚体,六聚体和Aβ56为主,而细胞内则以六聚体和Aβ56为主;（2）细胞外的六聚体和p-Tau S404呈现前后高中间低的变化,细胞外六聚体可能是促使S404位点磷酸化的一种寡聚体;（3）细胞外和细胞内的Aβ56,细胞内六聚体,pTau T181二聚体先升高后降低,在疾病后期再次升高,这三种寡聚体可能与T181相关;（4）细胞外二聚体和p-Tau T181出现两次升高,在疾病后期降低,二者存在相关关系;（5）p-Tau S396以二聚体的形式存在,且浓度逐渐升高,p-Tau T231也逐渐升高;（6）p-Tau S199随疾病进程逐渐去磷酸化。结论:对于AD的疾病进程而言,许多Aβ寡聚体和磷酸化的Tau蛋白在没有记忆和学习功能改变之前就已经出现了有意义的变化,这个变化的时间点在三转基因小鼠中即5月龄,随后逐渐降低,经历这一“蜜月期”后则进入痴呆阶段。不同聚集程度和不同位置的寡聚体也作用于不同的Tau蛋白。
李坤阳[6]（2020）在《低浓度1,2-二氯乙烷亚慢性暴露对小鼠海马谷氨酸代谢的影响及其机制研究》文中研究指明目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）系卤代烃类化合物,为工业上常用的有机溶剂之一,1,2-dce属高毒性一类的中枢神经性化学毒物,,脑神经组织是1,2-DCE主要蓄积并损害的靶器官。目前有关低浓度1,2-DCE长期接触引起脑组织损伤的研究资料极少,需进行深入研究。谷氨酸（glutamate,Glu）是脑中含量最高的氨基酸。它与N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）结合参与长时程增强（long-term potentiation,LTP）的诱导与维持等高级脑活动。突触间隙中的Glu主要通过“谷氨酸-谷氨酰胺”循环来完成代谢与转化等过程。星形胶质细胞（astrocyte,AS）是神经突触间隙中Glu代谢和转运的关键场所,在谷氨酸能神经递质的信息传递中发挥重要作用。因此,如果1,2-DCE对AS内参与Glu代谢和转运等环节产生任何损伤,将严重干扰谷氨酸能神经突触的信息传递,进而影响脑组织的学习记忆功能。本研究以雌性昆明种小鼠为实验研究对象,通过探讨低浓度1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马内Glu代谢与转运等相关环节的影响,为揭示低浓度1,2-DCE长期暴露所致智力损伤的机制提供实验参考数据。方法:本研究将健康、清洁级雌性昆明种小鼠适应性喂养后,随机分为对照组及0.225、0.45和0.9 g/m3的1,2-DCE染毒组。采用静式吸入方式染毒,每天染毒3.5 h,连续染毒8周。首先进行Morris水迷宫及穿梭箱试验检,然后麻醉小鼠,提取海马组织,检测小鼠海马组织中谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase,GS）和谷氨酰胺酶（phosphate-activated glutaminase,PAG）的活性、分布以及表达水平,检测小鼠海马中GS、PAG、谷氨酸/天冬氨酸转运体（glutamate/Aspartate transporter,GLAST）、谷氨酸转运体-1（glutamate transporter-1,GLT-1）、NMDAR亚单位GluN1、GluN2A和GluN2B的转录以及蛋白表达水平,病理切片观察海马组织病理改变,并使用钙离子特异性荧光探针来测定小鼠海马神经细胞内钙离子（calcium,Ca2+）含量。结果:在Morris水迷宫的定位巡航实验中,随着训练天数的增加,各组小鼠的寻找平台的逃避潜伏期不断缩短,但在相同的训练天数里,1,2-DCE染毒组小鼠的逃避潜伏期比对照组延长。而空间探索实验中小鼠的目标象限停留时间和穿梭目标次数也是随着染毒计量的增加而显着降低;在穿梭箱试验中,随着染毒剂量的增加,染毒组小鼠的主动逃避次数明显降低,而主动逃避的潜伏期明显延长。特别是高剂量染毒组,二项指标均有显着意义的改变;与对照组相比,染毒组小鼠海马内GLAST、GLT-1、GS和PAG的mRNA和蛋白表达水平都有不同程度的下降;GS和PAG的酶活力也都随着染毒剂量的增加而显着降低;而谷氨酸受体GluN1、GluN2A和GluN2B的mRNA以及蛋白表达水平随着染毒剂量的增加而增加;染毒组细胞内Ca2+浓度也显着高于对照组;与对照组相比,经HE染色法观察到染毒组的小鼠海马锥体细胞损伤明显。结论:1、较低浓度1,2-DCE亚慢性暴露可损伤小鼠的学习和记忆能力。2、1,2-DCE对小鼠学习记忆功能的损伤可能与其干扰小鼠海马内Glu-Gln循环,导致突触间隙Glu蓄积所引起的神经兴奋性毒性有关。
韩诚[7]（2019）在《从“肾脑相关”论衰老学习记忆功能减退的脑功能失衡机制》文中提出目的:研究衰老状态下学习记忆功能减退在脑不同层次阴阳失衡的表现和发生机制,初步阐明地黄饮子对衰老模型小鼠海马突触可塑性的作用机制,为补肾健脑法提供现代生物学依据。方法:采用理论探讨与实验研究相结合的方法。1、理论探讨:系统梳理中医学和现代医学对衰老及学习认知的认识,探讨从肾论治衰老学习记忆功能减退的可能性。2、实验研究:（1）实验分组:设正常对照组、衰老模型组、地黄饮子（低、中、高剂量）组和盐酸美金刚阳性药物组共计6组。其中,以6月龄雄性SAMP8小鼠作为衰老动物模型,以同月龄雄性SAMR1小鼠为正常对照,其他各组采用同月龄雄性SAMP8小鼠并给予药物干预。（2）给药干预:各组动物正常饮食条件喂养至5月龄后,从第6个月开始地黄饮子（低、中、高剂量）组小鼠分别每天灌胃不同浓度的地黄饮子水煎液（7.51g/kg·d、15.02g/kg·d、30.04g/kg·d）,盐酸美金刚组小鼠灌胃盐酸美金刚混悬液（3.03mg/kg·d）,正常对照组和衰老模型组动物小鼠灌胃等量溶媒。各组动物每天灌胃给药1次,连续1个月后,进行如下指标检测。（3）学习记忆能力评价:采用Morris水迷宫和新物体识别实验方法评价各组小鼠的空间学习能力、空间参考记忆力和新物体识别能力。（4）突触结构可塑性检测:采用透射电镜技术观察各组小鼠神经元和突触结构的形态变化。（5）突触功能可塑性检测:对各组小鼠海马内“schaffer侧枝-CA1区”突触回路进行在体场电位记录实验,观察LTP和LTD现象,评价突触传递效率。（6）海马神经递质检测:采用酶联免疫吸附实验方法检测各组小鼠海马组织谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的差异。（7）谷氨酸受体和钙调素依赖性蛋白激酶II的检测:采用蛋白免疫印迹法检测各组小鼠海马组织AMPAR2、NMDAR1、pNMDAR1、NMDA2A、pNMDA2A、NMDA2B、pNMDA2B、CaMKII、pCaMKII共9个蛋白的含量和磷酸化水平。结果:1.理论研究结果:基于“肾脑相关”理论,从经络联系、精髓关系、元神、肾志与脑神的关系,以及阴阳变化5个方面探讨了从肾论治衰老学习记忆功能减退的可能性;并且基于阴阳学说理论,认为现代脑科学相关研究成果都是阴阳之象,是对中医阴阳理论的丰富和扩展,用阴阳的思维模式去认识脑具有可行性。2.实验研究结果:（1）行为学检测结果:Morris水迷宫检测结果显示,与正常对照组相比较,衰老模型组小鼠空间学习记忆能力显着下降（P<0.05）;与衰老模型组相比,地黄饮子高剂量可以有效提升小鼠空间辨识和记忆提取能力,减少空间搜索时间（P<0.05）;新物体识别显示,与正常对照组相比较,衰老模型组小鼠记忆力受损（P<0.05）;与衰老模型组相比,地黄饮子高、中剂量均能使小鼠准确区分被更换的物体（P<0.05）,并增加其对新物体辨识的时间（P<0.01）。（2）在体场电位记录结果:快速老化的SAMP8小鼠的兴奋性突触后电位经过200Hz的高频刺激后增幅不明显,LTP效应明显低于相同月龄的抗老化SAMR1小鼠（P<0.001）,给予地黄饮子治疗后,则可以有效增强模型小鼠的LTP效应（P<0.05）。而在2Hz的低频刺激下,各组小鼠LTD的易化效应和EPSP的抑制程度具有明显的差异。与6月龄的快速老化SAMP8小鼠相比,相同月龄的抗老化SAMR1小鼠LTD效应仅在低频刺激后的小段时间内受到强化,随着时间流逝,其LTD易化现象逐渐恢复,突触后的兴奋性电位逐渐恢复正常（P<0.001）;给予地黄饮子治疗后,地黄饮子高剂量组小鼠的LTD效应也得到一定程度的恢复（P<0.05）。（3）透射电镜检测结果:通过透射电镜我们可以观察到,模型组小鼠的海马CA1区神经元细胞损伤、突触间隙增大或消失,突触前、后膜不清晰,突触小泡减少,突触后致密物质变薄;线粒体结构崩解,嵴断裂或溶解。给予地黄饮子灌胃治疗后,神经元细胞器损伤减少,突触结构得到修复。（4）ELISA检测结果:衰老模型组小鼠海马内Glu与GABA含量显着增加（P<0.001）,经过药物治疗后,各组小鼠海马内Glu与GABA含量均有所降低,尤其是地黄饮子高剂量组的Glu与GABA含量降低最明显（P<0.01）。（5）WB检测结果:SAMP8模型小鼠海马内AMPAR2、NMDAR1和NMDA2B的含量升高（P<0.05）,CaMKII含量降低（P<0.05）,pNMDAR1、pNMDA2A和pNMDA2B的含量增高（P<0.05）,pCaMKII含量降低（P<0.05）。运用地黄饮子治疗后,中剂量地黄饮子可以有效降低NMDAR1的蛋白含量（P<0.01）;高剂量地黄饮子可以有效增加CaMKII的蛋白含量和磷酸化程度（P<0.05）,降低AMPAR2、NMDA2B和pNMDA2B的异常表达（P<0.05）。结论:1.海马组织Glu和GABA含量增高、代谢失衡与衰老状态小鼠学习记忆功能减退有关;2.海马“schaffer侧枝-CA1区”突触回路的LTP/LTD效应失衡是衰老状态下学习记忆功能减退的脑电生理层面阴阳失衡的机制;3.海马神经细胞内钙离子超载是衰老状态下脑电生理和氨基酸神经递质层面阴阳失衡的关键因素。4.补肾方剂地黄饮子可通过调节神经细胞内钙离子浓度,抑制钙内流而易化神经突触可塑性,从而改善衰老小鼠的学习记忆功能。
彭静[8]（2019）在《涤痰汤改善痰浊证老年MCI模型大鼠学习记忆及突触可塑性的研究》文中研究说明目的本课题理论研究部分旨在从“痰邪为患”致“健忘”、“呆病”角度探讨老年轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment,MCI）的病因病机,阐明中医经典治痰古方“涤痰汤”以“健脾涤痰、益气化浊、醒脑开窍”为基本治法,治疗痰浊证老年MCI的理论依据。实验研究部分通过构建痰浊证老年MCI大鼠模型,采用一般情况观察、行为学、生物化学方法,旨在观察和分析涤痰汤对模型大鼠痰浊证表现、学习记忆能力、脂代谢情况、氧化应激指标的影响;并进一步采用组织形态学、神经电生理及蛋白检测方法,旨在从突触可塑性角度,探讨和分析涤痰汤改善模型大鼠学习记忆障碍的可能机制。方法理论研究理论研究部分回顾和总结了祖国医学对于MCI病名、病位、症状等的记载与认识,并着重从“痰邪为患”角度探讨和分析了MCI病因、病机,归纳和分析了MCI的中医基础、临床和中医流行病学相关研究,结合“涤痰汤”组方分析和导师团队前期研究,为“涤痰汤”从痰论治痰浊证老年MCI提供理论依据。实验研究实验研究分两部分进行,采用SPF级雄性SD大鼠60只随机分为老年对照组、模型组、西药组、涤痰汤高剂量组及涤痰汤低剂量组,另设3月龄SPF级雄性SD大鼠12只为青年对照组。采用颈背部皮下注射D-半乳糖(50mg·kg-1)8周结合半高脂饲料喂食4周（前4周仅注射D-半乳糖,第5周起加喂半高脂饲料）的方法制备痰浊证老年MCI实验动物模型。各组第5周起开始灌胃,连续4周,10 ml·kg-1,每日1次。西药组给予盐酸多奈哌齐,加水制成混悬液,0.9mg·kg-1;涤痰汤低、高剂量组给药量分别按人体服用量1、2倍折算(折合成生药量为4.275g·kg-1和8.55g·kg-1);其余3组（老年对照组、模型组、青年对照组）予等容积蒸馏水。前半部分实验采用Morris水迷宫、穿梭箱实验检测评价各组大鼠学习记忆能力,通过生化分析仪检测血脂水平,比色法测定海马组织中T-AOC、GSH-PX含量,观察和探讨涤痰汤对模型大鼠学习记忆、脂代谢及氧化应激指标的影响。后半部分实验采用Nissl染色法观察和分析各组大鼠海马神经元数量,Golgi染色法观察和分析各组大鼠海马组织树突棘形态、数量及构成改变,神经电生理方法检测实验各组海马CA1区长时程增强效应,Western blot检测SYP、PSD95、NR2B等突触相关蛋白水平,从突触可塑性角度,探讨涤痰汤改善模型大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果理论研究MCI归属中医健忘、痴呆范畴,其病位在脑,发病关乎五脏,临床表现以本虚标实,虚实兼杂为主要特点,“痰邪为患”致“呆”是其重要病机。无论是“呆病多痰”、“治痰即治呆”等中医传统理论,还是现有的中医基础、临床和证候相关研究,均为从痰论治MCI提供了详实的依据。涤痰汤从痰论治认知障碍,以健脾理气化痰、益气醒神开窍为基本大法,在基础和临床研究中均表现出较好的疗效,涤痰汤组方中所有药物均含有对认知功能有益的成分,可能通过彼此间的协同增效,发挥多靶向联合作用,提升整体治疗效果。实验研究1.涤痰汤对痰浊阻窍型老年MCI模型大鼠学习记忆、脂代谢及氧化应激的影响:（1）一般情况:模型组大鼠表现出毛皮污秽,精神萎靡,嗜卧懒动,纳差便溏等痰浊阻窍证型特征,涤痰汤对模型大鼠的痰浊证候具改善作用。（2）Morris水迷宫实验:模型组定位航行逃避潜伏期明显延长,空间探索实验显示首次穿台耗时明显延长,穿台次数明显减少,目标象限探索时间明显减低,与对照组比较,有显着性差异（P<0.01）;与模型组相比,中药涤痰汤组与西药盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期及首次穿台耗时均明显缩短,穿台次数明显增多,目标象限探索时间明显延长（P<0.01或P<0.05）。（3）穿梭箱实验:与对照组相比,模型组大鼠主动回避次数明显减少、电击次数明显增多、主动回避潜伏期和电击时间均明显延长（P<0.01）;给药后,与模型组比较,涤痰汤高、低剂量组、西药组大鼠主动回避次数均显着增多、电击次数均显着减少、主动回避潜伏期和电击时间均显着缩短（P<0.01或P<0.05）;涤痰汤高剂量组与西药组相比,无显着性差异（P>0.05）;涤痰汤高、低剂量组间相比,主动回避次数、电击次数、电击时间的改善有显着性差异（P<0.05）。（4）血脂检测:与对照组比较,模型组总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）均增高（与青年对照组比较P<0.01,与老年对照组比较P<0.05）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组TC、LDL-C、TG减低（P<0.05）,TG明显减低（P<0.01）,涤痰汤低剂量组TG减低（P<0.05）,盐酸多奈哌齐组无明显变化（P>0.05）。（5）氧化应激指标T-AOC、GSH-PX含量检测:与对照组相比,模型组大鼠海马组织T-A0C及GSH-PX含量显着下降（P<0.01）;与模型组相比,涤痰汤和盐酸多奈哌齐均能显着提高模型大鼠的海马T-A0C及GSH-PX含量（P<0.01或P<0.05）。2.涤痰汤对痰浊型老年MCI模型大鼠突触可塑性的影响:（1）Nissl染色:与对照组相比,模型组尼氏小体形态上变小,数量上减少,数据分析显示神经元数量明显降低（P<0.01）;与模型组相比,涤高剂量组与西药组神经元数量增加,差异有显着性（P<0.05）。（2）Golgi染色:模型组树突棘形态不规则、排列松散、数量稀少,与老年对照组相比,树突棘总数及蘑菇状树突棘数目均显着减少（P<0.01）;涤痰汤高剂量组与西药盐酸多奈哌齐组树突棘总数和蘑菇形态树突棘数量均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）电生理LTP检测:模型组大鼠无法顺利诱导出稳定的LTP,与对照组相比,LTP幅度低下,EPSP斜率下降明显（P<0.01）;与模型组比较,高剂量涤痰汤组EPSP斜率和LTP幅度明显增加（P<0.01）,西药组、涤痰汤低剂量组变化不明显（P>0.05）。（4）Western blot免疫印迹检测:与对照组相比,模型组大鼠海马组织突触相关蛋白SYP、PSD95、NR2B表达均明显降低（P<0.01）;与模型组相比,涤痰汤低剂量组和西药盐酸多奈哌齐PSD95表达明显增加（P<0.01）,NR2B表达亦增加（P<0.05）;涤痰汤高剂量组PSD95、NR2B表达均明显增加（P<0.01）,SYP表达亦增加（P<0.05）。结论1.MCI归属中医健忘、痴呆范畴,其病位在脑,发病关乎五脏,“痰邪为患”是MCI发病的重要病机,从痰论治MCI有据可依,涤痰汤可能通过组方药物的协同作用,对MCI发挥整体治疗效果。2.D-半乳糖皮下注射结合半高脂餐复合造模方式成功构建了痰浊证型MCI模型,表现为:模型大鼠出现痰浊证候、空间学习记忆障碍和回避反应能力降低、脂代谢紊乱和氧化应激受损。3.涤痰汤能改善模型大鼠痰浊证候表现、可减轻模型大鼠的脂代谢紊乱和氧化应激损伤,改善模型大鼠的海马依赖性学习记忆障碍。4.模型大鼠出现突触可塑性受损的病理改变,表现为:海马组织神经元丢失、功能减退、突触微结构和长时程增强效应受损、突触相关蛋白表达降低。5.涤痰汤可能通过修复受损的海马神经元和突触微结构损伤,增进长时程增强效应,上调突触相关蛋白SYP、PSD95、NR2B表达,改善模型大鼠的突触结构和功能损害,一定程度恢复模型大鼠受损的突触可塑性,而发挥改善学习记忆障碍的作用。
陈婷婷[9]（2018）在《辛伐他汀对认知功能的影响及其分子机制研究》文中研究指明他汀类药作为胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（3-hydroxy-3-methyl-glytarylcoenzymeA,HMG-CoA）还原酶的抑制剂已广泛用于心血管疾病的治疗。流行病学资料表明他汀类药物服用者的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）患病率有所降低。有研究报道,辛伐他汀（Simvastatin,SV）能改善阿尔茨海默动物模型小鼠和老龄大鼠的认知功能,但是有关其分子机制迄今仍然不清楚。N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA）受体是离子型谷氨酸受体的一个亚型。NMDA受体受电压门控和递质门控的双重门控通道影响。烟碱样乙酰胆碱受体 α7亚型（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nACh受体）属于配体门控型离子通道受体。海马的突触可塑性长时程增强（long-term potentiation,LTP）被认为是空间学习和记忆的一种细胞模式。LTP的诱导依赖于突触后神经元的NMDA受体Ca2+内流。α7nACh受体作为Ca2+通道型受体,或通过诱导 PI3K-Akt（phosphatidylinosito 1-3 kinase-protein kinase B）和 ERK（extracellular-signal regulated kinase）信号通路,对于海马突触前神经递质释放和LTP诱导起到重要的调控作用。抑制HMG-CoA还原酶能降低类异戊二烯化合物水平,如焦磷酸法呢酯（farnesyl-pyrophosphate,FPP）和焦磷酸香叶酯（geranylgeranyl-pyrophosphate,GGPP）。类异戊二烯化合物通过法尼基化小G蛋白调节Ras、Rho和Rab的活性。有研究报道敲除Ras基因能促进Src和NMDA受体亚基NR2B的磷酸化,增强NMDA受体活性。本课题提出SV可能通过降低类异戊二烯化合物来调控修饰NMDA受体和α7nACh受体的表达和活性,促进海马突触可塑性LTP的诱导,从而提高空间认知功能的科研设想。因此,我们首先研究SV对海马突触传递功能和可塑性的影响,再进一步研究SV对NMDA受体和α7nACh受体的修饰作用及其调控机制,以阐明SV促进海马LTP诱导和增强空间认知功能的分子机制。研究目的1.明确SV对小鼠认知传递功能和海马突触可塑性的影响;2.阐明SV对NMDA受体的修饰作用及其分子机制;3.阐明SV对α7nACh受体的调控作用及其分子机制。材料与方法1.模型制备:（1）成年ICR雄鼠连续30天给予辛伐他汀20mg/kg/d灌胃（以下简称30d-SV小鼠）（第一部分实验）；出生后25-30天的ICR乳鼠连续5天给予辛伐他汀20mg/kg/d腹腔注射（简称5d-SV小鼠）（第二部分实验）;（2）出生后25-30天的ICR乳鼠用SV（10μM）海马脑片孵育4h（简称SV脑片）（第二和第三部分实验）;（3）法尼基转化酶抑制剂FTI（50 mg/kg）腹腔注射（简称FTI小鼠）;（4）法尼基转化酶抑制剂FTI（1μmol/l）处理（简称FTI脑片）2.用Morris水迷宫的暗台试验和轨迹试验,Y迷宫检查小鼠的认知功能。3.用场电位方法检测海马Schaffer侧支-CAl（ComuAmmonisl field）突触传递（输入-输出曲线,I/O曲线,input-output relationship曲线）,神经递质释放（双脉冲易化,paired-pulse facilitation,PPF）,长时程增强（LTP）。4.用全细胞膜片钳记录检测NMDA受体、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate 受体,AMPA 受体）和α7nACh受体电流。5.用Wester blot检测海马GluN2A、GluN2B蛋白水平,GluN2A、GluN2B、Src、PKC（protein kinas C）、PKA（protein kinas A）、CaMK II（calmodulin-kinase II）、Akt、Erk磷酸化水平。6.用 RT-PCR 检测 GluN2A、GluN2B 表达。7.膜蛋白检测实验:用生物素化,提取膜蛋白,检测α7nACh受体在膜表面的表达水平。8.免疫沉淀（IP）:检测α7nACh受体在苏氨酸位点和丝氨酸位点的磷酸化水平。9.染色质免疫沉淀分析（Chromatin Immunoprecipitation,Chip）:采用 Chip分析GluN2B基因启动子区的乙酰化水平。结果结果一 SV通过减少焦磷酸法呢酯能促进海马突触传递和LTP,增强空间认知1.连续30天SV处理（30d-SV）引起成年小鼠在水迷宫暗台实验中的登台潜伏期明显减少,在轨迹实验中站台象限的游泳时间延长,以及在Y迷宫实验中的进臂交替率增加,提示SV能增强小鼠的空间认知功能。2.30d-SV 小鼠海马 Schaffer 侧支-CA1 的 EPSP（excitatory post-synaptic potentiation）斜率比与对照小鼠增加,伴有PPF比率降低,提示SV能促进谷氨酸的释放。3.与对照小鼠相比,30d-SV小鼠海马NMDA受体依赖性LTP幅值增加——SV能增强LTP,NMDA受体非依赖性LTP诱导阈值降低——SV能易化LTP诱导。4.在30d-SV小鼠海马的Akt及ERK2磷酸化水平增强。MLA能抑制30d-SV小鼠Akt和ERK2磷酸化水平增强。5.α7nACh受体阻断剂MLA,MEK抑制剂U0126和PI3K抑制剂LY294002能阻止30d-SV小鼠LTP诱导易化;MLA、U0126可阻止30d-SV小鼠LTP诱导增强,而此作用不受LY294002影响。6.用法尼醇（FOH）处理30d-SV小鼠,通过补充焦磷酸法呢酯（FPP）水平,能阻止SV增强空间认知和促进递质释放和LTP诱导。结果二SV通过降低FPP促进NMDA受体的表达和活性1.连续5天SV处理（5d-SV）小鼠或者海马脑片进行SV孵育（SV脑片）都能增大NMDA受体电流（INMDA）的幅值,但是AMPA受体电流（IAMPA）幅值没有明显改变。用FOH可以阻断SV对INMDA幅值的增强作用。用FTI连续5天处理小鼠（FTI小鼠）也显示INMDA幅值增强。2.海马GluN2A和GluN2B的磷酸化水平在5d-SV小鼠,SV脑片或FTI小鼠都明显高于对照组水平。FOH可以阻断SV对GluN2A/2B磷酸化的增强作用。3.与对照组相比,5d-SV 小鼠或者 FTI（Farnesyl Transferase Inhibitor）小鼠显示GluN2B蛋白表达水平增强,但是SV脑片GluN2B蛋白表达不改变。FOH可以阻断SV增强GluN2B蛋白表达。4.SV和FTI能增加Src的磷酸化。Src抑制剂PP2能阻断SV和FTI对INMDA幅值及GluN2A/2B磷酸化的增强作用,但是不影响GluN2B表达的增加。5.5d-SV小鼠或者FTI小鼠显示GluN2B的H3K9和H3K27组蛋白乙酰化水平增加。FOH可以抑制5d-SV小鼠的GluN2B组蛋白乙酰化水平增加。结果三SV通过降低FPP增强α7nACh受体活性和促进α7nACh受体上膜1.在SV脑片的海马CA1锥体细胞,乙酰胆碱（ACh）诱导电流（IACh）的幅值明显增加,但是配体的亲和力及受体脱敏半衰期没有明显改变,提示SV增加α7nACh受体活性。2.与对照组相比,在SV脑片α7nACh受体膜蛋白水平明显增加,而α7nACh受体磷酸化水平没有改变,提示SV能促进α7nACh受体上膜。3.FOH可以阻断SV增加IACh幅值和α7nACh受体上膜。FTI脑片显示IACh幅值和α7nACh受体膜蛋白水平增加。4.与对照组相比,SV脑片的PKC和CaMKII磷酸化水平增加。FOH可以阻断SV脑片的CaMKII磷酸化水平增加,但是不影响PKC磷酸化增加。FTI脑片出现CaMKII磷酸化水平增强,而不改变PKC磷酸化水平。IP3受体抑制剂2-APB能阻止SV脑片PKC磷酸化水平增加。5.CaMKII抑制剂KN93能阻断SV脑片的IACh幅值和α7nACh受体膜蛋白水平增加。PKC抑制剂GF109203X和Go6983仅仅能阻断SV脑片的IACh幅值增加。总结SV通过降低FPP水平促进GluN2B乙酰化导致NMDA受体表达增加,和促进Src介导GluN2B/2A磷酸化,导致NMDA受体活性增加。SV通过降低FPP水平促进NMDA受体介导的CaMKⅡ磷酸化,增加α7nACh受体上膜;SV增加IP3受体介导的PKC磷酸化,增强α7nACh受体活性。SV通过增强海马Schaffer侧支-CA1的α7nACh受体介导的突触传递功能和NMDA受体依赖性LTP诱导,导致小鼠空间认知功能增强。
张海红[10]（2015）在《NMDA受体与中枢神经系统退行性疾病》文中进行了进一步梳理兴奋性氨基酸（excitatory amino acids,EAA）是存在于中枢神经系统的兴奋性神经递质,主要包括谷氨酸和天门冬氨酸。谷氨酸受体可分为离子型和代谢型两类。N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体是离子型受体的一种亚型。NMDA受体可介导Ca2+内流,增强突触可塑性,参与学习记忆及神经系统发育。另一方面,机体兴奋性氨基酸剧增时,通过激动NMDA受体引起大量的Ca2+内流,细胞内Ca2+超载,进一步激活一系列胞内机制而导致细胞死亡。所以NMDA受体历来被认为是一把双刃剑。NMDA受体活性调节的失衡可能是神经退行性疾病、癫痫及缺血性脑损伤等许多中枢神经系统疾病发病的基础。该文重点就NMDA受体与神经退行性疾病的关系进行综述。
二、脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响（论文提纲范文）
（1）通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中风病恢复期中医治疗进展研究 |
| 1 中药治疗 |
| 2 针灸治疗 |
| 3 推拿按摩治疗 |
| 4 运动疗法 |
| 综述二 血管性痴呆中西医发病机制研究进展 |
| 1 血管性痴呆西医发病机制 |
| 2 中医对血管性痴呆病因病机的认识 |
| 参考文献 |
| 第二章 临床研究通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 病例来源 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 研究设计 |
| 6 治疗方案 |
| 7 观察指标及方法 |
| 8 疗效评价标准 |
| 9 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 观察对象入选及完成情况 |
| 2 受试者基本信息 |
| 3 受试者基线生命体征及一般情况 |
| 4 受试者基线合并疾病情况 |
| 5 药品使用情况 |
| 6 基线体格检查情况 |
| 7 基线辅助检查 |
| 8 疗效评价 |
| 9 安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 1 临床研究完成情况 |
| 2 临床研究治疗方案的设计及实施情况 |
| 3 临床结果讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 实验研究通络化痰胶囊对VD大鼠clathrin介导的NMDA受体作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第二节 结果 |
| 1 行为学实验结果 |
| 2 通络化痰胶囊对VD大鼠海马组织形态学的影响 |
| 3 造模后不同时间点各组大鼠海马组织clathrin、NMDAR1及Rab5b mRNA RT-PCR结果 |
| 4 造模后不同时间点海马组织clathrin、膜蛋白NMDAR1 Western Blot结果 |
| 第三节 讨论 |
| 1 血管性痴呆大鼠行为学特点 |
| 2 组织形态学特点 |
| 3 通络化痰胶囊对脑缺血再灌注早期海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程不同时点的动态变化研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 创新与优势 |
| 2 不足与展望 |
| 附录 |
| 1. 通络化痰胶囊治疗中风病中经络(脑梗塞)恢复期(痰瘀阻络证)临床研究CRF表 |
| 2. 各组大鼠海马CA1区组织形态观察 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）钩藤碱对氧糖剥夺星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 前言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂和器材 |
| 2.1.3 实验所用溶液、试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验前准备 |
| 2.2.2 海马区As提取、原代培养 |
| 2.2.3 海马区As传代培养 |
| 2.2.4 免疫荧光法As的鉴定 |
| 2.2.5 As缺血缺氧模型制备及加药处理 |
| 2.2.6 Real time-PCR |
| 2.3 统计分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 海马区As培养结果 |
| 3.2 As免疫荧光鉴定结果 |
| 3.3 缺血缺氧后AsHMGB1和CDK5 mRNA的表达 |
| 3.4 钩藤碱对缺血缺氧后As HMGB1 mRNA表达的影响 |
| 3.5 钩藤碱对缺血缺氧后As CDK5 mRNA表达的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（3）电针对4月龄APP/PS1转基因鼠海马突触可塑性相关蛋白的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 阿尔茨海默病Aβ与突触及其可塑性关系的研究 |
| 1.Aβ与突触功能障碍的发病机制之间的关系 |
| 2.突触中突触可塑性的作用 |
| 3.Aβ对突触可塑性的影响 |
| 参考文献 |
| 综述二 针刺对阿尔茨海默病突触功能障碍影响的研究进展 |
| 1.针刺可以改善突触超微结构 |
| 2.针刺可以增强突触传递功能 |
| 3.针刺能促进谷氨酸受体的表达及活性增加突触可塑性 |
| 4.针刺对突触可塑性相关蛋白的调控作用 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 材料与方法 |
| 1.仪器与材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.免疫组化结果 |
| 2.免疫荧光结果 |
| 3.Western Blot结果 |
| 4.相关性分析 |
| 讨论 |
| 1.中医对阿尔茨海默病的认识 |
| 2.选穴原则 |
| 3.海马突触与认知功能的关系 |
| 4.电针对突触可塑性相关蛋白的影响 |
| 5.电针干预下Aβ与突触可塑性的关系 |
| 6.相关性分析的讨论 |
| 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 中医理论研究 |
| 1.中医对失眠病症病名的认识 |
| 2.中医对失眠病症病因病机的认识 |
| 2.1 中医对失眠病症的病因的认识 |
| 2.2 中医对失眠病症病机的认识 |
| 3.中医对学习记忆障碍的认识 |
| 3.1 中医对学习记忆障碍病名的认识 |
| 3.2 中医对学习记忆障碍病位、病因病机的认识 |
| 4.中医对失眠与学习记忆障碍相关性的认识 |
| 4.1 阴血亏虚,神失所养是两者重要的共同病机 |
| 4.2 失眠是引起学习记忆障碍重要的因素 |
| 5.养血安神法是改善睡眠与学习记忆的重要治法 |
| 6.酸枣仁汤方义与临床、实验研究 |
| 6.1 酸枣仁汤的药物组成与方义 |
| 6.2 酸枣仁汤的临床与实验机制研究 |
| 7.酸枣仁汤对学习记忆作用的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验部分 |
| 实验一 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠学习记忆行为学及自主活动的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马区突触可塑性的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马中炎症因子的的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马 NLRP3 炎性小体通路的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 附录一 综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 博士在读期间参与科研情况 |
| 致谢 |
（5）APP/PS1/Tau三转基因小鼠中Aβ寡聚体以及Tau蛋白年龄相关性改变的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 1.1 Aβ与Tau蛋白的研究进展 |
| 1.2 AD相关模型小鼠的研究 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物处理 |
| 2.2.2 小鼠的采血及处死 |
| 2.2.3 血液标本的处理 |
| 2.2.4 脑组织匀浆的制备 |
| 2.2.5 BCA方法测定各组分钟蛋白浓度 |
| 2.2.6 蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测各个组分中的蛋白含量 |
| 2.2.7 Dot Blot方法检测各个样品中Aβ总含量 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 脑组织各组分匀浆的验证 |
| 3.2 APP/PS1/Tau三转基因小鼠及野生型小鼠脑组织各组分中Aβ寡聚体的年龄相关性变化 |
| 3.2.1 APP/PS1/Tau三转基因小鼠脑组织细胞外组分Aβ寡聚体的年龄相关性变化 |
| 3.2.2 APP/PS1/Tau三转基因小鼠脑组织细胞内组分Aβ寡聚体的年龄相关性变化 |
| 3.2.3 APP/PS1/Tau三转基因小鼠以及野生型小鼠脑组织不可溶组分Aβ总量的年龄相关性变化 |
| 3.3 APP/PS1/Tau三转基因小鼠脑组织中总Tau 蛋白以及磷酸化 Tau 蛋白的年龄相关性变化 |
| 3.4 野生型小鼠脑组织中磷酸化Tau蛋白的年龄相关性变化 |
| 3.5 APP/PS1/Tau三转基因小鼠脑组织各组分中突触和NR2B受体的年龄相关性变化 |
| 3.6 APP/PS1/Tau三转基因小鼠中寡聚体,磷酸化Tau蛋白以及突触蛋白的相关性研究 |
| 3.6.1 p-Tau S404,细胞外六聚体,NR2B受体 |
| 3.6.2 Aβ原纤维体,p-Tau S199,p-Tau T231,p-Tau S396二聚体,PSD95以及突触素 |
| 3.6.3 Aβ56,细胞内六聚体与p-Tau T181二聚体 |
| 3.6.4 p-Tau T181与细胞外四聚体 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 阿尔茨海默病的发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）低浓度1,2-二氯乙烷亚慢性暴露对小鼠海马谷氨酸代谢的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 研究对象与分组 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.3.1 水迷宫实验 |
| 2.3.2 穿梭箱实验 |
| 2.3.3 脑组织的病理学观察 |
| 2.3.4 免疫组织化学染色 |
| 2.3.5 脑组织中 GS 活性测定 |
| 2.3.6 脑组织中 PAG 活性测定 |
| 2.3.7 小鼠海马内GS、GLAST、GLT-1、PAG、GluN1、GluN2A和GluN2B的mRNA表达水平测定 |
| 2.3.8 小鼠海马内 GLAST、GLT-1、GS、PAG、Glu N1、Glu N2A 及 Glu N2B蛋白表达水平的测定 |
| 2.3.9 海马神经细胞内钙离子浓度测定 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠空间学习记忆能力的影响 |
| 3.1.1 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠空间学习能力的影响 |
| 3.1.2 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠空间记忆能力的影响 |
| 3.2 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠回避型条件反射学习记忆的影响 |
| 3.3 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织损伤的病理观察 |
| 3.4 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GS表达的影响 |
| 3.5 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中PAG表达的影响 |
| 3.6 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中Glu转运体GLAST和GLT-1表达的影响 |
| 3.6.1 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GLAST表达的影响 |
| 3.6.2 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GLT-1表达的影响 |
| 3.7 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GluN1、GluN2A及GluN2B表达的影响 |
| 3.7.1 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GluN1表达的影响 |
| 3.7.2 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马组织中GluN2A表达的影响 |
| 3.7.3 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马内GluN2B表达的影响 |
| 3.8 1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马内钙离子含量的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）从“肾脑相关”论衰老学习记忆功能减退的脑功能失衡机制（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 理论探讨 |
| 一、中医学对学习记忆功能的认识 |
| (一)“神”乃精神意识思维活动 |
| (二)五脏藏神协调认知过程 |
| (三)脑主元神启发灵机神明 |
| 二、中医学对衰老的认识 |
| (一)阴阳失衡而衰 |
| (二)五脏衰而寿尽 |
| (三)肾乃寿夭关键 |
| 三、从“肾脑相关”论衰老学习记忆功能减退 |
| (一)经络不通,肾脑失联 |
| (二)肾精不足,脑髓不满 |
| (三)元气衰竭,神去机息 |
| (四)志无所藏,神无所化 |
| (五)阴阳失调,迷惑健忘 |
| 四、现代医学对学习记忆功能的认识 |
| (一)学习记忆活动的行为模式 |
| (二)学习记忆活动的结构基础 |
| (三)学习记忆活动的物质基础 |
| 五、现代医学对衰老的认识 |
| (一)基因功能紊乱与衰老 |
| (二)细胞自噬与衰老 |
| (三)氧化应激-炎症-免疫与衰老 |
| (四)与衰老相关的其他学说及认识 |
| 六、衰老与学习记忆功能的关系 |
| (一)相关脑区突触可塑性的改变 |
| (二)中枢神经递质的改变 |
| (三)离子通道通透性与功能的改变 |
| (四)激素水平的改变 |
| 七、从肾论治衰老肾虚状态下学习记忆功能减退 |
| (一)基于阴阳失衡探究学习记忆功能减退 |
| (二)运用地黄饮子从肾论治学习记忆功能减退 |
| 实验研究 |
| 实验一 地黄饮子对SAM小鼠学习记忆功能的影响 |
| 一、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验仪器 |
| (三)药品与试剂 |
| 二、实验方法 |
| (一)实验设计 |
| (二)主要试剂及药品配制备 |
| (三)行为学实验检测 |
| (四)在体海马场电位记录 |
| (五)海马组织样本采集、固定与制片方法 |
| (六)统计方法 |
| 三、实验结果 |
| (一)地黄饮子对SAM小鼠空间学习记忆能力下降的改善作用 |
| (二)地黄饮子对SAM小鼠短期学习记忆能力下降的改善作用 |
| (三)地黄饮子对SAM小鼠海马突触结构可塑性的改善作用 |
| (四)地黄饮子对SAM小鼠海马突触功能可塑性的改善作用 |
| 四、讨论 |
| (一)地黄饮子参与调节学习记忆 |
| (二)地黄饮子参与调节海马突触可塑性 |
| (三)LTP/LTD效应失衡是衰老肾虚证脑电生理阴阳失衡的表现之一 |
| 五、小结 |
| 实验二 地黄饮子对SAM小鼠海马突触可塑性的作用机制研究 |
| 一、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验仪器 |
| (三)药品与试剂 |
| 二、实验方法 |
| (一)实验设计、分组情况及实验流程 |
| (二)主要试剂及药品配制 |
| (三)待测样本的收集与检测 |
| (六)统计方法 |
| 三、实验结果 |
| (一)酶联免疫法检测海马内Glu、GABA含量 |
| (二)Western blot检测海马内谷氨酸受体、CaMKII的表达 |
| 四、讨论 |
| (一)兴奋性与抑制性氨基酸神经递质代谢失衡是脑内神经递质阴阳失衡的表现之一 |
| (二)衰老状态下脑不同层次阴阳失衡的关键在于钙离子代谢异常 |
| (三)地黄饮子可以有效调节衰老状态下的学习记忆能力下降 |
| 五、小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1.Master8 刺激器各阶段刺激模式程序 |
| 附录2.fEPSPs计算公式 |
| 附录3.各组小鼠海马透射电镜观察结果 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
（8）涤痰汤改善痰浊证老年MCI模型大鼠学习记忆及突触可塑性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 中医对MCI病名与症状的描述与记载 |
| 中医对MCI病位的认识 |
| 中医对MCI的病因病机认识 |
| MCI的主要证型与证候分布 |
| 涤痰汤组方分析与导师团队前期研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 涤痰汤对痰浊证老年MCI模型大鼠学习记忆、脂代谢及氧化应激相关指标的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 结果 |
| 1 一般情况观察 |
| 2 Morris水迷宫实验 |
| 3 穿梭箱实验 |
| 4 血脂水平检测 |
| 5 氧化应激指标测定 |
| 讨论 |
| 1 痰浊证老年轻度认知功能障碍大鼠模型的构建 |
| 2 涤痰汤组方各药功效及药理作用 |
| 3 涤痰汤改善模型大鼠的学习记忆能力 |
| 4 涤痰汤缓解模型大鼠的脂代谢紊乱 |
| 5 涤痰汤减轻模型大鼠的氧化应激损伤 |
| 实验二 涤痰汤对痰浊证老年MCI模型大鼠突触可塑性的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 结果 |
| 1 Nissl染色 |
| 2 Golgi染色 |
| 3 电生理LTP检测 |
| 4 Western blot检测突触相关蛋白表达水平 |
| 讨论 |
| 1 学习记忆与突触可塑性 |
| 2 涤痰汤对模型大鼠海马突触结构可塑性的影响 |
| 3 涤痰汤对模型大鼠海马组织LTP的作用 |
| 4 涤痰汤对模型大鼠海马突触相关蛋白SYP、PSD95、NR2B表达的影响 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 中医药治疗轻度认知功能障碍的研究现状 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间参与科研情况 |
| 致谢 |
（9）辛伐他汀对认知功能的影响及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 SV对认知功能和海马突触可塑性的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 SV对谷氨酸NMDA/AMPA受体的影响及其分子机制 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 SV对α7nCh受体的影响及其分子机制 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写及中英文全名对照表 |
| 攻读学位期间发表文章 |
| 致谢 |
（10）NMDA受体与中枢神经系统退行性疾病（论文提纲范文）
| 1. N- 甲基-D- 天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA) 受体概述 |
| 2. NMDA受体与中枢神经系统退行性疾病 |
| 2.1 NMDA受体与PD |
| 2.2 NMDA受体与AD |
| 2.3 NMDA受体与HD |
| 2.4 NMDA受体与ALS |
| 3. 总结 |
四、脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响（论文参考文献）
- [1]通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究[D]. 张丹丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [2]钩藤碱对氧糖剥夺星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达的影响[D]. 李凤萍. 南昌大学, 2020(08)
- [3]电针对4月龄APP/PS1转基因鼠海马突触可塑性相关蛋白的影响[D]. 杨光. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制[D]. 吴东南. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [5]APP/PS1/Tau三转基因小鼠中Aβ寡聚体以及Tau蛋白年龄相关性改变的研究[D]. 朱昆. 中国医科大学, 2021(02)
- [6]低浓度1,2-二氯乙烷亚慢性暴露对小鼠海马谷氨酸代谢的影响及其机制研究[D]. 李坤阳. 中国医科大学, 2020(01)
- [7]从“肾脑相关”论衰老学习记忆功能减退的脑功能失衡机制[D]. 韩诚. 山东中医药大学, 2019(05)
- [8]涤痰汤改善痰浊证老年MCI模型大鼠学习记忆及突触可塑性的研究[D]. 彭静. 湖北中医药大学, 2019(08)
- [9]辛伐他汀对认知功能的影响及其分子机制研究[D]. 陈婷婷. 南京医科大学, 2018(12)
- [10]NMDA受体与中枢神经系统退行性疾病[J]. 张海红. 神经药理学报, 2015(02)