一、牙周炎患者龈沟液中P物质和降钙素基因相关肽的变化（论文文献综述）
刘洋,许莹,董丹江[1]（2022）在《P物质在牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤中的作用和机制研究》文中研究说明目的本研究通过在牙周炎模型小鼠和体外细胞实验中给予NK-1受体拮抗剂阻断P物质（SP）,探讨SP在牙周炎诱导全身炎症反应致多脏器功能损伤中的作用。方法通过反复龈沟注射牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）的方式诱导牙周炎小鼠模型。同时给予NK-1受体拮抗剂,观察牙周炎小鼠全身炎症因子分泌及器官功能损伤情况;细胞实验使用LPS和SP分别刺激巨噬细胞,酶联免疫吸附实验（ELISA）测定上清液中的IL-1β,加入NK-1受体拮抗剂,观察上清液中IL-1β的水平。结果与对照组相比,LPS诱导的牙周炎组龈沟液中、血清中的SP含量均明显升高（P<0.001）,同时血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平也较对照组升高（P<0.001）。LPS组的谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）轻度升高（P<0.05）,肺组织病理学评分有显着性差异（P<0.001）。给予NK-1受体拮抗剂,血清中IL-1β水平较LPS组降低,差异有统计学意义（P<0.05）,且小鼠ALT的水平降低,肺组织病理学评分改善。NK-1受体拮抗剂能够部分逆转SP诱导巨噬细胞产生IL-1β的作用,有统计学差异（P<0.001）。结论 SP通过与NK-1受体结合参与了牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤。
雷飞,倪菁,王丹杨[2]（2020）在《微创拔牙技术在下颌埋伏阻生智齿拔除过程中的应用研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨微创拔牙技术在下颌埋伏阻生智齿拔除过程中的应用价值。方法:选取2018年3月～2019年1月在本院进行下颌埋伏阻生智齿拔除术的患者80例,根据手术方法不同分为研究组和对照组,每组各40例。对照组采用传统拔牙技术,研究组采用微创拔牙技术。比较两组患者骨愈合时间、拔牙时间、术后疼痛程度、并发症发生率。同时比较两组患者手术前、术后龈沟液中炎症介质、氧化应激介质、疼痛介质含量。结果:与对照组比较,研究组骨愈合时间短、拔牙时间短、疼痛程度较轻、并发症发生率低（P<0.05）。研究组治疗后白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、P物质（substance P,SP）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）水平均明显低于对照组治疗后;超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase,GP-x）水平均明显高于对照组治疗后,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:微创拔牙技术在下颌埋伏阻生智齿拔除过程中,能够减轻局部炎症反应和应激反应,降低疼痛程度。
闫凯娴[3]（2020）在《高表达CGRP对大鼠骨髓间充质干细胞及RAW264.7生物学作用的研究》文中提出背景和目的:牙周炎是由牙菌斑中的微生物引起的慢性感染性疾病,伴有牙周组织破坏如附着丧失和牙槽骨吸收,严重者可发生牙松动脱落。牙周炎的治疗目前主要停滞在控制病变进一步发展,牙周组织再生是亟待解决的重要课题。牙周骨组织再生的难点在于其持续的相对开放的炎症微环境,这决定了牙周骨组织的再生要难于颌骨再生、种植体的骨增量等相对封闭环境下的骨再生。因此,研发具有抗炎和促进成骨双重作用的新技术和策略对于牙周炎相关的骨再生至关重要。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）已广泛应用于组织再生研究,但炎症微环境下干细胞生物学功能受到影响,成骨分化能力下降,难以获得有效骨质再生。牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.g）是牙周炎的主要致病菌,其细胞壁组分脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是诱导牙槽骨组织破坏、促进牙周炎发展和进展重要毒力因子。LPS可以直接抑制牙周组织干细胞的分化并增加牙周组织的吸收,另一方面还可以诱导多种细胞分泌白介素1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子 α（tumornecrosis factor-α,TNF-α）等炎症因子,发挥毒性作用,影响基质的形成、诱导细胞凋亡,进一步增加牙周组织破坏。降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）是一种感觉神经末梢分泌的由37个氨基酸组成的神经多肽,可通过多种途径参与骨组织的形成和修复,此外还有研究表明CGRP可以抑制炎症反应。本课题组前期研究表明高表达CGRP基因显着增强了大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone mesenchymal stem cells,rBMSCs）在正常体外培养条件下的成骨分化能力,在此基础上,本课题使用P.g LPS构建炎性环境研究高表达CGRP基因对炎症环境下rBMSCs的增殖、免疫反应及成骨分化的影响,并建立LPS处理的大鼠牙周骨缺损模型进一步研究高表达CGRP基因的rBMSCs对缺损区炎症浸润与骨修复的作用,旨在减少或排除牙周组织修复及再生过程中炎症微环境的干扰,促进牙周组织再生。为了充分验证CGRP在成骨与破骨分化中的作用,本课题进一步构建高表达CGRP基因的小鼠单核巨噬细胞系264.7（RAW264.7）,研究CGRP对体外培养的RAW264.7免疫调节及破骨分化的影响,探讨如何减少牙周炎导致的牙槽骨吸收,促进牙周组织再生,并使再生的牙周组织在结构及功能上恢复到生理状态,为临床治疗中实现牙周组织完全再生提供重要的理论基础。方法:1.rBMSCs的分离培养及鉴定全骨髓贴壁法分离培养Wistar大鼠股骨及胫骨rBMSCs,Flow cytometer检测表面标志抗原,成脂向及成骨向诱导后Oil red O、Alizarin Red染色检测rBMSCs的多向分化潜能。2.高表达CGRP的rBMSCs、RAW264.7的构建1)慢病毒转染rBMSCs,分为c-rBMSCs组（高表达CGRP的rBMSCs）、empty vector组（转染空载体病毒的rBMSCs）、rBMSCs组（正常rBMSCs）,检测CGRP mRNA和蛋白的表达水平。2)慢病毒转染RAW264.7,分为c-raw（高表达CGRP的RAW264.7）、empty vector组（转染空载体病毒的RAW264.7）、raw组（正常RAW264.7）,检测CGRP mRNA和蛋白的表达水平。3.高表达CGRP对炎症环境下rBMSCs增殖、免疫调节及成骨分化的影响1)CCK-8法检测高表达CGRP对rBMSCs炎症环境下增殖的影响。2)Realtime PCR检测高表达CGRP对炎症环境下rBMSCs IL-1β和TNF-α表达水平的影响。3)ELISA试剂盒检测高表达CGRP对炎症环境下rBMSCs IL-1β和TNF-α分泌水平的影响。4)RealtimePCR、Western Blot检测碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）、骨涎蛋白（bonesialoprotein,BSP）、核心结合因子-2（runt-related transcription factor-2,RUNX2）mRNA和蛋白的表达水平;通过Alizarin Red染色测定rBMSCs的成骨分化能力。5)建立LPS处理的大鼠牙周骨缺损模型,分为Control组（只在缺损区植入胶原膜）、rBMSCs组（在缺损区植入负载rBMSCs的胶原膜）、c-rBMSCs组（在缺损区植入负载高表达CGRP的rBMSCs的胶原膜）,HE染色及Micro-CT分析高表达CGRP对rBMSCs在LPS处理的大鼠牙周骨缺损区修复作用的影响。4.高表达CGRP对RAW264.7免疫调节及破骨分化的影响1)Realtime PCR检测高表达CGRP对炎症环境下RAW264.7 IL-1β和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）mRNA 表达水平的影响;Western Blot检测高表达CGRP对LPS刺激的RAW264.7 NF-κB通路活化的影响。2)Realtime PCR、Western Blot 检测高表达 CGRP 对 RAW264.7 破骨诱导条件下组织蛋白酶K（cathepsin K,CTSK）、c-FOS、活化T细胞核因子1（Nuclear Factor of Activated T Cells 1,NFATc-1）mRNA 及蛋白表达水平的影响。结果:1.rBMSCs的分离培养及鉴定全骨髓贴壁法分离培养Wistar大鼠股骨及胫骨rBMSCs,细胞大部分呈梭形,放射状排列。Flow cytometer检测rBMSCs的表面标志物CD29、CD44、CD90、CD45、CD1 1b 的表达阳性率分别为 98.9%、98.4%、98.8%、0.20%、0.41%,符合间充质干细胞表面标志物表达的特性。Oil red O、Alizarin Red染色检测rBMSCs成脂及成骨向分化潜能,染色结果均为阳性。2.高表达CGRP基因的rBMSCs和RAW264.7的构建病毒液分别转染rBMSCs、RAW264.7,转染CGRP慢病毒的细胞CGRP mRNA及蛋白的表达水平明显高于相应empty vector组和对照组（P<0.05）,而empty vector组和对照组表达较弱且无统计学差异（P>0.05）。3.高表达CGRP对炎症环境下rBMSCs增殖、免疫调节及成骨作用的影响1)1μg/ml LPS炎症环境下,CCK-8结果显示c-rBMSCs增殖速度大于rBMSCs（P<0.05）。2)加入1μg/ml LPS,24h后提取各组细胞RNA,Realtime PCR检测结果显示,c-rBMSCs 炎症因子 IL-1β、TNF-αmRNA 表达水平低于 rBMSCs（P<0.05）;ELISA检测结果显示c-rBMSCs炎症因子IL-1β、TNF-α分泌水平低于rBMSCs（P<0.05）。3)检测各组细胞在1μg/ml LPS的炎症环境下矿化诱导2w、3w后ALP、BSP、RUNX2 mRNA和蛋白的表达水平,结果显示:c-rBMSCs较rBMSCs ALP、BSP和RUNX2mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;矿化诱导3w后Alizarin Red染色c-rBMSCs形成的矿化结节明显多于rBMSCs（P<0.05）。4)高表达CGRP对rBMSCs在LPS处理的大鼠牙周骨缺损区修复作用的影响。HE染色结果示:c-rBMSCs组较Control组、rBMSCs组缺损区炎症浸润明显减轻,且缺损区可见大量新生骨,几乎完全充填了缺损区。Micro-CT结果示:rBMSCs组骨缺损区骨密度高于Control组（P<0.05）,c-rBMSCs组缺损区骨密度明显高于Control组与rBMSCs组（P<0.05）,且缺损区基本被新骨完全填满。4.高表达CGRP对RAW264.7免疫调节及破骨分化的影响1)加入 1μg/ml LPS 刺激 RAW264.7 细胞 24h,提取 RNA,Realtime PCR 检测结果显示,c-raw炎症因子IL-1β、iNOS mRNA表达水平低于raw（P<0.05）;Western Blot结果显示CGRP对LPS诱导的NF-κB通路的活化具有明显的抑制作用。2)30ng/mlRANKL 诱导 RAW264.7 1w,Realtime PCR、Western Blot 检测结果显示:c-raw组的CTSK、c-FOS、NFATc-1 mRNA和蛋白水平均低于raw组（P<0.05）。结论:1.高表达CGRP基因可以促进1μg/ml LPS炎症环境下rBMSCs的增殖、降低1μg/ml LPS诱导的炎症因子IL-1 β和TNF-α的mRNA表达水平和蛋白分泌水平、促进1μg/ml LPS炎症环境下rBMSCs的成骨分化。在LPS处理的大鼠牙周骨缺损模型中,高表达CGRP基因可显着提高rBMSCs在LPS处理的骨缺损区抑制炎症浸润及促进骨修复再生的能力。2.高表达CGRP基因可以通过抑制LPS诱导的NF-κB通路的活化降低RAW264.7中炎症因子IL-1β和iNOS mRNA表达水平,高表达CGRP基因可降低RANKL诱导的RAW264.7的破骨相关因子的表达。
何薇[4]（2020）在《植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究》文中认为慢性牙周炎是以菌斑为始动因子,牙周组织破坏为临床特征的慢性炎症性疾病,其发病率高,是导致成年人失牙的主要原因。牙槽骨丧失是牙周炎的主要病理表现,是骨吸收增加和骨生成减少的综合结果。骨丧失与牙周组织中炎症因子高表达紧密相关,其中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）是导致牙周炎骨丧失的重要因素。现有的牙周炎治疗方法难以在同一步骤兼顾骨再生和炎症抑制,并且普遍具有治疗周期长、花费高等缺点。金属镁具有生物相容性好、可在体内分解、促进成骨、抑制炎症等优点,有望以植入物的形式应用于牙周炎治疗。本实验利用大鼠拔牙后种植联合牙周炎模型,研究了在牙槽窝内植入纯镁对大鼠实验性牙周炎的影响,并利用牙槽骨骨膜干细胞和巨噬细胞体外牙周炎模型,探讨了镁离子对牙周炎的作用机制。本实验首先在大鼠下颌切牙拔牙窝内植入镁棒（以钛棒作为对照组）,建立拔牙后种植模型,同时在同侧下颌第一磨牙建立牙周炎模型。建模2周和6周后,用扫描电镜能谱分析检测镁离子渗透情况,以显微电子计算机断层扫描（micro computed tomography,micro CT）和牙周组织学分析评价牙槽骨丧失程度和炎症水平。然后,根据实验组观察到的牙周炎环境中骨膜成骨的现象,从以下两个角度探讨镁植入物对牙周炎的作用机制:（1）成骨角度:用神经示踪、免疫荧光染色、细胞增殖、成骨诱导等实验探索镁植入物促进牙槽骨骨膜成骨的机制;（2）炎症角度:用免疫组化染色和牙周炎细胞模型检测镁离子对牙周炎组织和细胞TNF-α表达的影响,用牙槽骨骨膜干细胞的增殖和成骨诱导实验,研究在TNF-α模拟的牙周炎环境下,镁离子对骨膜成骨的调节作用。实验结果显示:（1）大鼠牙槽窝内的镁植入物降解生成的镁离子可渗透至牙槽骨表面,减少实验性牙周炎的骨丧失,减轻局部炎症反应;（2）镁植入物来源的镁离子可促进非炎症区域以及牙周炎区域的牙槽骨骨膜成骨,原因主要为镁离子直接刺激骨膜干细胞增殖和成骨分化;（3）镁植入物降解生成的镁离子可抑制巨噬细胞分泌TNF-α,降低局部牙周组织中TNF-α的浓度;TNF-α抑制牙槽骨骨膜干细胞的增殖和成骨分化,镁离子可部分逆转TNF-α对骨膜成骨的不利影响。综上所述,我们发现了镁植入物对大鼠实验性牙周炎的抑制作用,并且从镁离子促进骨膜成骨和减弱炎症因子（主要是TNF-α）对骨膜成骨的不利影响两方面解释了作用机制,为镁植入物治疗牙周炎的临床应用建立了前期基础。
王蕾[5]（2019）在《Calca基因启动子区DNA甲基化影响2型糖尿病大鼠ASCs成骨功能的研究》文中研究说明糖尿病是继心血管疾病之后的第二大慢性疾病,其中2型糖尿病（Type 2diabetes mellitus,T2DM）占据90%-95%。糖尿病的高血糖毒性,异常胰岛素及细胞因子水平、氧化应激等,导致了以低骨量和骨组织微结构破坏为特征糖尿病性骨质疏松的形成。对于口腔种植而言,血糖控制较差的患者早期骨整合能力下降,周围软组织愈合时间延长,感染几率增加。近年来,干细胞的发现为各种组织修复带来了新的希望,干细胞具有多向分化、自我更新以及分泌多种细胞因子能力,可参与损伤组织与器官修复和再生。干细胞可分为全能干细胞,多能干细胞和单能干细胞,分化潜能逐级下降。组织工程技术利用干细胞来提高糖尿病患者的成骨能力,也得到多个实验证实。来源于自体的干细胞,由于临床易得、能促进长期的移植生存和移植耐受等优点,成为理想的种子细胞。其中,骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）及脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells,ASCs）应用最为广泛。但考虑到临床应用中,BMSCs获取困难,同时糖尿病患者来源的BMSCs相比正常BMSCs数量减少,再生能力减弱,增殖和存活能力降低,成骨分化显着下降,限制了其在再生方向的应用。而T2DM来源的ASCs（ASCs-T2DM）获取简便,且获取数量并未减少,生长曲线和对照组类似,故而ASCs成为更具有应用前景的细胞。但是,T2DM个体来源的ASCs相比健康个体来源ASCs（ASCs-Control,ASCs-C）成骨能力减弱,应用于骨组织修复时不能满足需要,主要是因为2型糖尿病的机体环境可改变ASCs成骨及增殖能力。换而言之,对于单独糖尿病患者,其患病前后的不同的机体状态也会影响基因的表达,但个体本身的基因序列并未发生改变,而此种现象可能与表观遗传有关。DNA甲基化是表观遗传中研究最为广泛的部分,往往基因启动子区的DNA甲基化会抑制基因的表达。考虑到研究单独个体时建模前后的不稳定性,因此,我们选择研究T2DM来源的ASCs同健康大鼠来源ASCs在基因启动子区DNA甲基化水平的差异,寻找差异基因,以明确T2DM机体环境对ASCs成骨能力影响的具体机制。第一部分ASCs-T2DM与ASCs-C对比研究目的:建立T2DM大鼠模型,比较ASCs-T2DM及ASCs-C体外成骨及增殖能力。方法:高脂高糖饲料喂养结合小剂量STZ腹腔注射构建T2DM模型;建模成功后,利用酶消化法提取健康及2型糖尿病大鼠ASCs,培养至P3细胞待用;流式细胞术检测细胞表面分子的表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;CCK-8方法检测细胞增殖能力;成骨成脂诱导验证多向分化能力;q-PCR检测成骨相关基因的表达,Western Blot检测成骨相关蛋白的表达。结果:成模后大鼠体重降低,血糖持续维持高于16.7mmol/L;流式检测显示两种细胞均阳性表达干细胞相关的表面标志物（CD29和CD90）,不表达血细胞相关的表面标志物（CD34和CD45）;相比ASCsC,ASCs-T2DM克隆形成能力以及增殖能力显着下降;成脂诱导后染色发现:两种干细胞经诱导均可产生脂滴;成骨诱导碱性磷酸酶（ALP）染色可见:ASCs-T2DM细胞ALP的表达量明显低于ASCs-C;茜素红染色显示:ASCs-T2DM形成的矿化结节较少;q-PCR及Western Blot结果表明,ASCs-T2DM成骨相关基因及相关蛋白表达也低于ASCs-C。结论:ASCs-T2DM增殖能力,克隆形成及成骨分化能力显着低于ASCs-C。第二部分ASCs-T2DM与ASCs-C全基因组DNA甲基化测序及差异基因的筛选目的:筛选ASCs-T2DM与ASCs-C中与成骨相关的启动子区DNA甲基化差异基因。方法:提取ASCs-T2DM与ASCs-C的DNA,做全基因组甲基化测序;选取与成骨相关,并且p值小于0.05的GO term,选出相关基因;结合DNA甲基化及q-PCR结果分析,筛选甲基化水平与基因表达水平成负相关的基因;结合IGV软件和文献阅读,确定目的基因。结果:全基因组甲基化结果显示,两者在DNA甲基化水平上确实存在差异。启动子区甲基化差异基因,共有253个。与成骨相关,并且p值小于0.05的GO term基因有:C3（补体C3,complement C3）,Calca（降钙素基因相关肽,alcitonin-related polypeptide）,Ereg（上皮调节蛋白,epiregulin）,il20rb（白细胞介素20受体亚基,interleukin 20 receptor subunit beta）;其中C3及Calca的表达水平与DNA甲基化水平呈负相关。最终确定差异最为显着基因:Calca。结论:ASCs-T2DM与ASCs-C在启动子区DNA甲基化水平上确实存在差异,其中Calca在ASCs-T2DM中的DNA甲基化水平高于ASCs-C,而其表达水平低于ASCs-C。第三部分CGRP促进ASCs-T2DM成骨分化的功能验证目的:探究体外药物CGRP对ASCs-T2DM的形态、增殖和成骨能力的影响。方法:配制含CGRP不同浓度（10-7mol/L,10-8 mol/L,10-9 mol/L,0 mol/L）的完全培养基及成骨诱导培养基,鬼笔环肽染色检测CGRP对细胞形态的影响;CCK-8检测CGRP对细胞增殖能力的影响;成骨诱导染色后检测不同浓度CGRP对ASCs-T2DM体外成骨能力的影响;q-PCR检测其对ASCs-T2DM成骨相关基因表达的影响。结果:不同浓度CGRP对细胞形态无明显影响;但其可影响糖尿病大鼠ASCs的增殖能力,其中10-7-10-8mmol/L浓度培养基可显着提升其增殖能力;ALP染色显示:在此因子的干预下,ALP的表达量显着升高,且呈浓度依赖;茜素红染色显示,CGRP能促进ASCs-T2DM中钙结节的形成,同样呈浓度依赖;q-PCR结果显示:在CGRP的干预下,成骨相关基因表达显着上升。结论:在一定范围内,Calca基因编码产物CGRP不影响ASCs-T2DM的细胞形态,但能提升其体外成骨分化和增殖能力。第四部分Calca基因DNA甲基化改变的位点及功能验证目的:反向验证ASCs-T2DM中Calca基因启动子区DNA目的片段的甲基化水平与基因表达的关系,并研究其具体机制。方法:用甲基化抑制剂5-氮胞苷对ASCsT2DM进行体外干预,鬼笔环肽染色检测5-氮胞苷对细胞形态的影响;亚硫酸氢盐扩增子测序检测5-氮胞苷对ASCs-T2DM目的片段DNA甲基化水平的影响;q-PCR检测5-氮胞苷干预后ASCs-T2DM中Calca及DNMT1的表达。结果:5-氮胞苷可显着改变ASCs细胞形态;测序结果表明:5-氮胞苷可降低的ASCs-T2DM中Calca基因启动子区目的片段DNA甲基化水平;q-PCR结果显示:5-氮胞苷干预后的ASCs-T2DM中Calca表达量上升,同时甲基化转移酶DNMT1表达量下降。结论:5-氮胞苷可降低ASCs-T2DM中Calca基因的启动子区目的片段DNA甲基化水平,此过程可能是通过降低DNMT1的表达来介导,进而提升Calca基因的表达。
于西佼[6]（2017）在《离断下牙槽神经对大鼠实验性牙周炎的影响研究》文中研究说明牙周炎是有着广泛罹患人群的口腔疾病,是成人失牙的主要原因。牙周致病菌是牙周炎发生的始动因素,没有牙周致病菌不会发生牙周炎,然而在牙周致病菌普遍存在、口腔卫生状况相似的情况下,不同个体牙周病损的发生和进展存在很大差异,这就提示宿主因素在牙周炎的发生发展过程中同样发挥重要作用。致病菌的存在是牙周炎发生的必要条件,宿主易感性则影响宿主在应对细菌免疫应答过程中的强度,从而导致不同程度的牙周组织破坏。牙周组织炎症进展及组织破坏的范围很大程度上取决于宿主对牙周致病菌及其代谢产物的免疫炎症反应。神经因素是宿主因素的重要组成部分,神经可以通过分布在组织器官中的疼痛感受器、刺激感受器来感受疼痛、压力,发挥感知功能。神经也可以通过分泌神经递质和神经肽来调控组织损伤后的局部炎症反应,影响损伤组织的修复愈合。神经因素其在牙周炎发生进展中是否发挥重要调控作用及相关机制值得进一步的研究证实。重度牙周病程中,牙周支持组织大量破坏,其中的神经束亦会受累,导致部分病变组织区域会处于失神经支配的情况,失神经支配后病变区的炎症进程如何发展,神经及其分泌的功能性神经肽在牙周组织炎症进程中发挥何种作用亟待深入研究和阐释。失神经支配亦是神经支配研究的有力补充。丝线诱导的大鼠实验性牙周炎在牙周炎研究中应用广泛。单纯使用丝线或者正畸结扎丝结扎诱导的牙周炎一般需要较长的试验周期才能观察到明显牙槽骨吸收。丝线配合牙周致病菌则能够更快的观察到牙周炎症和骨质吸收的发生,但是细菌的培养或购买又会增加实验成本和操作的难度,不同批次给药又会存在一致性问题。我们使用缝合丝线严密缠绕包裹正畸结扎丝改良结扎诱导的大鼠牙周炎模型。本研究建立离断下牙槽神经的失神经支配和结扎诱导的大鼠牙周炎的联合模型。观察失下牙槽神经支配对大鼠牙周炎的发生、进展的影响,并探讨其可能机制。方法:将缝合丝线严密缠绕包裹4-0正畸结扎丝,分离牙龈之后牢固结扎于下颌第一磨牙牙颈部诱导大鼠实验性牙周炎同时离断同侧下牙槽神经。选择成年雄性Wistar大鼠,随机分为4组:丝线加钢丝结扎组（L）,单纯离断神经组（D）,丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）,正常鼠（N）作为对照（n=8）。丝线加钢丝结扎组（L）和丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）的大鼠行侧下颌第一磨牙丝线加钢丝结扎诱导实验性牙周炎;单纯离断神经组（D）和丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）的大鼠同时行右侧下牙槽神经离断术。术后4周取材,分离下颌骨行Micro-CT检查,定量评价牙槽骨吸收情况,分析骨组织面积百分比（percent bone area）、骨小梁厚度（trabecular thickness）,骨小梁数量（trabecular number）,骨矿化密度（bone mineral density）等骨生物学参数。10%EDTA脱钙后制备石蜡切片,组织学观察牙周组织破坏情况;TRAP染色观察破骨细胞并计数;天狼星红染色观察牙龈组织胶原纤维的走向和破坏情况。分离新鲜下颌第一磨牙的牙龈组织,放射免疫法检测牙龈组织中IL-1β、TNF-α、OPG和sRANKL表达,计算OPG/sRANKL比例;提取牙龈组织核蛋白Western bloting检测NF-κB p65和I κ B α磷酸化。结果:使用缝合丝线严密缠绕包裹4-0正畸结扎丝,实验周期内可以牢固结扎于下颌第一磨牙牙颈部,在术后4周即可诱发牙龈组织的炎症和牙槽骨的少量吸收。离断下牙槽神经可以显着加重结扎诱导的大鼠实验性牙周炎。丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）下颌第一磨牙的牙槽骨吸收显着高于丝线加钢丝结扎组。离断神经组和正常组均未观察到牙槽骨的吸收。Micro-CT分析骨特异性参数显示:丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）的骨组织面积百分比（percent bone area）、骨小梁厚度（trabecular thickness）,骨矿化密度（bone mineral density）,较丝线结扎组均显着降低。丝线加钢丝结扎+离断神经组（LD）中TRAP染色阳性细胞显着增加,牙龈组织中IL-1β and TNF-α的表达显着增加,胶原纤维破坏更加明显。机制研究发现,离断下牙槽神经可以加剧丝线加钢丝结扎诱导的NF-κ B p65和I κ B α的磷酸化,并下调OPG/sRANKL比值。单纯离断下牙槽神经组较正常组亦可以观察到下调的OPG/sRANKL比值。结论:离断下槽神经神经显着加剧结扎诱导的大鼠实验性牙周炎。NF-κB信号通路和OPG/RANKL通路均参与这一过程。大鼠离断下牙槽神经和丝线加钢丝结扎诱导牙周炎的联合实验模型,可以提供一个良好的实验平台,进一步观察神经支配及其分泌的各类功能肽在牙周炎的发生、进展过程中表达变化,从而遴选神经相关因子来调控牙周炎症,促进牙周组织再生。
薛珍珠[7]（2017）在《不同牙周状态下龈沟液及牙龈组织中TREM-1表达的检测》文中认为实验一不同牙周状态下牙龈组织中TREM-1表达的检测目的:观察髓样细胞触发性受体（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）在不同牙周状态下牙龈组织中的分布以及表达水平,初步探讨TREM-1在牙周疾病发生过程中的可能作用。方法:将30例自愿接受本研究的患者按照牙周炎的病变程度分成3组:健康对照组（10例）、牙龈炎组（10例）和慢性牙周炎组（10例）。将上述患者的牙龈组织标本置于10%中性福尔马林液固定48 h以上,制作牙龈组织连续切片,HE染色,光学显微镜下观察各实验组牙龈组织的组织学改变;采用免疫荧光染色观察各实验组牙龈组织中TREM-1的分布及表达水平。结果:（1）TREM-1在不同状态牙龈组织的牙龈上皮和结缔组织全层中均有表达。（2）TREM-1定位于细胞膜或细胞浆,不定位于细胞核。（3）健康组牙龈组织的TREM-1主要分布于牙龈组织上皮层,尤其集中于牙龈上皮基底层,牙龈组织特异性荧光着色强度不明显。（4）慢性牙龈炎组牙龈组织中TREM-1特异性荧光着色强度为中等阳性,与健康对照组相比TREM-1阳性细胞数量有所增加;（5）慢性牙周炎组牙龈组织中TREM-1特异性荧光着色强度为强阳性,与健康对照组及慢性牙龈炎组比较,TREM-1阳性细胞数量有所增加。结论:TREM-1在牙龈组织中的表达强度随着牙周炎症程度的加重而增加,提示TREM-1可能在慢性牙周炎的发生和发展进程中起着重要的作用。实验二不同牙周状态下龈沟液中s TREM-1水平检测目的:分析比较不同牙周状态下龈沟液（gingival crevicular fluid,GCF）中可溶性髓样细胞触发性受体（soluble triggering receptor expressed on myeloid cells,s TREM-1）的浓度,探讨s TREM-1在慢性牙周炎发生、发展过程中的作用。方法:将85例自愿接受本研究的患者按照牙周炎的病变程度分成5组:健康对照组（18例）、慢性牙龈炎组（18例）、轻度慢性牙周炎组（14例）、中度慢性牙周炎组（15例）和重度慢性牙周炎组（20例）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测比较不同牙周状态下GCF中s TREM-1的浓度,并与患者的牙龈指数（GI）、牙周袋探诊深度（PD）及附着丧失（CAL）情况进行相关性分析。结果:慢性牙龈炎患者及轻度、中度、重度慢性牙周炎患者GCF中s TREM-1的浓度均高于健康组GCF中s TREM-1的浓度,差异具有统计学意义（P<0.05）。与慢性牙龈炎组相比,中度和重度慢性牙周炎组患者GCF中s TREM-1的浓度均显着增高,差异有统计学意义（P<0.05）,轻度慢性牙周炎组患者GCF中的s TREM-1浓度与慢性牙龈炎组相比差异无统计学意义（P>0.05）;中度慢性牙周炎组患者GCF中的s TREM-1浓度与轻度慢性牙周炎组相比差异无统计学意义（P>0.05）;重度慢性牙周炎组患者GCF中的s TREM1浓度显着高于轻度慢性牙周炎组,差异有统计学意义（P<0.05）;重度慢性牙周炎组患者GCF中的s TREM-1浓度与中度慢性牙周炎组相比差异无统计学意义（P>0.05）。此外,s TREM-1的浓度与GI、PD、CAL均呈正相关。结论:GCF中s TREM-1的浓度与牙周组织的炎症程度密切相关,随着牙周组织炎症严重程度的增加而升高。GCF中s TREM-1含量的检测对判断牙周组织炎症状态具有潜在的应用价值。
蔚一博[8]（2016）在《降钙素促进人牙周膜干细胞胶原合成及成骨分化的作用机制研究》文中提出目的牙周炎是由牙菌斑中微生物导致牙周支持组织引发的慢性感染性疾病,发病后能够打破牙槽骨吸收和修复的动态平衡,引起牙槽骨的吸收大于牙槽骨的修复,进而造成牙槽骨高度的降低。牙周病治疗的目的已经远远不是单纯的控制炎症,更是将已经破坏的牙周组织让其再生并形成新的附着。牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）是牙周膜组织中的定向干细胞,和其他干细胞一样具有多向分化的潜能,在牙周组织的损伤修复过程中发挥重要的作用。研究表明PDLSCs可高表达I型/III型胶原等细胞外基质（extracellular matrix,ECM）并分泌至胞外,此外PDLSCs可经诱导发生成骨分化促进牙槽骨的再生,是牙槽骨修复的细胞学基础。降钙素家族成员可通过结合同一类降钙素受体进而激活胞内信号途径影响不同细胞的生物学性质。现有研究结果证实降钙素（calcitonin,CT）在骨愈合过程中的作用机制为促进成骨细胞增殖、分泌和合成细胞外基质并促进基质钙化及促进成骨细胞转化为骨细胞,还可通过促进OPG表达,降低RANKL表达,抑制破骨细胞的生成。但迄今为止,对CT调控PDLSCs成骨分化的作用机制,及其在牙槽骨再生过程中的作用尚未见报道。本研究探讨CT对PDLSCs胶原合成和成骨分化的作用及可能的分子机制。方法（一）临床选取60名患者,分为两组:慢性牙周炎组和健康对照组。记录牙龈指数、探诊深度、临床附着水平。采集龈沟液,运用定量酶联免疫吸附法（ELISA）检测龈沟液内CT,TGF-β1,BMPs的含量,比较正常人及牙周炎患者龈沟液中CT,TGF-β1,BMPs的表达水平,统计分析CT与TGF-β1,BMPs表达水平的相关性,以及CT表达与慢性牙周炎患者临床指标的相关性。（二）采集因正畸拔除的前磨牙,采用酶消化联合组织贴附法,行原代培养获得人牙周膜细胞。进而利用免疫磁珠技术对STRO1阳性牙周膜细胞进行分选,获得PDLSCs。通过克隆形成实验检测PDLSCs的克隆形成能力。通过诱导培养基培养,分别通过von kossa染色、油红O染色和番红花精O染色检测PDLSCs的多向分化能力。构建含ct基因阅读框的重组腺病毒ad.ct,感染人pdlscs。通过定量pcr和westernblot的方法,检测人pdlscs中i型/iii型胶原,以及成骨分化标志蛋白alp和ocn的表达水平。探讨表达ct对人pdlscs胶原分泌及成骨分化的的作用。（三）ad.ct感染人pdlscs,通过定量pcr和western-blot测定tgf-β1表达水平,观察过表达ct对人pdlscs中tgf-β1表达水平的影响。合成特异性针对tgf-β1的sirna片段。ad.ct感染人pdlscs同时转染tgf-β1sirna特异性抑制人pdlscs中tgf-β1的表达。通过定量pcr测定和western-blot测定的方法,检测人pdlscs中i型/iii型胶原的表达水平。探讨ct是否通过调控tgf-β1表达的途径进而影响pdlscs的胶原蛋白合成。（四）ad.ct感染人pdlscs,通过定量pcr和western-blot测定bmps表达水平,观察过表达ct对人pdlscs中bmps表达水平的影响。ad.ct感染人pdlscs同时给予bmps途径特异性抑制剂noggin处理。通过定量pcr测定和western-blot测定的方法,检测人pdlscs中成骨分化相关标志ocn/alp的表达水平。探讨ct是否通过调控bmps表达的途径进而影响pdlscs的成骨分化。结果（一）慢性牙周炎患者龈沟液中ct,tgf-β1,bmp2/4/7的表达水平显着高于正常对照。统计分析结果显示,慢性牙周炎患者中ct表达水平与tgf-β1以及bmp2/4/7表达水平呈正相关。ct的表达水平患者的牙龈指数、探诊深度、临床附着水平负相关,与患者的年龄、性别无相关性。（二）成功培养获得人原代牙周膜细胞,通过免疫磁珠分选获得stro1阳性牙周膜干细胞。流式细胞仪检测显示,分选后细胞中stro1+/cd146+细胞比例为96.2%。细胞克隆形成实验结果显示分选获得的stro1+/cd146+细胞克隆形成率为65.7±9.1%,显着高于未分选的牙周膜细胞（27.1±5.2%,p<0.01）。pdlscs成骨诱导培养后,vonkossa染色出现矿化结节。pdlscs成脂诱导培养后,油红o染色可见脂滴。pdlscs成软骨诱导培养后,番红花精o染色阳性。ad.ct感染人pdlscs48hr后,检测发现i型/iii型胶原ocn/alp的mrna及蛋白表达水平均显着升高。（三）Ad.CT感染人PDLSCs 48hr后,检测发现TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平均显着升高。Ad.TGF-β1siRNA转染人PDLSCs 48hr后,可显着抑制TGF-β1 mRNA及蛋白表达。Ad.CT/TGF-β1siRNA共同处理人PDLSCs后,I型/III型胶原的表达水平较Ad.CT单独处理显着降低。（四）Ad.CT感染人PDLSCs 48hr后,检测发现BMP2/4 m RNA及蛋白表达水平均显着升高,但BMP7表达水平未见显着变化。Noggin处理人PDLSCs 48hr后,可显着抑制BMPs活性。Ad.CT/Noggin共同处理人PDLSCs后,OCN/ALP的表达水平较Ad.CT单独处理显着降低。结论（一）CT在牙周炎患者龈沟液中高表达且与患者的牙龈指数、探诊深度、临床附着水平呈负相关,提示CT参与了牙周炎的发生发展,高表达CT可能是牙周炎发病的保护因素,其作用可能与调控牙周组织损伤修复有关。龈沟液中CT表达水平与TGF-β1以及BMP2/4/7表达水平正相关,提示CT可能通过调控TGF-β1及BMPs信号通路促进牙周组织损伤修复。（二）原代培养的人STRO1+牙周膜细胞成克隆能力显着高于牙周膜细胞,此外STRO1+牙周膜细胞具有体外多向诱导分化能力,提示人STRO1+牙周膜细胞具有人PDLSCs性质。过表达CT可显着提高人PDLSCs中I型/III型胶原及OCN/ALP的表达水平,提示CT具有促进人PDLSCs纤维化及成骨分化的作用。（三）过表达CT可显着提高人PDLSCs中TGF-β1的表达水平。抑制TGF-β1表达可显着抑制过表达CT对人PDLSCs I型/III型胶原表达的促进作用,提示CT可能通过上调TGF-β1表达的途径促进PDLSCs纤维化。（四）过表达CT可显着提高人PDLSCs中BMP2/4的表达水平。抑制BMPs活性可显着抑制过表达CT对人PDLSCs OCN/ALP表达的促进作用,提示CT可能通过上调BMP2/4表达的途径促进PDLSCs成骨分化。
周燕[9]（2016）在《CGRP对Pg-LPS诱导的成骨细胞损伤的调控作用和机制研究》文中研究说明牙周病（Periodontal disease）是指发生在牙周支持组织的疾病。牙周组织（包括牙龈、牙周膜、牙槽骨、牙骨质）在机体内外因素等影响下发生的改变,例如:牙槽骨破坏性吸收,牙周膜充血、水肿、溶解、蜕变,牙骨质沉积受阻,牙齿松动,真性牙周袋形成,牙龈炎症、增生、萎缩等统称为牙周病。其中牙槽骨按解剖部份分为固有牙槽骨、密质骨、松质骨。牙槽骨的破坏性吸收是由于骨重建过程中牙槽骨病理或（和）生理的不平衡引起,是牙周病的主要特征之一。成骨细胞和破骨细胞的数量和比例决定骨组织的重建;同时,炎症因子、细胞活性、细胞凋亡、细胞生命周期性调节等都在骨组织重建过程中起着相当重要的作用。在众多炎症因子中肿瘤坏死因子就是其中研究的较详尽的一组。肿瘤坏死因子家族成员中的肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）是与细胞凋亡关系最为密切的是肿瘤坏死因子,它参与多种细胞的凋亡调控。在局部病损的组织内有高浓度的肿瘤坏死因子-α聚集,TNF-α及其受体在骨吸收过程中起着重要的作用,影响细胞凋亡。牙周炎发生、进展、代谢的整个过程均有成骨细胞参与。牙菌斑（dental plaque）是牙周炎的始动因素。龈上菌斑和龈下菌斑包含大量的致病菌,其中革兰氏阴性厌氧菌是侵蚀性最强的一类。革兰氏阴性细菌细胞壁外膜上的主要成分是脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）,具有破坏牙槽骨组织、促使牙周炎发展和恶化的作用。LPS可直接作用于牙周靶细胞,抑制牙周靶细胞的增殖和分化,加速牙周组织的吸收。鉴于上述原因,脂多糖在增加牙周炎发病率和促进牙槽骨吸收这一方面的特性也成为牙周病病因学研究的热点。研究证实,脂多糖和牙周炎病原体的代谢产物可以影响骨基质的形成和细胞凋亡,在这一过程中,成骨细胞的生物学效应尤其重要。牙槽骨的吸收或者骨质疏松是由于脂多糖引起的炎症反应和成骨细胞凋亡异常,从而导致骨吸收和骨形成之间的紊乱引起。现阶段尚无有效治疗由LPS诱导的骨破坏的药物。预防牙槽骨吸收和骨质流失的主要目的是探讨成骨细胞的保护功能和活动的不平衡状态,寻找潜在的药物治疗靶点。降钙素相关基因肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）是1971年首次从甲状腺髓样癌组织中提取的蛋白。CGRP由37个氨基酸组成,包括a-cgrp及b-cgrp两个异构体,最初是在感觉神经末梢被发现,以分泌颗粒的形式储存。随着研究的深入,近年来发现它存在于神经系统中,同时发现在骨组织、呼吸系统、心血管系统、消化系统等组织中均有CGRP的分布。CGRP在各种组织中呈现出多元生理学效应,还可控制相关的免疫应答。骨组织中CGRP的来源不仅仅是由感觉神经纤维末梢分泌,而且可以由成骨细胞以自分泌和旁分泌的形式生成,体外实验已经证实CGRP可促进成骨细胞的增殖、分化、增加细胞体积,同时在成骨细胞的表面发现有CGRP受体的存在。研究发现,CGRP作为神经系统和免疫系统的交叉点,在炎症中还具有潜在的调节作用,它不仅能够直接通过影响CD4+Thelper细胞,也可以通过影响抗原递呈细胞的功能调节适应性免疫反应。此外,CGRP还能够有效的抑制单核巨噬细胞和树突细胞释放炎症因子如TNF-α,IL-1β和CCl4。大量研究提示,让我们比较确定的是,CGRP作为一个潜在炎症调控者,可以抑制促炎因子的释放,且在炎症过程中发挥重要的调节作用,但是对于LPS诱导的成骨细胞损伤的调控机制,还不是十分清楚。在本次研究中,我们通过体外实验观察到牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）可以抑制成骨细胞活性并诱导成骨细胞凋亡;外源性地加入CGRP后,可以减弱这一作用。因此,本实验旨在探讨Pg-LPS对成骨细胞的损伤作用以及CGRP对这一过程的调控作用,进一步探讨炎症因子的调节机制,为牙周病的病因学研究提供理论基础。方法:（一）成骨细胞的原代培养选新生小鼠颅骨采用组织块培养法获取细胞。组织块消化后弃上清,收集组织块和游出的细胞,转入培养基,放致5%CO2孵箱中37℃培养。（二）细胞传代培养待细胞消化到开始收缩脱壁后转移致新的培养瓶进行细胞传代实验。本实验所采用的成骨细胞均是传至第3-4代的。细胞实验前均用无血清的培养液替换之前的含血清的培养液。孵箱中再继续培养成骨细胞24小时,其目的是使实验细胞均处在G0期。（三）成骨细胞鉴定实验组织块法培养的细胞都经相差显微镜行细胞形态学观察鉴定后再用碱性磷酸酶（ALP）染色法鉴定,再行下一步细胞实验。（四）Pg-LPS抑制成骨细胞活性并诱导成骨细胞凋亡1、Pg-LPS抑制成骨细胞活性的实验研究:实验一:以浓度分别为0、25、50、100、500、1000ng/mLPg-LPS进行实验,作用48h后收集细胞进行检测;实验二:用浓度为500ng/mL的Pg-LPS刺激成骨细胞,在不同时间点:0、6、12、24、48、72h后收集细胞进行细胞实验。两组均采用CCK8法检测Pg-LPS对成骨细胞的活性影响。2、Pg-LPS诱导成骨细胞凋亡的实验研究:该实验的分组情况同上述CCK8实验。用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测盒检测Pg-LPS对成骨细胞凋亡的影响。（五）CGRP对Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡的调控作用1、Pg-LPS对CGRP表达的影响:Pg-LPS作用于成骨细胞后分别于0、6、12、24、48h收集细胞进行实验。检测Pg-LPS对成骨细胞CGRP含量的影响。2、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞活性的影响:外源性地加入浓度0、1、10、100、1000n M的CGRP,对同一浓度（500ng/ml）Pg-LPS作用后的成骨细胞进行检测。用CCK8法检测CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞的活性影响。3、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞凋亡的影响:实验共4组:对照组、Pg-LPS组、CGRP组、CGRP+Pg-LPS组进行实验检测,用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒流式细胞学检测CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞的凋亡影响。4、凋亡因子检测CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞活性的调控:上述细胞共培养48h后进行选用Cleaved-Caspase 8、Cleaved-Caspase 3抗体,运用蛋白免疫印迹法检测相关凋亡蛋白。（六）CGRP对Pg-LPS诱导成骨细胞凋亡过程中TNF-a的表达影响1、Pg-LPS对成骨细胞炎症因子的影响:在成骨细胞中加入500 ng/mL Pg-LPS后于0、6、12、24、48h时终止细胞培养,用炎症因子试剂盒检测上清液中Pg-LPS对成骨细胞炎症因子（TNF-a、IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2）的影响。2、CGRP对Pg-LPS作用下的成骨细胞炎症因子的影响:实验分为对照组和Pg-LPS、CGRP、Pg-LPS+CGRP 3个实验组,其中Pg-LPS+CGRP组成骨细胞先用100 n M CGRP作用30min后在加入500 ng/mL Pg-LPS作用48h后终止培养,用炎症因子试剂盒检测上清液中CGRP对Pg-LPS作用下的成骨细胞炎症因子（TNF-a、IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2）的影响。3、CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞肿瘤坏死因子的影响:实验分为对照组、Pg-LPS、CGRP、CGRP+Pg-LPS 3个实验组,检测CGRP对Pg-LPS作用下的成骨细胞后TNF-α的影响。（七）TNF-α在Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡中的作用1、TNF-α及CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞的活性的影响:实验分组:对照组、CGRP、CGRP+Pg-LPS、CGRP+Pg-LPS+TNF-α,分别作用于成骨细胞后用CCK8法检测对成骨细胞活性的影响。2、TNF-α及CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞凋亡的影响:实验分组:对照组、CGRP、CGRP+Pg-LPS、CGRP+Pg-LPS+TNF-α,分别作用于成骨细胞后用Annexin V-FITC/PI法检测对成骨细胞凋亡的影响。3、凋亡因子检测TNF-α及CGRP对Pg-LPS作用下成骨细胞的活性的影响:实验分组:对照组、CGRP、CGRP+Pg-LPS实验组,收集细胞后运用Cleaved-Caspase 8、Cleaved-Caspase 3抗体进行蛋白免疫印迹实验。检测TNF-α的表达。结果:（一）原代成骨细胞的形态学观察小鼠颅骨的细小组织块培养24h后,镜下观察:组织块附近可观察到少数细胞游出;继续培养24h后镜下观察:已有部分细胞开始贴壁,且周围发亮,显示其具有活性。以组织块为中心,细胞分布密集处呈铺路石状,胞体膨大,部分细胞胞浆丰富,胞浆伸长,核偏位,突起细长呈平行样或相嵌状排列。细胞形状不规则,多呈三角形及多角形,也有长梭形。（二）ALP法鉴定原代培养细胞采用碱性磷酸酶（ALP）染色所培养细胞。培养的染色细胞,呈块状或灰黑色颗粒状沉淀,胞质为阳性反应。（三）Pg-LPS抑制成骨细胞活性并诱导成骨细胞凋亡1、Pg-LPS对成骨细胞活性的影响:用不同浓度的Pg-LPS作用于成骨细胞并在48h时检测细胞活性,发现当Pg-LPS在浓度为50 ng/mL时活性开始降低,并且在浓度为100 ng/mL、500 ng/mL、1000 ng/mL时显着降低了成骨细胞的活性（P<0.05）;用浓度500 ng/mL的Pg-LPS刺激成骨细胞后,在0、6、12、24、48、72h这6个不同时间点收集成骨细胞进行的实验结果显示:随着作用时间的递增,成骨细胞的活动明显降低（P<0.01）。2、Pg-LPS对成骨细胞凋亡的影响:不同浓度的Pg-LPS作用于成骨细胞并在48h时检测成骨细胞凋亡率,发现Pg-LPS浓度在50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1000ng/mL时成骨细胞凋亡率明显递增（P<0.05）,浓度在达到500 ng/mL后递增的趋势减缓趋于平衡;用浓度为500 ng/mL的Pg-LPS刺激成骨细胞后在不同的时间点检测成骨细胞凋亡率,结果显示成骨细胞的凋亡率随着作用时间的增加呈现明显递增趋势,细胞凋亡率与Pg-LPS处理的时间呈正相关性,并且在48h时趋于平衡（P<0.01）。（四）CGRP对Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导成骨细胞凋亡的调控作用1、Pg-LPS对CGRP的调控:Pg-LPS作用于成骨细胞后分别于0、6、12、24、48收集细胞进行实验,最后对CGRP含量数据分析。结果显示:CGRP的表达在6h时出现短暂升高,此后,蛋白质含量逐渐降低,并且随着作用时间的递增,CGRP含量明显下降（P<0.01）。2、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞的活性抑制:用不同浓度的CGRP对相同浓度（500ng/ml）Pg-LPS作用下的成骨细胞进行实验。结果显示:CGRP对Pg-LPS有一定的调控作用,当CGRP的浓度为100n M时,CGRP能显着减轻Pg-LPS对成骨细胞活性的抑制（P<0.01）。3、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞凋亡的诱导:本实验用对照组、Pg-LPS、CGRP、CGRP+Pg-LPS共四个组分别处理成骨细胞后用流式细胞仪检测细胞的凋亡,结果显示100n M的CGRP能够显着减弱Pg-LPS诱导的成骨细胞的凋亡率。这一结果与之前的实验结果是一致的（P<0.05）。4、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞的活性的抑制:本实验用对照组、Pg-LPS、CGRP、CGRP+Pg-LPS四组,作用于成骨细胞后,运用Cleaved-Caspase 8、Cleaved-Caspase 3抗体检测细胞凋亡,结果显示:CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞的活性的抑制。（五）CGRP对Pg-LPS诱导成骨细胞凋亡过程中TNF-a的表达影响1、Pg-LPS诱导成骨细胞炎症因子的表达:实验分别在0、6、12、24、48h 5个时间点收集细胞,检测TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2炎症因子的表达。结果显示:与对照组比较Pg-LPS促进TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1和MCP-2的表达,并且呈时间依赖性表达。2、CGRP抑制Pg-LPS对的成骨细胞炎症因子的诱导:本实验检测对照组、Pg-LPS、CGRP、CGRP+Pg-LPS作用于成骨细胞后,细胞炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2）的表达。结果显示:相同浓度的CGRP作用后只有对TNF-α的生成具有显着的变化,而对IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2没有明显变化。3、CGRP抑制Pg-LPS对成骨细胞TNF-α的诱导:实验将对照组、Pg-LPS、CGRP、CGRP+Pg-LPS作用于成骨细胞后细胞炎症因子TNF-α表达。结果显示:CGRP抑制Pg-LPS对的成骨细胞TNF-α的诱导。（六）TNF-α在Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡中的作用1、TNF-α及CGRP作用于Pg-LPS对成骨细胞的活性影响:实验分别用Pg-LPS、Pg-LPS+CGRP、Pg-LPS+CGRP+TNF-α作用于成骨细胞后检测成骨细胞的活性。结果显示:CGRP能够减弱Pg-LPS作用下对成骨细胞的活性抑制,但在有TNF-a存在的情况下,却无法产生抑制作用。可见,TNF-a在Pg-LPS抑制的成骨细胞活性起着一定的作用。2、TNF-α及CGRP作用于Pg-LPS对成骨细胞的凋亡影响:实验分别用Pg-LPS、Pg-LPS+CGRP、Pg-LPS+CGRP+TNF-α作用于成骨细胞后检测成骨细胞的凋亡。结果显示:CGRP能够缓解Pg-LPS作用下细胞的凋亡,但在有TNF-a存在的情况下,却无法产生这种诱导作用。这一结果与之前的实验结果是一致的（P<0.05）。3、CGRP减弱Pg-LPS对成骨细胞的凋亡的调控:本实验检测细胞活性表达。结果显示:CGRP能抑制Pg-LPS导致的Cleaved-Caspase 8、Cleaved-Caspase 3蛋白水平的上调,却无法抑制TNF-a、CGRP、Pg-LPS共培养所上调的Cleaved-Caspase 8和Cleaved-Caspase3的表达。表明:CGRP可以抑制Pg-LPS诱发的凋亡,但这种现象却被TNF-a反转了;推测TNF-a很可能就在CGRP抑制Pg-LPS诱导的成骨细胞凋亡作用中扮演着起逆转作用。结论1:Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导成骨细胞凋亡。2:CGRP减弱Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡的作用。3:CGRP抑制Pg-LPS诱导的成骨细胞TNF-α的表达。4:TNF-α在Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡中起重要的作用,且可以被CGRP逆转。
高艳,王青山[10]（2014）在《神经肽类物质与牙周支持组织及口腔骨修复》文中提出背景:随着对牙周病病因学和神经内分泌研究的深入,神经内分泌因素在牙周病发病及组织修复中的作用成为当今研究的热点。目的:综述神经肽类物质对牙周支持组织的生物学作用,及神经损伤后牙周组织变化的情况。方法:以"神经肽,降钙素基因相关肽,P物质,舒血管肠肽,神经肽Y和牙周组织"为中文关键词,以"Neuropeptide,Calcitonin gene related peptide,substance P,vasoactive intestinal peptide,neuropeptide Y,periodontal"为英文关键词,采用计算机检索CNKI数据库、万方数据库和PubMed数据库,选择有关各类神经肽对牙周支持组织影响的文章进行分析。结果与结论:降钙素基因相关肽、P物质、舒血管肠肽、神经肽Y等相关阳性神经纤维广泛分布在牙周支持组织中,当感觉神经受到损伤后肽能神经分布及神经肽的释放发生改变,作用到牙周支持组织内的的靶细胞,在牙槽骨的改建、牙周韧带及牙周组织免疫功能等各方面发挥作用,这表明神经内分泌因素与牙周组织的关系非常密切,但是,这些相关研究多集中在对正畸和骨折动物模型的研究方面,神经肽等神经递质对牙周病的影响及其具体的作用机制还需要进一步探索。
二、牙周炎患者龈沟液中P物质和降钙素基因相关肽的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、牙周炎患者龈沟液中P物质和降钙素基因相关肽的变化（论文提纲范文）
（1）P物质在牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤中的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物模型 |
| 1.2.2 动物分组 |
| 1.2.3 牙周检查 |
| 1.2.4 苏木精-伊红(HE)染色 |
| 1.2.5 ELISA |
| 1.2.6 血清ALT、AST、BUN、Cr的测定 |
| 1.2.7 巨噬细胞培养及实验 |
| 1.2.8 肺组织病理学评分 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结 果 |
| 2.1 建立牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤的模型 |
| 2.2 NK-1受体拮抗剂改善牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤 |
| 2.3 SP及NK-1受体拮抗剂对于小鼠巨噬细胞活化分泌IL-1β的作用 |
| 3 讨 论 |
（2）微创拔牙技术在下颌埋伏阻生智齿拔除过程中的应用研究（论文提纲范文）
| 资料和方法 |
| 1 一般资料 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 手术方法 |
| 3 观察指标 |
| 4 统计学分析 |
| 结 果 |
| 1 两组骨愈合、颞下颌关节区疼痛情况比较 |
| 2 两组治疗前后龈沟液中炎症介质含量变化 |
| 3 两组治疗前后龈沟液中氧化应激指标含量变化 |
| 4 两组治疗前后龈沟液中疼痛介质含量变化 |
| 5 两组患者术后并发症发生情况 |
| 讨 论 |
（3）高表达CGRP对大鼠骨髓间充质干细胞及RAW264.7生物学作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 rBMSCs的分离培养与鉴定 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 实验二 高表达CGRP基因rBMSCs、RAW264.7的构建 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 实验三 高表达CGRP对炎症环境下rBMSCs生物学作用的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 实验四 高表达CGRP对RAW264.7免疫调节和破骨分化的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 总结及展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 降钙素基因相关肽在骨再生中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 牙周炎概述 |
| 1.1.1 牙周炎的表现及影响 |
| 1.1.2 牙周炎和相关骨缺损的治疗方法及缺陷 |
| 1.1.3 牙周组织炎症与骨代谢失调 |
| 1.2 镁对骨形成的作用 |
| 1.3 镁对炎症的调节作用 |
| 第2章 镁植入物对大鼠实验性牙周炎的作用 |
| 2.1 背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 植入物的制备 |
| 2.2.4 大鼠植入手术与实验性牙周炎模型的建立 |
| 2.2.5 血清镁离子浓度检测 |
| 2.2.6 大鼠颌骨扫描电镜能谱分析 |
| 2.2.7 大鼠颌骨micro CT扫描及牙周骨组织参数测量 |
| 2.2.8 牙周组织及肝肾组织学检测 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 镁植入物的生物安全性 |
| 2.4.2 镁离子向周围组织的扩散 |
| 2.4.3 镁植入物对牙周骨组织的影响 |
| 2.4.4 镁植入物对牙周组织炎症的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 植入材料的制备 |
| 2.5.2 动物模型的建立方法 |
| 2.5.3 镁的生物安全性 |
| 2.5.4 镁离子向周围组织的扩散 |
| 2.5.5 镁植入物对牙周骨组织的影响 |
| 2.5.6 镁植入物对牙周组织炎症的影响 |
| 2.6 结论 |
| 第3章 镁植入物对大鼠牙槽骨的成骨作用及机制研究 |
| 3.1 背景 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 |
| 3.2.4 镁植入物对牙槽骨的成骨作用的影像学和组织学分析 |
| 3.2.5 CGRP在镁植入物诱导的牙槽骨骨膜成骨中的作用 |
| 3.2.6 大鼠牙槽骨骨膜干细胞的培养和鉴定 |
| 3.2.7 细胞增殖实验 |
| 3.2.8 细胞成骨分化实验 |
| 3.2.9 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 镁离子促进牙槽骨骨膜成骨和骨松质成骨 |
| 3.3.2 镁离子促进三叉神经节中CGRP的表达 |
| 3.3.3 CGRP拮抗剂对牙槽骨骨膜成骨无显着抑制作用 |
| 3.3.4 大鼠牙槽骨骨膜干细胞的培养和鉴定 |
| 3.3.5 CGRP对牙槽骨骨膜干细胞增殖和成骨分化无显着促进作用 |
| 3.3.6 镁离子直接促进骨膜干细胞增殖和成骨分化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 镁植入物来源的镁离子促进牙槽骨骨膜成骨 |
| 3.4.2 CGRP对镁引发的牙槽骨骨膜成骨无显着促进作用 |
| 3.4.3 镁离子直接刺激成骨细胞/间充质干细胞成骨 |
| 3.4.4 镁植入物促进骨膜成骨的其他可能机制 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 镁离子对牙周炎环境中骨膜干细胞的作用 |
| 4.1 背景 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.2.3 主要溶液的配制 |
| 4.2.4 免疫组化染色及分析 |
| 4.2.5 ELISA检测 |
| 4.2.6 巨噬细胞系的培养和牙周炎症模型的建立 |
| 4.2.7 牙槽骨骨膜干细胞增殖实验 |
| 4.2.8 牙槽骨骨膜干细胞成骨分化实验 |
| 4.2.9 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 镁离子抑制牙周炎环境中TNF-α的表达 |
| 4.3.2 镁离子在TNF-α模拟的牙周炎环境中对骨膜干细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 镁离子在TNF-α模拟的牙周炎环境中对骨膜干细胞成骨基因表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 植入物来源的镁离子抑制实验性牙周炎中TNF-α的表达 |
| 4.4.2 镁离子和TNF-α对骨膜干细胞增殖的作用 |
| 4.4.3 镁离子和TNF-α对骨膜干细胞成骨分化的作用 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（5）Calca基因启动子区DNA甲基化影响2型糖尿病大鼠ASCs成骨功能的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1.2型糖尿病影响种植修复的原因 |
| 1.1 异常代谢水平 |
| 1.2 氧化应激 |
| 1.3 血管病变 |
| 1.4 成骨异常 |
| 1.5 改善措施 |
| 2.脂肪干细胞的应用前景 |
| 2.1 细胞膜片技术 |
| 2.2 Sema3A分子 |
| 3.DNA甲基化的影响 |
| 3.1 DNA甲基化原理 |
| 3.2 DNA甲基化抑制基因转录的机制 |
| 3.3 DNA甲基化与T2DM的关系 |
| 4.降钙素基因相关肽的生理作用 |
| 4.1 降钙素基因相关肽简介 |
| 4.2 α-CGRP分子的功能 |
| 第一部分 ASCs-T2DM与 ASCs-C对比研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验试剂与材料 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 实验动物及饲料配制 |
| 2.方法 |
| 2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立 |
| 2.2 ASCs提取、分离与培养 |
| 2.3 细胞表面标志物的检测 |
| 2.4 细胞克隆形成率测定 |
| 2.5 细胞生长曲线检测 |
| 2.6 多向分化能力检测 |
| 2.7 qPCR检测成骨相关基因表达 |
| 2.8 Western Blot检测成骨相关蛋白表达 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 2型糖尿病大鼠模型 |
| 3.2 细胞形态观察 |
| 3.3 细胞表面标志鉴定 |
| 3.4 克隆形成率 |
| 3.5 细胞生长曲线测定 |
| 3.6 多向分化能力 |
| 3.7 qPCR结果 |
| 3.8 Western Blot结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 ASCs-T2DM与 ASCs-C全基因组DNA甲基化测序及差异基因的筛选 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验试剂与材料 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 ASCs-T2DM及 ASCs-C培养 |
| 2.2 ASCs DNA的提取 |
| 2.3 样本全基因组DNA的甲基化测序及结果分析 |
| 2.4 DNA启动子区差异化基因的筛选 |
| 2.5 差异基因的表达对比及最终基因筛选 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 细胞形态观察 |
| 3.2 DNA提取结果 |
| 3.3 样本全基因组DNA的甲基化测序结果 |
| 3.4 IGV软件DNA启动子区差异化基因的筛选 |
| 3.5 差异基因的表达对比及最终基因筛选 |
| 4.讨论 |
| 第三部分 CGRP促进ASCs-T2DM成骨分化的功能验证 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验试剂与材料 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 ASCs-T2DM培养 |
| 2.2 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM形态的影响 |
| 2.3 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM成骨功能的影响 |
| 2.4 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM成骨相关基因表达的影响 |
| 2.5 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM增殖能力的影响 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM形态的影响 |
| 3.2 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM成骨染色的影响 |
| 3.3 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM成骨相关基因表达的影响 |
| 3.4 不同浓度CGRP对 ASCs-T2DM增殖能力的影响 |
| 4.讨论 |
| 第四部分 Calca基因启动子区DNA甲基化改变的位点及功能验证 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验试剂与材料 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 ASCs-T2DM培养 |
| 2.2 甲基化抑制剂对ASCs-T2DM形态的影响 |
| 2.3 亚硫酸氢盐扩增子测序 |
| 2.4 q-PCR检测Calca及 DNMT1 的表达 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 ASCs-T2DM形态观察 |
| 3.2 亚硫酸氢盐扩增子测序验证 |
| 3.3 q-PCR检测相关基因表达及机制探讨 |
| 4.讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（6）离断下牙槽神经对大鼠实验性牙周炎的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语说明 |
| 前言 |
| 实验一 改良丝线结扎诱导大鼠实验性牙周炎模型的建立 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验二 离断下牙槽神经对大鼠实验性牙周炎的研究 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验三 离断下牙槽神经加剧大鼠实验性牙周炎的机制研究 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文全文 |
| 学位论文评阁及答辩情况表 |
（7）不同牙周状态下龈沟液及牙龈组织中TREM-1表达的检测（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 实验一 不同牙周状态下牙龈组织中TREM-1 表达的检测 |
| 实验二 不同牙周状态下龈沟液中sTREM-1 水平检测 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 龈沟液成分与牙周病相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）降钙素促进人牙周膜干细胞胶原合成及成骨分化的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分：降钙素表达水平与牙周炎的临床相关性研究 |
| 引言 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分：降钙素促进人PDLSCs胶原合成及成骨分化的作用研究 |
| 引言 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第三部分：降钙素上调TGF-β1表达促PDLSCs胶原合成的机制研究 |
| 引言 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第四部分：降钙素上调BMP表达促PDLSCS成骨分化的机制研究 |
| 引言 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述：降钙素家族和骨形成 |
| 一、降钙素家族成员 |
| 二、降钙素家族的受体 |
| 三、降钙素家族和骨吸收 |
| 四、降钙素家族和成骨 |
| 五、降钙素家族和牙周组织 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（9）CGRP对Pg-LPS诱导的成骨细胞损伤的调控作用和机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 Pg-LPS抑制成骨细胞活性并诱导成骨细胞凋亡 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 CGRP对Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡的调控作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 CGRP对Pg-LPS诱导成骨细胞凋亡过程中TNF-α的表达影响 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 TNF-α在Pg-LPS抑制成骨细胞活性及诱导凋亡中的作用 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 全文讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述（一） Pg-LPS对炎症因子表达的影响研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述（二） CGRP抑制炎症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
（10）神经肽类物质与牙周支持组织及口腔骨修复（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0 引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1资料来源 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 纳入标准: |
| 排除标准: |
| 1.3资料提取与文献质量评估 |
| 2 结果Results |
| 2.1 与牙周组织密切相关的神经肽 |
| 2.1.1降钙素基因相关肽 |
| 降钙素基因相关肽阳性神经纤维在牙周组织中的分布: |
| 降钙素基因相关肽的功能: |
| 2.1.2 P物质 |
| 2.1.3舒血管肠肽 |
| 2.1.4神经肽Y |
| 2.2神经肽与骨代谢 |
| 2.3神经肽与牙周膜细胞 |
| 2.4神经肽与免疫细胞 |
| 2.5神经肽与胶原纤维 |
| 3 讨论Discussion |
| 作者贡献: |
| 利益冲突: |
| 伦理要求: |
| 学术术语: |
| 作者声明: |
四、牙周炎患者龈沟液中P物质和降钙素基因相关肽的变化（论文参考文献）
- [1]P物质在牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤中的作用和机制研究[J]. 刘洋,许莹,董丹江. 口腔医学, 2022(02)
- [2]微创拔牙技术在下颌埋伏阻生智齿拔除过程中的应用研究[J]. 雷飞,倪菁,王丹杨. 临床口腔医学杂志, 2020(06)
- [3]高表达CGRP对大鼠骨髓间充质干细胞及RAW264.7生物学作用的研究[D]. 闫凯娴. 山东大学, 2020(02)
- [4]植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究[D]. 何薇. 南昌大学, 2020(08)
- [5]Calca基因启动子区DNA甲基化影响2型糖尿病大鼠ASCs成骨功能的研究[D]. 王蕾. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [6]离断下牙槽神经对大鼠实验性牙周炎的影响研究[D]. 于西佼. 山东大学, 2017(08)
- [7]不同牙周状态下龈沟液及牙龈组织中TREM-1表达的检测[D]. 薛珍珠. 福建医科大学, 2017(07)
- [8]降钙素促进人牙周膜干细胞胶原合成及成骨分化的作用机制研究[D]. 蔚一博. 第二军医大学, 2016(12)
- [9]CGRP对Pg-LPS诱导的成骨细胞损伤的调控作用和机制研究[D]. 周燕. 第三军医大学, 2016(06)
- [10]神经肽类物质与牙周支持组织及口腔骨修复[J]. 高艳,王青山. 中国组织工程研究, 2014(11)