一、CD44分子生物学特性及与肿瘤关系的研究进展（论文文献综述）
郭隽馥,李乡南,马天驰,苗兰英[1]（2022）在《miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响》文中研究指明背景:miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调,主要发挥抑癌作用。现已证实,miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而,目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少,机制尚不明确。目的:探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。方法:以胃癌细胞株SGC-7901为模型,用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞,转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平,采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力,流式细胞术检测CD24+CD44+细胞亚群比例。结果与结论:（1）与inhibitor NC或NC组比较,转染miR-7-5p inhibitor或mimics后,胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显着降低或升高（P <0.01）;（2）与NC组比较,miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂集落形成数量明显减少（P <0.05,P <0.01）,而miR-7-5p inhibitor组成球数量和集落形成数量则明显高于miR-7-5p inhibitor NC组（P <0.05,P <0.01）;（3）miR-7-5p mimics组CD24+CD44+细胞比例明显低于NC组（P <0.01）,而miR-7-5p inhibitor组CD24+CD44+细胞的比例显着高于inhibitor NC组（P <0.01）;（4）miR-7-5p mimics组Nanog和Sox2 mRNA表达明显低于NC组,miR-7-5p inhibitor组Nanog和Sox2 mRNA表达显着高于inhibitor NC组（P <0.05,P <0.01）;（5）结果表明,miR-7-5p可以通过减弱胃癌细胞的成球能力、软琼脂集落形成能力以及降低胃癌细胞中CD24+CD44+细胞亚群比例等方式抑制胃癌细胞的干样特性,其机制可能与调控干性相关基因Nanog和Sox2的表达有关。
胡晓妍,李冠武[2]（2021）在《基于糖基化抑制和诱导内质网应激的衣霉素抗肿瘤耐药研究进展》文中进行了进一步梳理异常糖基化和细胞内质网应激与肿瘤的发生发展密切相关.证据表明,衣霉素通过表皮生长因子受体信号通路、蛋白激酶B/核转录因子-κB信号通路、信号转导及转录激活因子3、CD44分子等途径,抑制N-糖基化和诱导内质网应激,阻滞肿瘤发展,有可能逆转肿瘤细胞对紫杉醇、曲妥珠单抗、顺铂的耐药性,并增强多种肿瘤的治疗敏感性.衣霉素还可能诱导肿瘤细胞自噬,促进细胞凋亡.研究衣霉素的糖基化抑制和内质网应激的诱导作用,有助于揭示其抗肿瘤特性的潜在机制,为治疗难治性肿瘤提供新思路.本文就衣霉素抗肿瘤耐药的最新研究进展作一综述.
高嫦娥[3]（2021）在《PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及其体内安全性评价的临床前研究》文中研究说明研究背景与目的靶向T细胞抑制性检测点肿瘤免疫治疗是当今生物医学研究的最热点。研究表明,利用单抗药物直接作用于PD-1可以有效地阻断抑制性免疫检测点,激活T细胞,增强T细胞的功能,达到治疗肿瘤的目的。在机体的免疫系统中,肠道由于接触抗原的表面积最大并且免疫细胞数量较多,因而被认为是体内最大的免疫器官[1],发生于结直肠的恶性肿瘤与免疫逃逸有关。本研究利用CRISPR/Cas9技术对T细胞PD-1基因进行靶向敲除,采用小鼠结肠癌模型进行PD-1基因敲除的T细胞的体内抗肿瘤作用及其可能机制研究,采用非人灵长类动物食蟹猴作为实验动物,高度模拟PD-1基因敲除T细胞在体内的安全性评价,以期建立利用CRISPR/Cas9技术靶向T细胞PD-1基因进行肿瘤细胞免疫治疗的策略,进而为临床研究的实施奠定坚实的实验基础。第一章:小鼠PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及其机制研究第一部分:小鼠PD-1基因敲除T细胞的建立及其体外抑制肿瘤的作用[方法]在GENEBANK数据库中查找获得小鼠PD-1基因序列,设计靶向小鼠PD-1基因的sgRNA,构建靶向PD-1基因的PX458敲除载体,经扩增、酶切鉴定及测序验证,获得正确的CRISPR/Cas9-sgRNA表达载体。分离获得小鼠外周血PBMC,富集细胞数量为1×107,加入敲除PD-1基因的PX458敲除载体5μg,采用Lonza-4D电转仪进行电转染,48h后检测转染效率,采用PCR技术和T7E1酶切验证PD-1基因的敲除。体外培养结直肠癌细胞株CT-26,分为:阴性对照组:CT-26细胞组、PD-1基因敲除T细胞组,实验组:CT-26与PD-1基因敲除T细胞共培养组,CT-26与未经PD-1基因敲除的T细胞及PD-1单抗共培养组。绘制各组细胞生长曲线,细胞杀伤检测试剂盒检测PD-1基因敲除的T细胞的杀伤能力,通过流式细胞术检测T淋巴细胞亚群比例的变化及体外分泌细胞因子的水平变化。[结果]成功获得了靶向小鼠PD-1基因敲除的sgRNA,构建靶向小鼠PD-1基因sgRNA/Cas9表达载体,建立小鼠PD-1基因敲除T细胞,对其体外特性进行检测,结果显示:流式细胞仪检测PD-1基因敲除T细胞CD3、CD4、CD8比例无明显变化;PD-1基因敲除T细胞与结直肠癌细胞株CT-26在不同效靶比作用下体外抑制肿瘤效应结果显示:各组细胞生长曲线示:与其他两组相比,CT-26与PD-1基因敲除T细胞共培养组,CT-26与未经PD-1基因敲除T细胞及PD-1单抗共培养组,72小时细胞活率明显下降,与其他两组相比,CT-26与PD-1基因敲除T细胞共培养组,CT-26与PD-1基因敲除T细胞及PD-1单抗共培养组,与肿瘤细胞共培养后:IFN-γ、TNF-α、IL-2的水平增加。[结论]建立了稳定的体外定向敲除T细胞抑制性免疫检测点PD-1的技术,获得了小鼠同种异体PD-1基因敲除T细胞,体外实验显示,可抑制肿瘤细胞的生长,为体内抗肿瘤的研究奠定了基础。第二部分:小鼠PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及可能机制[方法]培养结直肠癌细胞株CT-26,制备小鼠结直肠癌移植瘤模型;实验分组分别为模型对照组（经尾静脉注射PBS）、阴性对照组（经尾静脉注射未经基因敲除的T细胞）、PD-1基因敲除T细胞组（经尾静脉注射PD-1基因敲除的T细胞）、PD-1单抗组（经尾静脉注射PD-1单抗）,观察结直肠癌移植瘤模型中各组小鼠体重,活动度,生存期等,绘制小鼠生存率曲线;处死各组中小鼠,分别取肝,肺和肠等组织进行病理学分析;分离MLNs、脾脏淋巴细胞,采用流式细胞仪检测MLNs、脾脏CD4+,CD8+T细胞,Treg细胞比例,ELISA法检测MLNs、血清中肿瘤免疫相关细胞因子的分泌水平变化。[结果]与模型对照组相比较,同种异体PD-1基因敲除T细胞可抑制结直肠癌荷瘤小鼠原位移植瘤的生长及向肝脏和肺部的转移,延长了小鼠的存活时间。PD-1基因敲除T细胞回输结直肠荷瘤小鼠,ELISA结果显示,与同模型对照组、阴性对照组相比较,PD-1基因敲除T细胞回输组MLNs和血清中IFN-y,TNF-α和IL-12的水平增加,IL-6无明显变化,IL-17水平减少。在结直肠癌小鼠PD-1基因敲除T细胞回输后,PD-1敲除组小鼠的CD44+CD62L-记忆T细胞比例明显提升,CD4+FoxP3+调节性T细胞比例降低。[结论]同种异体PD-1基因敲除T细胞在结直肠癌中显示出体内抑制肿瘤转移的作用,且可能通过依赖CD8+T细胞在结直肠癌中发挥抗肿瘤作用。第二章:食蟹猴PD-1基因敲除T细胞体内安全性评价第一部分:食蟹猴PD-1基因敲除T细胞的建立及其生物学特性[方法]在GENEBANK数据库中搜索食蟹猴PD-1基因序列,设计靶向食蟹猴PD-1基因的sgRNA,构建靶向PD-1基因的PX458敲除载体,经扩增、酶切鉴定及测序验证,获得正确的sgRNA表达载体;分离培养食蟹猴PBMC,采用Lonza-4D电转仪进行电转染,48h后检测转染效率,采用PCR技术及T7E1酶切鉴定PD-1基因的敲除。在细胞因子刺激下诱导食蟹猴T细胞增殖,定期观察细胞形态变化及集落形成并计数,绘制食蟹猴PD-1基因敲除T细胞生长曲线,FACS检测食蟹猴PD-1基因敲除T细胞周期、凋亡,CCK-8法检测食蟹猴PD-1基因敲除T细胞增殖,以及食蟹猴PD-1基因敲除T细胞表面特征分子的表达,通过ELISA法检测食蟹猴PD-1基因敲除T细胞分泌的IFN-γ、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2水平。[结果]成功获得了靶向食蟹猴PD-1基因敲除的sgRNA,构建靶向食蟹猴PD-1基因的敲除重组表达载体sgRNA/Cas9,成功培养了食蟹猴PD-1基因敲除的T细胞,细胞生长周期为28天,生长曲线呈S形,符合Logistic生长曲线。CCK-8法检测结果显示,与未经敲除PD-1基因的T细胞相比较,PD-1基因敲除的T细胞增殖未受到抑制,生长曲线基本与未经敲除PD-1基因的T细胞相同;流式细胞仪检测T细胞表型无改变,具有杀伤性作用的CD8+T细胞所占比例有所升高;细胞周期及凋亡检测结果显示:与未经敲除PD-1基因的T细胞相比较,PD-1基因敲除的T细胞G0/G1期,S期,G2/M期比例两者无统计学差异,早期凋亡、死亡细胞比例两者无统计学差异。ELISA法对细胞因子IFN-γ、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2进行检测,结果显示:PD-1基因敲除的T细胞释放细胞因子与相同培养条件下,未进行PD-1敲除的T细胞释放细胞因子量统计学无差异。[结论]抑制性检查点基因PD-1的破坏导致PD-1表达的降低,但在体外培养期间不影响PD-1基因敲除T细胞的活力、PD-1基因敲除T细胞特征标志物的表达、PD-1基因敲除T细胞凋亡和PD-1基因敲除T细胞周期,且扩增的PD-1基因敲除T细胞也不影响具有细胞因子表达的能力,为其体内安全性评价奠定基础。第二部分:食蟹猴PD-1基因敲除T细胞体内安全性评价[方法]多次富集PD-1基因敲除T细胞后,经静脉回输入食蟹猴体内,参照人细胞因子诱导的淋巴细胞回输有效剂量（2×107/kg）,溶解于100ml 0.9%氯化钠注射液中,对照组经静脉注射100ml/（kg·次）0.9%氯化钠注射液,每3d上午同一时间给药1次,共给药3次,分别在回输后4h,24h,48h,1w,2w,3w,4w直到100天抽取外周血,流式细胞仪检测CD3,PD-1的表达,观察各组食蟹猴体重,活动度等一般情况,监测血常规、血生化,ELISA法检测各组食蟹猴Th1:IL-2、IL-12、IFN-γ;Th2:IL-4、IL-10;炎症细胞因子:TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子水平的变化,并分别取肝、肺、骨髓、脾脏、胸腺、甲状腺、垂体、肾上腺、睾丸等组织进行病理学分析,观察其毒性反应。[结果]将PD-1基因敲除的T细胞回输到食蟹猴体内,PD-1基因敲除的T细胞未显示出对其体重、活动度等一般情况的影响,血液学检查指标:白细胞数、单核细胞数与对照组相比,均未出现明显变化;生化学检查指标:总蛋白、白蛋白、球蛋白、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、谷草转移酶、谷丙转移酶、尿素氮、肌酐等与对照组相比,均未出现明显变化;组织病理学分析显示没有与输注的PD-1基因敲除T细胞相关的损伤;流式细胞术监测外周血中PD-1基因敲除的T细胞的体内持久性为两个月。[结论]我们的研究结果证明了食蟹猴用于评估PD-1基因敲除T细胞免疫治疗安全性的效用,并为基于T细胞的过继免疫治疗提供了新的策略。
张楠,白素杭,张富涵,史梦然,王璐瑶,王磊,许立达,杨昭,喻长远[4]（2021）在《肝癌干细胞分子标志物和干性维持机制研究进展》文中指出原发性肝癌是一种发生在肝脏的侵袭性肿瘤,具有极易发生转移和复发的特点。原发性肝癌主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌、混合肝细胞胆管癌和纤维板层型肝细胞癌等。目前,手术切除、放射性和化学治疗仍是肝癌治疗的主要手段,但其特异性差、临床效果有限,肝癌患者5年总生存率仅为18%。肝癌干细胞是存在于肝癌组织中特定的细胞亚群,具有自我更新能力和强致瘤性,驱动肝癌起始、转移、耐药和复发。因此,肝癌干细胞分子标志物的鉴定及其干性维持机制的阐明,不仅能够揭示肝癌发病的分子机理,也为肝癌的分子分型、预后评估和靶向治疗奠定了理论基础。最新研究表明,5-氟尿嘧啶与CD13抑制剂联合使用,能够抑制CD13+肝癌干细胞的增殖,从而减少肿瘤体积。因此,肝癌干细胞是非常有前景的治疗靶标。文中将从分子标志物、干性维持机制及靶向治疗方面总结肝癌干细胞的最新进展。
张海见,米拉·也尔兰,冷晓玲[5]（2021）在《乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的相关性》文中研究表明目的探讨乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的相关性及其意义。方法选择在我院行乳腺癌手术的患者组织标本98例,分析每位患者对应的乳腺超声征象,包括肿块周边是否有毛刺、边缘是否有高回声晕、纵横比、后方回声情况、微小钙化、内部血流显像分级;并采用免疫组化方法检测组织样本中CD24、CD44、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin的表达情况,分析其与超声表现的相关性。分析其它可能影响肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达的因素;对肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达相关性进行多因素logistic回归分析。结果肿瘤周边是否有毛刺与CD44、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）。肿块边缘是否有高回声晕与CD44和E-cadherin的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）。肿块纵横比、后方回声变化均与E-cadherin的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）。血流分级、腺体类型与CD44的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）。腺体背景类型是CD24表达的独立相关因素（P<0.05）。血流情况、雌孕激素受体表达情况是CD44表达的独立相关因素（P<0.05）。有无高回声晕、肿块后方回声特征、腋窝淋巴结是否有转移是E-cadherin表达的独立相关因素（P<0.05）。临床分期是N-cadherin表达的独立相关因素（P<0.05）。边缘有无毛刺是β-catenin表达的独立相关因素（P<0.05）。结论乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达之间存在联系,超声征象可作为无创性预测乳腺癌患者肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的方式,并可为预测乳腺癌潜在的侵袭能力提供更多依据。
李晓梅[6]（2021）在《盐酸青藤碱抑制乳腺癌干细胞干性及其机制的研究》文中进行了进一步梳理目的:盐酸青藤碱（Sinomenine hydrochloride,SIN）已被证明具有抗乳腺癌的作用,但它是否可针对乳腺癌干细胞（Breast cancer stem cells,BCSCs）发挥抗癌作用尚不清楚。本研究主要探讨SIN对BCSCs干性的影响及其作用机制。方法:1.通过CCK8测定SIN作用于MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的IC50浓度。随后通过CCK8、克隆形成、FACS分析、免疫染色以及real-time PCR检测了IC50浓度的SIN对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖能力、BCSCs比率以及肿瘤干细胞相关基因表达的影响。2.通过FACS分选的方法,从MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中富集CD44+/CD24-BCSCs,通过CCK8、克隆形成以及成球实验评价了SIN对BCSCs干性特征的影响。3.通过real-time PCR,Western blot以及免疫染色检测了SIN对BCSCs中WNT信号通路的影响。然后,通过慢病毒载体构建了WNT10B过表达和敲减的BCSCs株,进一步研究了WNT10B对BCSCs干性的影响以及SIN是否通过WNT10B调控BCSCs的干性特征。4.通过MDA-MB-231 BCSCs异种移植瘤模型评价了SIN在体内对肿瘤干细胞的作用以及对WNT信号通路的影响。结果:1.SIN作用于MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的IC50浓度分别为2.3 m M和2.0m M。IC50浓度的SIN抑制了乳腺癌细胞增殖能力、降低了CD44+/CD24-BCSCs比率和肿瘤干细胞相关基因表达水平。2.SIN明显抑制通过流式细胞仪富集的CD44+/CD24-BCSCs的干性特征,如降低了BCSCs的增殖、成球、克隆形成能力,同时下调了BCSCs干性相关基因的表达水平。3.SIN显着抑制了CD44+/CD24-BCSCs中WNT信号通路的活性,其中WNT10B及其下游靶基因的表达抑制尤为明显。当BCSCs中WNT10B被敲减后,BCSCs的自我更新能力和相关干性基因的表达受到明显抑制,说明WNT10B参与了BCSCs的自我更新。而当WNT10B过表达后,SIN对BCSCs干性的抑制作用被阻断,说明SIN通过下调WNT10B抑制BCSCs的干性特征。4.SIN在体内明显抑制了MDA-MB-231 BCSCs异种移植瘤的生长,并诱导细胞凋亡,同时也显着下降了瘤体内的肿瘤干细胞相关基因以及WNT信号通路蛋白的表达。结论:SIN通过负调控WNT10B的表达抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制CD44+/CD24-BCSCs增殖与干细胞样特性。
马敏星[7]（2021）在《核心岩藻糖基转移酶FUT8在乳腺癌中的分子调控机制研究》文中研究指明糖基化参与癌症的许多基本分子和细胞生物学过程。其中,核心岩藻糖基化与各种癌症之间存在许多联系。目前研究发现只有一种糖基转移酶（FUT8）能催化核心岩藻糖基化。本论文首先收集参考文献和GEO数据,进行了系统的综述和荟萃分析,以阐明FUT8与恶性肿瘤的临床病理特征和生存之间的关系。接着,论文以乳腺癌为模型,对miR-10b将FUT8表达进行调控的具体机制进行探究,最终结果如下:1.使用荟萃分析发现,FUT8与某些恶性肿瘤类型和患者生存率的临床病理特征有关。首先,我们系统地鉴定了7篇文章和35个微阵列数据集（涉及6124例患者和10种肿瘤类型）以纳入荟萃分析。结果表明,FUT8表达与一种或多种临床病理参数具有显着相关性。这些参数包括患者的性别,分子亚组,组织学等级,TNM分期,雌激素受体,孕激素受体和复发状态等。其次,还发现FUT8表达水平与非小细胞肺癌,乳腺癌,弥漫性大B细胞淋巴瘤,胃癌和神经胶质瘤的总体存活率相关。FUT8表达还与非小细胞肺癌,乳腺癌和结直肠癌的无病生存率以及胰腺导管腺癌的无复发生存率相关。2.利用生物信息学方法发现大多数癌症中,FUT8在癌组织中的表达相较配对正常组织明显上调,并且乳腺癌中FUT8的表达明显高于其他岩藻糖基转移酶。其次,组织芯片和临床样本染色结果显示乳腺癌组织中FUT8的表达较正常乳腺组织为高。通过实验发现过表达FUT8能促进细胞迁移和EMT过程,而干扰FUT8的表达能抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭。3.利用体内和体外实验证明MDA-MB-231细胞中FUT8的敲低使癌细胞对阿霉素更敏感。敲低FUT8表达可减少乳腺癌细胞增殖,并增加细胞凋亡。FUT8敲低的MDA-MB-231细胞中CD44+/CD24-的干性细胞比例减少。最后,在肿瘤干细胞多次成球传代后发现:FUT8敲低的MDA-MB-231细胞成球数目明显低于FUT8表达正常组,由此可判断出此基因表达和肿瘤干细胞自我更新存在相关性。4.预测发现AP-2γ是miR-10b的生物学靶基因。利用TCGA数据库研究结果发现乳腺癌中AP-2γ低表达,而正常乳腺组织中则表达水平高;AP-2γ高表达可抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭。通过小鼠实验发现过表达AP-2γ可以抑制癌细胞FUT8表达,并且可以抑制肿瘤生长和转移。miR-10b可结合在AP-2γ的3’UTR区进而阻碍其表达。5.通过Pathway Commons预测AP-2γ可以通过STAT3/p-STAT3间接调节FUT8。过表达AP-2γ后,FUT8和p-STAT3表达显着降低;并且随着乳腺癌细胞中STAT3的磷酸化水平被逐渐抑制,FUT8的表达量逐渐下降。利用免疫共沉淀实验发现AP-2γ与STAT3间的结合更加牢固,而AP-2γ与p-STAT3之间的结合较弱。染色质免疫沉淀技术结果显示p-STAT3和FUT8启动子区域存在结合。最终发现miR-10b/TFAP2C/p-STAT3/FUT8的新型调控通路在乳腺癌中,尤其是三阴型乳腺癌中,通过调控FUT8表达,进而影响乳腺癌的增殖和转移。
黄磊[8]（2021）在《脐带间充质干细胞及其外泌因子干预白消安致雄性小鼠生殖损伤的实验研究》文中认为目的:探讨人脐带间充质干细胞及其人脐带间充质干细胞分泌因子注射对白消安导致的无精子症模型小鼠的治疗作用。方法:1.人脐带间充质干细胞（HUMSCs）的分离主要采用组织贴壁法获得,将分离的人脐带间充质干细胞进行成骨、成脂诱导分化和细胞表面标记物的鉴定;2.收集第四代HUMSCs体外培养无血清培养基的上清液,经过0.22μm滤器超滤得到浓缩HUMSCs分泌因子（条件培养基,CM）记为HUMSCs-CM;3.将40 mg/kg剂量白消安注射入雄性BALB/C小鼠腹腔中,对照组为生理盐水组。在注射白消安的第4周末,通过苏木素-伊红（HE）染色,观察生精小管的结构;通过荧光定量PCR检测减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3、DDX4、OCT4 mRNA相对表达量;通过蛋白质印迹实验（western-blot）检测睾丸生殖细胞之间黏附蛋白P-钙黏蛋白（P-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、细胞间黏附分子（ICAM-1）的表达;4.将40 mg/kg剂量白消安注射入雄性BALB/C小鼠腹腔中的4周末,随机分为4组:生理盐水组、白消安（busulfan）组、HUMSCs组、HUMSCs-CM组。HUMSCs组和HUMSCs-CM组通过尾静脉分别注射HUMSCs悬液200μl（1×107细胞）和HUMSCs-CM 200μl,按照每3天注射1次的频率进行尾静脉注射,连续注射4周。第8周末,通过睾丸组织苏木素-伊红（HE）染色,观察生精小管的结构;通过实时荧光定量聚合酶链反应（q PCR）来检测STRA8、TNP2、SCP3减数分裂基因mRNA相对表达量;通过蛋白质印迹实验（western-blot）检测睾丸细胞黏附蛋白P-钙黏蛋白（P-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、细胞间黏附分子（ICAM-1）的表达。结果:1.原代的HUMSCs使用组织贴壁法分离培养获得,将原代的HUMSCs利用胰酶消化法传代至第4代。镜下观察细胞排列紧密,细胞形态多样,以梭形、椭圆形为主。HUMSCs表面标记物CD90、CD44、CD45、CD29的阳性率分别为99.66%、97.40%、0.10%、94.47%。通过茜素红和油红O对成骨、成脂诱导的细胞进行染色,HUMSCs可以成功分化为钙盐颗粒和脂肪细胞;2.对HUMSCs进行体外无血清F12/DMEM培养基的培养,并收集了上清培养液HUMSCs-CM,测定蛋白浓度为0.60 mg/ml;3.将40 mg/kg剂量白消安注射到小鼠腹腔内,第4周末通过HE染色观察小鼠睾丸生精小管结构,小鼠生精小管中各级生精细胞减少严重,精子活动度减低。基底膜与生精细胞出现断层、分离,生精小管中精原细胞和支持细胞减少严重,精原细胞和精母细胞呈现空泡化;4.第4周末,白消安组（busulfan组）与对照组比较,睾丸中生精细胞减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3、DDX4、OCT4基因表达明显降低（P均<0.01）;白消安组的细胞黏附相关蛋白N-cadherin、P-cadherin、ICAM-1表达量明显低于对照组蛋白表达量（P均<0.01）;5.第8周末,通过睾丸组织HE染色,HUMSCs-CM组与白消安组和HUMSCs组比较,基底膜与生精细胞分离和细胞空泡化情况有所改善,生精小管中各级生殖细胞大量存在;6.与白消安组比较,HUMSCs-CM组生精细胞减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3的表达水平均有增加（P均<0.01）,而HUMSCs组减数分裂基因的表达水平没有明显增加;与HUMSCs组相比,HUMSCs-CM组生精细胞减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3的表达水平均有增加（P均<0.05）;7.HUMSCs-CM组与白消安组相比,小鼠睾丸生殖细胞之间的黏附相关蛋白N-cadherin、P-cadherin、ICAM-1表达水平均有增加（P均<0.01）。而HUMSCs组与白消安组相比,细胞黏附相关蛋白N-cadherin、P-cadherin表达水平没有显着的增加,但是HUMSCs组与白消安组相比,ICAM-1蛋白表达量有增加（P<0.05）。结论:1.使用组织贴壁法和胰酶消化法可以成功分离HUMSCs;2.HUMSCs使用无血清F12/DMEM培养基培养,收集上清液并用0.22μm的滤器超滤得到浓缩HUMSCs分泌因子;3.腹腔注射白消安抑制了减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3、DDX4、OCT4的表达和细胞粘附相关蛋白N-cadherin、P-cadherin、ICAM-1的表达,导致了小鼠生精损伤;4.HUMSCs分泌因子保护了白消安导致的生精损伤小鼠,促进了生精细胞减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3和细胞粘附相关蛋白N-cadherin、P-cadherin、ICAM-1的表达。
亓润智[9]（2021）在《基于肿瘤细胞外泌体调控TAM细胞极化探讨双参颗粒抑制肺癌的作用机制》文中研究指明研究背景肺癌在我国及世界范围内的发病率、死亡率均居前列。尽管越来越多的肺癌被早期诊断和治疗,新的免疫治疗药物不断问世,放射治疗技术得到不断提升,肺癌患者的总生存时间仍没有得到明显延长,生活质量没有得到明显改善。ⅠA期肺癌患者的5年生存率为83%,ⅢA期患者仅为36%,晚期肺癌患者5年生存率仅3.5%。肺癌的整体中位生存期仍未突破1年。如何减少早期肺癌患者术后复发转移,延长晚期肺癌患者生存期,抑制肺癌进展仍然是目前亟待解决的医学难题。随着大量临床研究证实中医药防治肺癌的有效性,以及基础实验研究对中医药防治肺癌的机制探讨不断深入,中医药在肺癌防治中的地位也逐渐上升。越来越多的研究发现中医药防治肺癌的机制可能与调控肿瘤微环境密切相关。肺癌属中医学“肺积”范畴。《医宗必读》中提到:“积之成也,正气不足,而后邪气踞之”。邪之所凑,其气必虚,正气亏虚则气血阴阳失和,脏腑机能紊乱,气机升降失调。随着中医肿瘤理论的发展,“正虚”是肺癌重要的发病基础已逐渐成为中医肿瘤学术界的共识。肺癌的病机多为虚实夹杂,虚证常见阴虚或气阴两虚,实证多见气滞、痰凝及血瘀,病位在肺,与脾、肾密切相关。气阴两虚、瘀血内阻是肺癌形成与进展的重要因素。肺为娇脏,易受外邪,伤及肺气与肺阴,肺主气功能受损,一身之气不足则邪毒内盛,气不行血、癌毒阻络,则见瘀血内停,瘀毒互结,逐渐形成癌肿。益气养阴活血法是防治肺癌的重要治法之一。双参颗粒由三七、西洋参、冬虫夏草组成,三七活血化瘀兼能补血;西洋参健脾益气而不燥,并能养阴生津;冬虫夏草补益肺肾。三药共奏益气健脾养阴、补益肺肾、金水相生之效,扶正以治本,活血化瘀以治标。临床研究也证明,益气养阴活血法是中医药防治肺癌的重要治法,在临床应用广泛并取得良好疗效。但由于中医临床证候的复杂性,以及中医辨证论治处方的多样性,使中医“益气养阴活血法”防治肺癌的理论未能在细胞分子层面得到很好的验证。我们前期预实验发现双参颗粒可以抑制荷Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长,减少自发肺癌小鼠模型肺部肿瘤形成。同时,对双参颗粒干预后的自发肺癌小鼠与未经过双参颗粒干预的小鼠肺组织进行全转录组测序分析。结果提示在经过双参颗粒干预后,巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）,巨噬细胞标志蛋白（MannosereceptorCtype 1,MRC1/CD206）,含锌指转录因子（Kruppel-like factors,KLF）家族如 KLF4、KLF2,基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）家族,以及非编码 RNA（Non-coding RNA）如microRNA-34a（miR-34a）、microRNA-21（miR-21）的表达以及外泌体相关基因表达存在差异。这些差异基因都与肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）表型、功能调控以及外泌体功能密切相关,基于TAMs极化在调控肿瘤微环境影响肿瘤生长中的重要作用,我们从TAMs与肿瘤细胞外泌体入手,探讨双参颗粒抑制荷Lewis肺癌的作用是否与肿瘤细胞外泌体调控TAMs表型和功能相关。研究目的本研究拟通过体内实验与体外实验,借助分子生物学技术,探明双参颗粒抑制肿瘤生长是否与肺癌细胞外泌体调控TAMs表型与功能相关,以及初步探讨双参颗粒通过外泌体影响TAMs极化的机制是否与MIF-miR-34a-KLF4通路相关,为中医药“益气养阴活血法”防治肺癌提供客观依据。研究方法1.构建荷Lewis肺癌小鼠模型,以高、中、低三个剂量的双参颗粒对荷Lewis肺癌小鼠进行干预,观察各组小鼠移植瘤的体积、移植瘤质量,验证以益气养阴活血为治法的双参颗粒对小鼠肺癌的抑制作用。2.通过流式细胞术、免疫荧光染色法,分别对小鼠脾脏、移植瘤组织的M1型与M2型TAMs进行检测,观察双参颗粒对TAMs表型的影响。3.通过Lewis与M1型巨噬细胞混合皮下接瘤的方法,构建M1型TAMs过表达的小鼠肺癌移植瘤模型。观察移植瘤体积与质量,并通过流式细胞术检测小鼠M1型TAMs比例、M2型TAMs比例;免疫组织化学染色检测M1型TAMs标志蛋白一氧化氮合酶（inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS）表达;Western Blot法检测肿瘤组织中精氨酸酶1（Arginase-1,ARG1）、iNOS的表达,探讨双参颗粒抑制Lewis肺癌的作用与TAMs极化的相关性。4.通过流式细胞术、Western Blot法检测小鼠体内调节性T细胞（Regulatory T cells,Tregs）比例、记忆T细胞比例,肿瘤组织中转化生长因子-β（Transforming growth factor-β,TGF-β）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、MMP-9、MIF的表达,探讨双参颗粒调控肿瘤微环境,调节TAMs功能与调控TAMs极化的相关性。5.构建MIF+/+Lewis稳定转染细胞株、shMIF Lewis稳定转染细胞株,通过双参颗粒含药血清的干预,观察双参颗粒对小鼠肺癌细胞MIF表达的影响。6.提取各组肺癌细胞外泌体,qPCR法检测外泌体中miR-34a表达,观察双参颗粒对Lewis细胞来源外泌体中MIF下游靶基因miR-34a的影响,探讨双参颗粒是否通过影响MIF调节外泌体miR-34a的表达。7.收集双参颗粒干预后的MIF+/+Lewis细胞、MIF+/+Lewis细胞、Lewis细胞、shMIF Lewis细胞来源外泌体;并将各组外泌体对巨噬细胞进行干预,观察各组外泌体对巨噬细胞表型的影响,探讨双参颗粒能否通过肺癌细胞来源外泌体影响巨噬细胞极化,以及这一作用与MIF的关系。8.观察各组肺癌细胞外泌体干预后的巨噬细胞中KLF4基因的表达;探讨经双参颗粒干预后的肺癌细胞外泌体影响巨噬细胞极化与功能的作用是否与MIF-miR-34a-KLF4 通路相关。研究结果1.经双参颗粒干预后,荷Lewis肺癌小鼠移植瘤体积与质量减小,随着双参颗粒剂量的增加,其抑制肿瘤体积与质量的作用逐渐增强,高剂量双参颗粒对肿瘤体积与质量的抑制作用最强。2.高、中、低三个剂量的双参颗粒均能减少小鼠脾脏M2型TAMs 比例,增加M1型TAMs比例,但双参颗粒抑制M2型TAMs比例的作用未表现出与双参颗粒剂量有明确负相关。小鼠脾脏M1型TAMs 比例与双参颗粒剂量呈正相关,随双参颗粒剂量增大M1型TAMs比例逐渐增加。移植瘤组织中CD86的表达与双参颗粒的剂量呈正相关,CD206的表达与双参颗粒的剂量呈负相关。3.与经典的荷Lewis肺癌小鼠模型比较,荷Lewis+M1混合移植瘤小鼠模型的肿瘤体积减小,脾脏M1型TAMs比例明显升高。双参颗粒对Lewis+M1混合移植瘤小鼠模型进行干预后,M1型TAMs 比例增加,小鼠肿瘤体积进一步减小,提示双参颗粒抑制Lewis肺癌的作用可能与增加M1型TAMs比例相关。4.双参颗粒可以减少荷Lewis+M1混合移植瘤小鼠肿瘤组织中肿瘤微环境因子 ARG1、TGF-β、MMP-9、VEGF、MIF 的表达,增加 iNOS 的表达。5.双参颗粒能够增加CD8+中枢性记忆T细胞比例,并且与M1型TAMs 比例呈正比;降低CD8+效应性记忆T细胞比例,与M1型TAMs比例呈反比。同时,双参颗粒可以增加CD4+CD25+T细胞比例,减少CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例。6.通过慢病毒稳定转染细胞技术成功构建了 MIF+/+Lewis、shMIFLewis稳定转染肺癌细胞株,并分别在基因与蛋白水平进行了验证。7.MIF+/+Lewis细胞外泌体中miR-34a表达减少。双参颗粒含药血清在体外可以抑制MIF+/+Lewis细胞MIF蛋白与RNA的表达,同时增加MIF+/+Lewis细胞外泌体中miR-34a的表达。8.成功提取MIF+/+Lewis、shMIFLewis、Lewis细胞来源外泌体,并对巨噬细胞进行干预,成功检测到巨噬细胞吞噬外泌体过程。MIF+/+Lewis细胞来源外泌体在体外可以增加M2型巨噬细胞比例,降低M1型巨噬细胞比例;而经双参颗粒含药血清干预后的MIF+/+Lewis细胞,其外泌体能够逆转这一作用,增加M1型巨噬细胞比例。9.MIF+/+Lewis细胞外泌体在体外可以增加巨噬细胞中KLF4基因的表达;经双参颗粒含药血清干预后的MIF+/+Lewis细胞外泌体能够减少巨噬细胞KLF4基因的表达。研究结论1.双参颗粒可以抑制小鼠肺癌,其作用机制可能与调控小鼠TAMs向M1型极化相关;肺癌细胞中的MIF可能是双参颗粒的作用靶点之一。2.双参颗粒可以通过肺癌细胞来源的外泌体调控TAMs极化,其机制可能与MIF-miR-34a-KLF4 通路相关。3.中医益气养阴活血法防治肺癌的分子生物学机制可能与调节肿瘤细胞外泌体,调控TAMs极化与功能,重塑肿瘤微环境相关。
陈博[10]（2021）在《基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制》文中研究说明衰老,是机体发育成熟后,各细胞、器官和组织在形态、结构以及生理功能等方面出现的退行性变化,且是由多种因素共同作用的结果。随着世界人口老龄化和衰老相关疾病发病率的不断增长,带来的社会和经济负担也在不断加重。因此,开展衰老机制研究,开发延缓衰老的药物,降低衰老相关疾病发病率,对改善人们生活水平,提高生活质量具有重要意义。中药已有几千年的历史,具有多成分、多靶点和多功能的作用特点,在预防和治疗复杂疾病等方面具有明显的优势。经典名方“当归补血汤”出自于金代名医李东垣所着《内外伤辨惑论》,其具有多种药理活性。在以往的研究中也报道过当归补血汤的抗衰老活性,但其延缓衰老的作用机制并未见国内外文献报道。因此,本文利用网络药理学方法,从整体和系统的角度出发,预测并验证当归补血汤延缓衰老的作用机制。本文首先利用网络药理学方法建立当归补血汤的抗衰老活性预测模型,以期能减少研究的盲目性、提高研究效率,然后采用分子生物学技术验证预测模型,同时,研究当归补血汤对衰老大鼠肝肾功能、造血功能以及免疫系统的影响,将网络药理学技术与传统的分子生物学技术相结合,系统阐明并揭示当归补血汤延缓机体衰老的作用机制。（1）采用网络药理学方法预测当归补血汤延缓衰老的分子机制,分析结果表明:当归补血汤主要有槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、山奈酚等活性成分,主要作用于IL6、IL10、TNF、VEGFA、AKT1、TP53、SERPINE1、PPARG、HIF1A等靶点,通过对JAK-STAT信号通路、PI3K-AKT信号通路、TNF信号通路、TCR信号通路、VEGF信号通路和m TOR信号通路的调节,抑制衰老引发的炎症反应,并通过调节自身免疫,调控细胞周期达到延缓机体衰老的目的。（2）通过检测大鼠肝肾组织和血清中的抗氧化和脂质过氧化指标发现,当归补血汤可提高衰老大鼠肝肾组织和血清中SOD和GSH含量,降低MDA水平增强机体的抗氧化能力,减少机体的氧化损伤,从而发挥延缓衰老的作用。（3）当归补血汤对衰老大鼠肝肾功能的影响结果发现,当归补血汤可降低血清中ALT、AST以及BUN、CRE的含量,减轻肾脏炎症和纤维化,从而起到对肝肾组织的保护作用。（4）当归补血汤对衰老大鼠骨髓造血功能的影响结果发现,当归补血汤可提高衰老大鼠外周血中WBC、RBC、PLT和骨髓中BMNC细胞数目,降低大鼠骨髓Sca-1+BMNC的粘附分子CD44和CD49d的表达,促进G1期阻滞的BMNC细胞进入S期。提示当归补血汤可通过增强细胞的分裂增殖,提高机体的造血机能,起到延缓机体衰老的作用。（5）当归补血汤通过降低大鼠血清中IL-6和TNF-α的释放,提高IL-10的含量,从而减轻机体的炎症损伤;并通过降低T淋巴细胞凋亡因子Fas/Fas L的表达,抑制T淋巴细胞的凋亡从而调节机体免疫水平;还可通过对PI3K-AKT/CDKRb通路和PI3K-AKT/MDM2-p53通路中蛋白表达的调节从而调节细胞周期、细胞增殖与凋亡,进而发挥其延缓衰老的作用。
二、CD44分子生物学特性及与肿瘤关系的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、CD44分子生物学特性及与肿瘤关系的研究进展（论文提纲范文）
（1）miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 细胞培养 |
| 1.4.2 转染及转染效率检测 |
| 1.4.3 RT-q PCR检测mi R-7-5p、Nanog和Sox2 m RNA表达水平 |
| 1.4.4 成球实验 |
| 1.4.5 软琼脂集落形成实验 |
| 1.4.6 流式细胞术检测CD24+CD44+细胞亚群比例 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 转染mi R-7-5p mimics/inhibitor对人胃癌SGC-7901细胞中mi R-7-5p表达水平的影响 |
| 2.2 mi R-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞成球能力的影响 |
| 2.3 mi R-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞软琼脂集落形成能力的影响 |
| 2.4 mi R-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞中CD24+CD44+细胞比例的影响 |
| 2.5 mi R-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞中Nanog和Sox2 m RNA表达的影响 |
| 3 讨论Discussion |
（2）基于糖基化抑制和诱导内质网应激的衣霉素抗肿瘤耐药研究进展（论文提纲范文）
| 1 异常糖基化促进肿瘤发展 |
| 2 内质网应激诱导影响肿瘤发展 |
| 3 衣霉素抗肿瘤及肿瘤耐药 |
| 3.1 衣霉素通过抑制EGFR糖基化影响肿瘤细胞增殖 |
| 3.2 衣霉素通过抑制PI3K/Akt、MAPK信号通路拮抗紫杉醇和曲妥珠单抗耐药 |
| 3.3 衣霉素通过抑制PTX3糖基化拮抗顺铂耐药（Akt/NF-κB信号通路） |
| 3.4 衣霉素通过抑制CD44的糖基化阻止肿瘤细胞迁移 |
| 3.5 衣霉素通过激活STAT3促进肿瘤细胞增殖和免疫抑制 |
| 3.6 衣霉素诱导内质网应激影响肿瘤发展和耐药产生 |
| 3.7 衣霉素通过调控GRP78影响肿瘤发展和耐药产生 |
| 3.8 衣霉素促进肿瘤细胞凋亡 |
| 3.9 衣霉素通过阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖 |
| 3.1 0 衣霉素通过恢复摄碘能力增强甲状腺癌对放射性碘治疗的反应性 |
| 4 自噬调控肿瘤细胞凋亡 |
| 5 衣霉素的毒副作用 |
| 6 总结 |
（3）PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及其体内安全性评价的临床前研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 研究背景及立题依据 |
| 一、转移性结直肠癌的治疗现状及研究进展 |
| 二、靶向PD-1肿瘤细胞免疫治疗的机制及发展现状 |
| 三、大肠癌发生与肿瘤免疫治疗的关系研究进展 |
| 四、本研究的目的及意义 |
| 参考文献 |
| 第一章、小鼠PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及其机制研究 |
| 第一部分、小鼠PD-1基因敲除T细胞的建立及其体外抑制肿瘤的作用 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 本部分结果 |
| 1. 靶向PD1基因sgRNA的设计构建及鉴定 |
| 2. PCR扩增和T7E1酶切鉴定 |
| 3. PD-1基因敲除T细胞亚群比例检测 |
| 4. PD-1基因敲除T细胞体外抑制肿瘤细胞生长 |
| 5. PD-1基因敲除T细胞与CT-26细胞株共培养的体外抗肿瘤效应 |
| 6. PD-1基因敲除T细胞与CT-26细胞株共培养的体外细胞因子分泌 |
| 本部分讨论 |
| 本部分结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分、小鼠PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及可能机制 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 本部分结果 |
| 1. 结直肠癌小鼠模型中CD8~+细胞中PD-1表达显着升高 |
| 2. 小鼠结直肠癌移植瘤模型的建立 |
| 3. 小鼠CT-26结直肠癌移植瘤模型体内抗肿瘤效应 |
| 4. 小鼠CT-26结直肠癌模型体内抗肿瘤效应可能机制 |
| 本部分讨论 |
| 本部分结论 |
| 参考文献 |
| 第二章、食蟹猴PD-1基因敲除T细胞的体内安全性评价 |
| 第一部分、食蟹猴PD-1基因敲除T细胞的建立及其生物学特性 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 本部分结果 |
| 1. 食蟹猴外周血T细胞的培养 |
| 2. 食蟹猴PD-1敲除T细胞载体的构建及敲除效率的检测 |
| 3. 食蟹猴PD-1基因敲除对T细胞增殖的影响 |
| 4. 食蟹猴PD-1基因敲除对T细胞亚群的影响 |
| 5. 食蟹猴PD-1基因敲除对T细胞周期的影响 |
| 6. 食蟹猴PD-1基因敲除对T细胞死亡殖的影响 |
| 7. 食蟹猴PD-1基因敲除对T细胞细胞因子分泌的影响 |
| 8. 混合淋巴细胞反应 |
| 本部分讨论 |
| 本部分结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分、食蟹猴PD-1基因敲除T细胞的体内安全性评价 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 本部分结果 |
| 1. 食蟹猴一般情况 |
| 2. 食蟹猴PD-1基因敲除T细胞体内持续时间的检测 |
| 3. 食蟹猴PD-1基因敲除T细胞体内安全性的评价 |
| 4. PD-1基因敲除T细胞回输对食蟹猴各组织器官的影响 |
| 本部分讨论 |
| 本部分结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 PDH/PD-L1信号通路及其相关抗肿痛免疫疗法在结直肠癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）肝癌干细胞分子标志物和干性维持机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 肝癌的临床治疗 |
| 1.1 手术治疗 |
| 1.2 化学治疗 |
| 1.3 免疫治疗 |
| 1.4 临床问题 |
| 2 肝癌干细胞 |
| 2.1 分子标志物 |
| 2.1.1 CD133 |
| 2.1.2 ALDH |
| 2.1.3 CD90 |
| 2.1.4 CD44 |
| 2.1.5 CD13 |
| 2.1.6 Ep CAM |
| 2.2 干性维持机制及靶向治疗策略 |
| 2.2.1 TGF-β |
| 2.2.2 Wnt/β-catenin |
| 2.2.3 Hippo-YAP/TAZ |
| 2.2.4 Hedgehog |
| 2.2.5 Notch |
| 2.2.6 Nanog |
| 3 总结与展望 |
（5）乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的相关性（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 仪器与方法 |
| 1.2.1 超声仪器及诊断标准 |
| 1.3.2 组织样本免疫组化分析及判定标准 |
| 1.3.3 其它因素的处理 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平关系 |
| 2.2 其他影响肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达的因素 |
| 2.3 乳腺癌超声征象及其他因素与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的相关性分析 |
| 3 讨论 |
（6）盐酸青藤碱抑制乳腺癌干细胞干性及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 乳腺癌干细胞在乳腺癌发生发展中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）核心岩藻糖基转移酶FUT8在乳腺癌中的分子调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 蛋白质的糖基化修饰概述 |
| 1.2.1 蛋白质糖基化修饰分类 |
| 1.2.2 N-糖基化修饰 |
| 1.2.3 O-糖基化修饰 |
| 1.2.4 GPI锚定修饰 |
| 1.3 癌症中的糖基化 |
| 1.3.1 岩藻糖基化与癌症 |
| 1.4 核心岩藻糖基化 |
| 1.4.1 岩藻糖基化供体合成 |
| 1.4.2 核心岩藻糖基转移酶和催化机理 |
| 1.4.3 肿瘤相关生物学功能 |
| 1.5 乳腺癌 |
| 1.5.1 流行病学概述 |
| 1.5.2 乳腺癌病理简介 |
| 1.5.3 乳腺癌的分子分型 |
| 1.5.4 乳腺癌的分期 |
| 1.5.5 乳腺癌中的岩藻糖基化 |
| 1.6 MicroRNA |
| 1.6.1 MicroRNA概述 |
| 1.6.2 MicroRNA与糖基化 |
| 1.7 本课题的立题依据及主要研究内容 |
| 1.7.1 立题依据及研究意义 |
| 1.7.2 主要研究内容 |
| 第二章 FUT8表达与多种恶性肿瘤临床病理和预后相关性的系统评价及荟萃分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 文献检索策略 |
| 2.2.2 纳入与排除标准 |
| 2.2.3 文献质量评价 |
| 2.2.4 数据提取 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 文献检索与筛选结果 |
| 2.3.2 纳入研究的特征 |
| 2.3.3 FUT8 表达与各种类型恶性肿瘤临床病理特征的关系 |
| 2.3.4 FUT8 表达在各种类型恶性肿瘤生存中的预后价值 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 FUT8在乳腺癌中的表达及对细胞表型的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 TCGA数据库芯片挖掘及分析 |
| 3.2.2 乳腺癌FUTs表达芯片挖掘及分析 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要仪器 |
| 3.2.5 试剂配置 |
| 3.2.6 细胞培养相关 |
| 3.2.7 细胞构建 |
| 3.2.8 细胞及组织总蛋白提取 |
| 3.2.9 Western& Lectin Blot |
| 3.2.10 细胞表型相关 |
| 3.2.11 免疫组化和免疫荧光染色 |
| 3.2.12 统计分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 乳腺癌组织中FUT8 表达的生物信息学分析 |
| 3.3.2 乳腺癌组织中FUT8表达变化 |
| 3.3.3 FUT8 在临床组织及细胞中的表达对比 |
| 3.3.4 FUT8对MCF10A细胞运动和增殖能力的影响 |
| 3.3.5 FUT8 对乳腺癌细胞恶性行为的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 FUT8表达对乳腺癌化疗敏感性及癌细胞干性影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂和材料 |
| 4.2.2 主要设备 |
| 4.2.3 试剂配制 |
| 4.2.4 MTS检测细胞增殖 |
| 4.2.5 小鼠皮下成瘤实验 |
| 4.2.6 免疫组织化学染色 |
| 4.2.7 组织凋亡TUNEL染色 |
| 4.2.8 流式细胞仪检测CD44~+/CD24~-肿瘤细胞 |
| 4.2.9 肿瘤干细胞成球培养 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 干扰FUT8 表达促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞化疗敏感性 |
| 4.3.2 干扰FUT8 表达对肿瘤干细胞的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 MiR-10b通过AP-2γ调节FUT8表达 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 主要试剂和材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.2.3 细胞 |
| 5.2.4 Western& Lectin Blot |
| 5.2.5 细胞构建 |
| 5.2.6 构建干扰AP-2γ的细胞株 |
| 5.2.7 免疫荧光染色 |
| 5.2.8 人乳腺癌组织芯片免疫组化染色 |
| 5.2.9 细胞划痕实验 |
| 5.2.10 Transwell迁移实验 |
| 5.2.11 细胞增殖实验 |
| 5.2.12 双荧光素酶报告实验 |
| 5.2.13 小鼠转移瘤实验 |
| 5.2.14 免疫组织化学染色 |
| 5.2.15 组织凋亡TUNEL染色 |
| 5.2.16 统计分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 mi R-10b的目标基因生物信息学筛选 |
| 5.3.2 人乳腺癌组织芯片检测AP-2γ的表达 |
| 5.3.3 人乳腺癌细胞中AP-2γ的表达情况 |
| 5.3.4 乳腺癌中AP-2γ表达调控FUT8 水平 |
| 5.3.5 AP-2γ对 MDA-MB-231 增殖、迁移的影响 |
| 5.3.6 AP-2γ过表达促进MDA-MB-231 在小鼠体内的转移 |
| 5.3.7 乳腺癌中mi R-10b调控AP-2γ表达 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 乳腺癌中AP-2γ通过STAT3调控FUT8的分子机制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 主要试剂和材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.2.3 试剂配置 |
| 6.2.4 免疫共沉淀(Co-IP) |
| 6.2.5 染色质免疫沉淀(Ch IP) |
| 6.2.6 Western Blot |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 AP-2γ通过STAT3 介导调控FUT8 表达 |
| 6.3.2 AP-2γ与 STAT3 结合相较与 p-STAT3 更加牢固 |
| 6.3.3 p-STAT3和FUT8 启动子区域直接结合 |
| 6.4 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 课题展望 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间科研成果 |
| 作者介绍 |
| 1.基本情况 |
| 2.教育背景 |
| 3.攻读博士学位期间的其它奖励 |
（8）脐带间充质干细胞及其外泌因子干预白消安致雄性小鼠生殖损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 HUMSCs的分离培养和鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验样本 |
| 1.2 实验试剂与耗材 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 HUMSCs形态与生长特征 |
| 2.2 HUMSCs表面标记物的鉴定 |
| 2.3 HUMSCs多重分化能力鉴定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 白消安致无精子症小鼠模型建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂与耗材 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 睾丸生精小管形态学观察 |
| 2.2 白消安抑制生殖细胞减数分裂基因 |
| 2.3 白消安抑制细胞黏附相关蛋白的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 脐带间充质干细胞外泌因子治疗白消安致雄性无精子症的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂和耗材 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 睾丸生精小管形态学观察 |
| 2.2 各组小鼠生精细胞减数分裂相关基因表达 |
| 2.3 各组小鼠生精细胞黏附相关蛋白的表达水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞在生精障碍治疗中的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）基于肿瘤细胞外泌体调控TAM细胞极化探讨双参颗粒抑制肺癌的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 肺癌微环境中外泌体的生物学功能及其临床应用 |
| 1 研究背景 |
| 2 外泌体的形成和特征 |
| 3 外泌体的释放 |
| 4 肺癌微环境中外泌体的功能 |
| 5 外泌体在化疗耐药与靶向治疗耐药中的作用 |
| 6 外泌体在临床诊断和治疗中的应用 |
| 7 肿瘤微环境中外泌体可以作为肺癌的预测指标 |
| 8 讨论 |
| 参考文献 |
| 附表1 外泌体肺癌微环境不同细胞之间的调控 |
| 附表2 外泌体在治疗、诊断与预后中的相关研究 |
| 综述二 中医药调控肿瘤微环境防治肺癌研究进展 |
| 1 肿瘤免疫微环境 |
| 2 中医药对肿瘤相关巨噬细胞极化与功能的调控 |
| 3 中医药对髓源性抑制细胞的调节 |
| 4 中医药对T、B淋巴细胞、NK细胞及免疫靶点的调控 |
| 5 中医药对调节性T细胞的调控 |
| 6 中医药重塑上皮间质转化 |
| 7 中医药对血管生成的作用 |
| 8 中医药对肿瘤相关成纤维细胞的调控 |
| 9 中医药对肿瘤相关树突状细胞的作用 |
| 10 中医药对肿瘤微环境炎症因子的调控 |
| 11 中医药对微环境中外泌体及非编码RNA表达的作用 |
| 12 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 双参颗粒抑制荷Lewis肺癌小鼠移植瘤的药效学实验 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 双参颗粒对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞表型的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 双参颗粒干预荷M1型巨噬细胞与Lewis肺癌细胞混合移植瘤小鼠模型的实验研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 双参颗粒对小鼠TAM细胞功能因子、记忆T细胞、Treg细胞的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 MIF基因过表达与MIF基因干扰稳定转染Lewis细胞株的构建 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 双参颗粒含药血清对MIF~(+/+)Lewis及shMIF-Lewis细胞中MIF蛋白表达的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 双参颗粒含药血清对Lewis来源外泌体及外泌体中MicroRNA-34a的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 双参颗粒含药血清干预MIF~(+/+)Lewis细胞来源外泌体对巨噬细胞表型及KLF4的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（10）基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用英文缩写词(Abbreviations) |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 衰老的研究进展 |
| 1.1.1 衰老的相关学说 |
| 1.1.2 抗衰老的研究进展 |
| 1.2 当归补血汤的抗衰老作用 |
| 1.3 网络药理学的发展 |
| 1.4 本课题的研究内容、目的和意义 |
| 第2章 通过网络药理学预测当归补血汤延缓衰老的作用机制 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 当归补血汤有效成分和靶点的筛选 |
| 2.2.2 衰老靶点的获取 |
| 2.2.3 蛋白相互作用网络(PPI)的构建 |
| 2.2.4 核心靶点分析 |
| 2.2.5 基因和通路的富集分析 |
| 2.2.6 化合物-靶点-作用通路网络的构建 |
| 2.2.7 成分-靶点分子对接 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 活性化合物的筛选 |
| 2.3.2 药物与疾病的交集靶点 |
| 2.3.3 PPI网络的构建与核心靶点的获取 |
| 2.3.4 基因功能与通路分析 |
| 2.3.5 化合物-靶点-作用通路网络的构建 |
| 2.3.6 核心靶点的分子对接结果 |
| 2.4 讨论与结论 |
| 第3章 当归补血汤对衰老大鼠的肝肾功能及造血机能的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 药材和试剂 |
| 3.1.3 仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 当归补血汤的制备 |
| 3.2.2 大鼠衰老模型的建立及取材 |
| 3.2.3 当归补血汤对衰老大鼠外观、体重及脏器系数的影响 |
| 3.2.4 肝肾组织匀浆制备 |
| 3.2.5 BCA法检测匀浆中蛋白含量 |
| 3.2.6 当归补血汤对衰老大鼠抗氧化相关指标的影响 |
| 3.2.7 当归补血汤对肝肾功能的影响 |
| 3.2.8 当归补血汤对衰老大鼠造血机能的影响 |
| 3.2.9 统计学分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 大鼠一般状态及外观变化观察 |
| 3.3.2 当归补血汤对衰老大鼠体重的影响 |
| 3.3.3 当归补血汤对衰老大鼠脏器系数的影响 |
| 3.3.4 当归补血汤对衰老大鼠的抗氧化保护作用 |
| 3.3.5 当归补血汤对肝肾功能的影响 |
| 3.3.6 当归补血汤对衰老大鼠外周血和骨髓造血机能的影响 |
| 3.4 讨论与结论 |
| 第4章 当归补血汤延缓衰老的作用机制验证 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 试剂 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 当归补血汤对衰老大鼠免疫功能的作用 |
| 4.2.2 Western blot方法检测通路中各蛋白的表达 |
| 4.2.3 统计学分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 当归补血汤对炎症相关蛋白表达的影响 |
| 4.3.2 归芪多糖对衰老大鼠T淋巴细胞相关凋亡蛋白因子的影响 |
| 4.3.3 当归补血汤对衰老大鼠各蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论与结论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 |
| 附录B 溶液的配制 |
四、CD44分子生物学特性及与肿瘤关系的研究进展（论文参考文献）
- [1]miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响[J]. 郭隽馥,李乡南,马天驰,苗兰英. 中国组织工程研究, 2022(19)
- [2]基于糖基化抑制和诱导内质网应激的衣霉素抗肿瘤耐药研究进展[J]. 胡晓妍,李冠武. 汕头大学学报(自然科学版), 2021(04)
- [3]PD-1基因敲除T细胞治疗结直肠癌的有效性及其体内安全性评价的临床前研究[D]. 高嫦娥. 昆明医科大学, 2021(01)
- [4]肝癌干细胞分子标志物和干性维持机制研究进展[J]. 张楠,白素杭,张富涵,史梦然,王璐瑶,王磊,许立达,杨昭,喻长远. 生物工程学报, 2021(08)
- [5]乳腺癌超声征象与肿瘤干细胞及上皮间质转化标志物表达水平的相关性[J]. 张海见,米拉·也尔兰,冷晓玲. 分子影像学杂志, 2021(04)
- [6]盐酸青藤碱抑制乳腺癌干细胞干性及其机制的研究[D]. 李晓梅. 遵义医科大学, 2021
- [7]核心岩藻糖基转移酶FUT8在乳腺癌中的分子调控机制研究[D]. 马敏星. 西北大学, 2021(12)
- [8]脐带间充质干细胞及其外泌因子干预白消安致雄性小鼠生殖损伤的实验研究[D]. 黄磊. 山西医科大学, 2021(01)
- [9]基于肿瘤细胞外泌体调控TAM细胞极化探讨双参颗粒抑制肺癌的作用机制[D]. 亓润智. 中国中医科学院, 2021
- [10]基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制[D]. 陈博. 兰州理工大学, 2021(01)