一、铅和乙醇联合作用对大鼠精子的影响(论文文献综述)
张继伟[1](2021)在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究》文中研究表明背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%~30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症(肾虚肝郁型)具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组(62例)和对照组(62例)。试验组给予金龟毓麟方(制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g)。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液(国药准字:H19990372),服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子(PR)、精子总活力(PR+NP);次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集(PPS)数据进行统计分析。1.主要疗效指标:(1)PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异(P>0.05):治疗8周、12周后可提高PR级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组(P<0.05)。(2)PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组(P<0.05)。2.次要疗效指标:(1)中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异(P>0.05);与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分(P<0.05)。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组(P<0.05)。(2)精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异(P>0.05)。(3)精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异(P>0.05)。(4)受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异(P>0.05)。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑(Omidazole,ORN)诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、中剂量组、高剂量组)、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/(kg.d)ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/(kg.d)ORN;左卡尼汀组 100mg/(kg·d)+400mg/(kg·d)ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/(kg.d)ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素(FSH、LH、T)、肝肾功(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:(1)大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异(P<0.05)。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组(P<0.05)。(2)大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异(P>0.05)。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:(1)大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异(P>0.05)。(2)大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降(P<0.05)。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数(P<0.05)。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)改变均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.400 mg/(kg·d)ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)及性激素(FSH、LH、T)无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、高剂量组),灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高(P<0.01),SOD与GSH-Px含量降低(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低(P<0.05),SOD与 GSH-Px 含量均升高(P<0.05,P<0.01)。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:(1)线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP):与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率(P<0.05,P<0.01)。(2)线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异(P>0.05);高剂量组可提高精子线粒体ATP含量(P<0.01)。3.线粒体自噬相关指标变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(2)与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(3)与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(4)与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。(5)与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01);低剂量组TOM20蛋白表达增高(P<0.05)。(6)与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。结论:1.400mg/(kg·d)ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
滕增光[2](2021)在《piRNA-DQ765261/Bcl-xL和AMPK/ULK在镉诱导生精细胞自噬中的作用》文中认为目的:研究镉对生精细胞自噬的影响及其可能机制。方法:1、镉暴露对睾丸组织piRNA表达的影响及靶基因预测利用随机数字表将6只6周龄SD大鼠均分为对照组和实验组,适应性喂养7天后,实验组采用3mg/kg·day的CdCl2溶液进行灌胃染毒,对照组灌胃同等剂量蒸馏水,连续染毒28天后收集睾丸组织;使用Trizol法提取右侧睾丸组织中总RNA;再利用Arraystar Rat piRNA Array RN4基因芯片进行杂交测序,检测差异表达的piRNA;然后使用RT-q PCR验证piRNA的表达情况;最后通过GO富集分析和KEGG通路分析寻找差异表达的piRNA的靶基因。以此探寻镉暴露对睾丸组织piRNA表达的影响及靶基因预测。2、piRNA-DQ765261/Bcl-x L和AMPK/ULK在镉致GC-2spd细胞自噬中的作用首先使用CCK-8实验确定CdCl2对小鼠初级精母细胞(GC-2spd)的半数致死剂量,确定后续实验的染毒浓度;再使用化学荧光法检测不同剂量镉诱导细胞生成ROS;然后使用透射电镜观察镉诱导细胞产生的自噬体;最后利用Western Blot技术检测自噬相关蛋白(Beclin1和LC3Ⅱ/I)表达水平,自噬信号通路相关蛋白(p-AMPKα,Bcl-x L和p-ULK1)表达水平。通过这些实验从形态和分子水平探讨镉诱导精母细胞自噬的具体分子机制。结果:1、镉暴露对睾丸组织piRNA表达的影响及靶基因预测(1)基因芯片结果显示CdCl2(3mg/kg·day)暴露的大鼠睾丸组织中有272个piRNA表达上调,402个piRNA表达下调(Fold Change>2,P<0.05);(2)挑选差异表达较大的4个上调piRNA和4个下调piRNA验证,RT-q PCR结果显示3个上调的piRNA(DQ765261、DQ737820和DQ614103)表达结果与基因芯片结果一致,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);综合基因芯片和RT-q PCR结果,发现表达差异最大的piRNA是piRNA-DQ765261。(3)通过GO富集分析发现,piRNA-DQ765261靶基因主要参与以DNA为模板的转录调控、神经元分化的正调控、细胞对葡萄糖饥饿的反应、凋亡过程的负调控、细胞增殖、细胞对缺氧的反应等46个生物学过程(P<0.05);靶基因结合特征的分析结果表明,piRNA-DQ765261与Bcl-x L有结合位点。2、piRNA-DQ765261/Bcl-x L和AMPK/ULK在镉致GC-2spd细胞自噬中的作用(1)CdCl2对于GC-2spd细胞的半数致死剂量为13.36μmol/L,后续实验分为对照组(无血清培养基中不含CdCl2)和3个实验组(无血清培养基中分别含2.5,5,10μmol/L CdCl2);(2)经CdCl2染毒24h后,相比于对照组,实验组(2.5,5,10μmol/L CdCl2)细胞内自噬体和自噬溶酶体数量都增加;(3)与对照组相比,2.5和10μmol/L CdCl2组细胞内的ROS增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(4)检测自噬相关蛋白发现,与对照组相比,实验组Beclin1表达水平呈现剂量依赖性升高,仅10μmol/L CdCl2组的差异有统计学意义(P<0.05);实验组LC3Ⅱ/I表达呈剂量依赖性升高,5和10μmol/L CdCl2组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(5)检测自噬信号通路相关蛋白发现,与对照组相比,实验组p-AMPKα蛋白表达呈现剂量依赖性升高,5和10μmol/L CdCl2组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);实验组p-ULK1表达水平呈剂量依赖性增加,10μmol/L CdCl2组差异有统计学意义(P<0.05);实验组Bcl-x L蛋白表达呈现剂量依赖性下降,5和10μmol/L CdCl2组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:1、镉体内暴露可诱导大鼠睾丸组织中的piRNA(DQ765261、DQ737820和DQ614103)表达上调,其中piRNA-DQ765261可能通过其靶基因Bcl-x L,参与生精细胞的自噬过程。2、镉体外暴露可诱导GC-2spd细胞发生自噬。Cd可诱导细胞内ROS增加,一方面ROS可能通过piRNA-DQ765261调节Bcl-x L蛋白表达下调,另一方面ROS可能激活了AMPK/ULK信号通路;共同促进Beclin1的表达,从而诱导自噬。
陈益钦[3](2021)在《砷暴露与卵巢储备功能减退(DOR)的关联性及其对卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响》文中研究表明目的探讨卵泡液金属元素与卵巢储备功能减退发病之间的关联,并进一步通过细胞实验及动物实验探究砷暴露对卵巢类固醇激素合成的影响及其机制。方法第一部分卵泡液金属元素与DOR的关联性研究采用以医院为基础的病例-对照研究,收集2019年1月至2020年12月在我校附属省妇幼保健院行辅助生殖技术的DOR患者及对照组的临床基础数据和卵泡液。ICP-MS检测卵泡液中21种金属元素含量;主成分分析用于观察一般聚类趋势和异常值;正交偏最小二乘判别分析用于验证PCA模型并识别各组之间浓度不同的元素;Person相关检验各金属元素之间的相关关系;单因素及多因素Logistic回归分析分析金属元素与DOR之间的关联;多重线性回归分析卵泡液金属元素与血清激素水平的相关性。第二部分砷暴露对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响分离2019年1月至2020年12月在我校附属妇幼保健院行辅助生殖技术的非卵巢性不孕患者的卵巢颗粒细胞,用0、0.5、1、2和4μM亚砷酸钠染毒24 h后,CCK8检测细胞增殖活力;ELISA检测培养液中孕酮和雌二醇水平;RT-PCR和Western blot测定人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因m RNA及蛋白水平。第三部分断乳至性成熟期砷暴露对大鼠卵巢类固醇激素合成的影响及机制探讨40只清洁级初断乳雌性Wistar大鼠,21日龄,体重(49.8±4.7)g。按体重随机分成4组,每组10只,经水暴露亚砷酸钠0、2、10和50 ppm至性成熟。35日龄时,进行阴道涂片检测大鼠的动情周期。干预结束后取卵巢称重并计算脏器系数;HE染色观察卵巢组织学变化并计算各级卵泡构成比;ELISA测定血清E2和P4水平;RT-PCR和Western blot测定卵巢类固醇激素合成相关基因的m RNA和蛋白表达水平;RT-PCR测定DNMTs的m RNA表达水平;BSP检测SF-1基因启动子区的DNA甲基化水平。结果第一部分卵泡液金属元素与DOR的关联性研究病例组年龄较大,血清FSH水平高于对照组(P<0.05),但T和AMH水平低于对照组(P<0.05);病例组卵泡液中As、Mo、Sr和Ca含量显着高于对照组(P<0.05),Cu、Zn、Ti、Cr、Mg和Fe含量显着低于对照组(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,卵泡液中多种金属元素之间存在线性相关关系;PCA和OPLS-DA分析结果表明,病例组卵泡液中的金属元素轮廓发生了显着的变化,VIP>1的金属元素有:Sr、Mg、Zn、Cu、As和Mo;单因素及多因素Logistic回归分析结果表明,卵泡液中As、Sr和Ca与DOR发病风险有关。第二部分砷暴露对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响人卵巢颗粒细胞砷暴露24 h后,各剂量组的E2水平均显着下降,但P4水平无明显改变;与对照组相比,2μM和4μM组的HSD3β1显着下调(P<0.05);2μM和4μM亚砷酸砷暴露会显着降低人卵巢颗粒细胞St AR和CYP11A1的蛋白表达(P<0.05)。第三部分断乳至性成熟期砷暴露对大鼠卵巢类固醇激素合成的影响及其机制断乳至性成熟期砷暴露后,高剂量组卵巢脏器系数显着下降,且中剂量组的子宫脏器系数显着上升(P<0.05);砷暴露对大鼠的阴道开放时间无显着影响(P>0.05),但会显着改变大鼠的动情周期,具体表现为延长中、高剂量组的动情前期(P<0.05),缩短中剂量组的动情间期(P<0.05),并显着延长高剂量组的动情周期总时长(P<0.05);各剂量组的卵泡构成比发生明显的改变(χ2=115.03)。与对照组相比,高剂量组的原始卵泡构成比显着降低(2.85%vs.7.79%),此外,各剂量组的有腔卵泡以及闭锁卵泡呈现剂量依赖的下降(11.11%vs.19.20%,9.11%vs.19.20%及5.07%vs.19.20)和上升(56.41%vs.43.60%,57.35%vs.57.35%及66.09%vs.43.60%),差异均具有统计学意义(P<0.001)中、高剂量砷暴露可以显着提高大鼠血清E2水平,且呈现显着的剂量-反应关系(Ptrend<0.001);与对照组相比,中、高剂量组的St AR和HSD3β1的m RNA表达显着下调(P<0.001),各剂量组的CPY19A1和SF-1 m RNA水平均显着降低(P<0.001);与对照组相比,各剂量组的St AR蛋白表达水平均显着性升高(P<0.05),并呈现出明显的剂量关系(Ptrend<0.001);中、高剂量组的CYP17A1、HSD3β1和SF-1蛋白表达显着上升(P<0.05);与对照组相比,低、高剂量组DNMT3a的m RNA表达水平显着升高(P<0.05)。此外,高剂量组的DNMT3b的m RNA表达也显着上升(P<0.05),但DNMT1在各剂量组中均无显着改变(P>0.05);各剂量组的SF-1启动子区总DNA甲基化水平分别为65.71%、60.38%、68.00%以及72.38%,经χ2检验分析后发现低、高剂量组的DNA甲基化率与对照组之间存在显着差异(χ2=1.918,P=0.001),主要表现为高剂量在+17bp位点的甲基化水平显着升高(P<0.05),低剂量在-184bp位点的甲基化水平显着降低。结论1.DOR患者血清激素水平发生显着改变,且其卵泡液金属谱与正常女性之间存在显着的差别,这些具有显着性差异的金属可能与DOR的发病及其血清激素紊乱有关;2.砷暴露可通过影响类固醇激素合成关键酶的表达,进而影响人卵巢颗粒细胞类固醇激素的合成;3.SF-1是砷暴露致类固醇激素合成障碍的重要靶点;高剂量砷可通过显着提高SF-1启动子区的DNA甲基化水平来降低SF-1的m RNA表达,但SF-1可能存在转录后的调控机制使得其蛋白表达显着上升,从而促进卵巢E2的分泌,最终导致卵泡池的过早损耗;低、中剂量组可能通过其他途径来影响SF-1的表达。
吕建芳[4](2021)在《肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究》文中认为目的建立SD雄性大鼠肾精亏虚模型,以骨髓造血干细胞为切入点,观察其凋亡情况,研究肾精亏虚对骨髓造血功能的影响,探讨其作用机制。观察龟鹿二仙胶对肾精亏虚骨髓抑制性贫血大鼠的治疗效果,通过其对大鼠的血象、骨髓象以及骨髓造血干细胞凋亡的影响,分析其“从肾论治”治疗肾精亏虚引起的骨髓抑制性贫血的作用机制。方法1、理论研究:系统回顾古今文献,阐述肾精、髓、血的中医理论研究及现代医学研究,立足肾精、髓以及血之间的关系,为肾精亏虚导致贫血提供中医理论依据。剖析龟鹿二仙胶的组方以及总结补肾填精法的现代医学临床应用。2、动物实验:SD雄性大鼠30只,SPF级,8周龄,体重270±20g,随机分为空白组、模型组、补肾组,每组10只。采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓以及长期小剂量苯皮下注射和短期大剂量环磷酰胺腹腔注射,建立肾精亏虚大鼠模型。整个造模过程用时49天。前4周模型组和补肾组大鼠按体质量皮下隔天注射苯(lm L/kg),第25d开始用环磷酰胺(25mg/kg)腹腔注射,连续注射3d,同时每天用仿地震平台模拟地震振动(2次/日,共15-20分钟)以及光电刺激箱足底电击刺激(每日不定时1-3次)。空白组正常喂养。在第4周最后一天随机抽取模型组和补肾组各1只大鼠查外周血象及血清睾酮,检测模型是否成功。第29天开始,补肾组用龟鹿二仙胶灌胃,根据大鼠与人体表面积折算剂量比值,灌胃剂量为11g/Kg,分两次灌胃。给药期间每隔一天称重,根据体重调整给药剂量,连续21天。模型组和空白组大鼠给予等量去离子水灌胃,连续21天。造模过程中,每天观察各组大鼠的皮毛、进食量、活动状态等一般情况。造模结束后,每组大鼠通过眼内眦静脉取血法测外周静脉血红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB),观察其贫血程度;采用ELISA检测血清睾酮T以及用精子分析仪检测附睾精子质量,评价其生殖功能;取睾丸组织包埋切片,HE染色,观察其形态学的改变;分离胫骨,取新鲜骨髓,用PBS制备单细胞悬液,采用血红细胞计数板计数单核细胞数;取新鲜骨髓,制成骨髓涂片,瑞氏-吉姆萨染色,观察骨髓细胞的形态学改变;股骨包埋、切片,HE染色,观察骨髓增生情况;取新鲜骨髓包埋超薄切片,观察其超微病理改变。采用ELISA法检测各组EPO的含量;用流式细胞仪以及TUNEL法检测各组大鼠骨髓组织CD34+细胞凋亡情况;采用WB法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Faslm RNA的表达水平。3、统计学处理:各组组间进行比较,所得数据均以均数±标准差(sx?)表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,单因素方差分析组间比较,采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)与正常组相比,模型组大鼠出现毛发干枯、耸立不齐、进食量下降,活动度减少等现象。补肾组大鼠毛发恢复光泽、进食量增加、活动度增加,肾虚症状得到改善。(2)与空白组比较,模型组血红细胞(RBC)数量、血红蛋白(HGB)含量从14d开始下降,有显着性差异(p<0.01);与模型组比较,补肾组血红细胞(RBC)数量、血红蛋白(HGB)含量从42d开始升高,有显着性差异(p<0.05)。(3)与空白组比较,模型组血清EPO含量下降,有显着性差异(P<0.01);与模型组比较,补肾组血清EPO含量升高,有显着性差异(P<0.01)。(4)睾丸病理切片显示,空白组睾丸曲细精管被膜完整,支持细胞形态正常,曲细精管管腔内可见大量精子;模型组曲细精管生精上皮明显变薄,细胞层次杂乱,支持细胞形态断裂,曲细精管管腔内精子细胞、精子数量明显减少;补肾组曲细精管被膜完整,细胞排布紧密,生精细胞数略有减少,部分区域可见脱落的少量生精细胞,但结构清楚,层次较分明,管腔内有较多精子。(5)与空白组比较,模型组附睾精子浓度及精子活力均下降(P<0.05);模型组血清T含量明显下降(P<0.01);与模型组比较,补肾组附睾精子浓度及精子活力均明显升高(P<0.01),补肾组血清T含量升高,有显着性差异(P<0.01)。(6)骨髓象显示,与空白组比较,模型组骨髓有核细胞数量减少(P<0.05);与模型组比较补肾组骨髓有核细胞数量增加,有显着性差异(P<0.05)。骨髓涂片可见空白组骨髓造血结构完整,组织丰富;模型组骨髓增生降低,巨核细胞减少;补肾组造血网织红细胞虽增加,但仍没有恢复正常水平。骨髓病理切片显示:空白组造血细胞多且分布均匀,骨髓造血组织支架结构紧密,脂肪细胞数量少;模型组造血组织面积减少,巨核细胞少见,造血细胞数目减少,内皮细胞、脂肪细胞等非造血细胞数目增多;补肾组造血结构组织基本修复,巨核细胞增多,造血细胞增加,仍可见脂肪细胞等非造血细胞。(7)骨髓超微病理形态学检测示:空白组大鼠可见造血干细胞为圆形,单核,核大,细胞质少,可见线粒体,线粒体内膜折叠成较深的嵴。模型组大鼠造血干细胞可见线粒体数量减少,嵴变浅或消失,线粒体肿胀,可见凋亡小体。补肾组大鼠造血干细胞有核细胞增多,凋亡小体少见,线粒体的数量增多,线粒体嵴有所恢复。(8)与空白组比较,骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测发现模型组可见较多凋亡CD34+细胞的绿色荧光点,流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的数量明显增加(P<0.05);与模型组比较,补肾组石蜡包埋切片TUNE L法检测骨髓组织绿色荧光点数量减少,流式细胞仪检测CD34+细胞凋亡的数量降低(P<0.05)。(9)WB检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白表达结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白含量表达降低(P<0.05),Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾组Bcl-2蛋白含量表达升高(P<0.05),Bax、caspase-3、Fa s和Fasl蛋白含量表达均减少(P<0.05)。(10)RT-PCR检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织Bcl-2、Bax、caspase-3、Fa s和Faslm RNA含量与空白组比较,模型组Bcl-2m RNA含量降低(P<0.05),Baxm RNA、caspase-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾组Bcl-2m RNA蛋白含量升高(P<0.05),Baxm RNA、caspa se-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均减少(P<0.05)。结论“肾藏精,生髓,化血”,肾藏先天之精,肾气促脾胃化生水谷精微而藏之,而“精血同源”,肾精是化生血液的重要物质基础。肾精亏虚则血液化生无源而导致血虚。肾主人体发育,也主骨髓生长发育,肾精充足,则骨髓充盈,反之肾精不足,骨髓空虚。骨髓具有化生血液的作用,髓化生血液主要取决于肾的功能,肾精亏虚则会导致骨髓功能低下,化生血液出现障碍而致血虚。本课题基于中医“肾藏精、精生髓,髓生血,精化血”理论,以肾精亏虚则会导致血虚为实验的病理依据,以造血干细胞作为切入点。研究肾精亏虚对造血功能的影响及其作用机制。以“恐伤肾”传统病因造模结合药物干预病理造模,采用模拟地震平台复合光电刺激法结合长期小剂量的苯和短期大剂量的环磷酰胺药物干预,建立肾精亏虚大鼠模型。大鼠出现肾虚症状,血液检查可以看到血红细胞数量和血红蛋白含量降低,血清EPO含量下降,血清睾酮含量降低。骨髓象可以见到骨髓有核细胞数量减少,骨髓造血组织结构疏松、造血面积减少、造血细胞减少。超微病理形态学可以观察到骨髓造血干细胞线粒体肿胀,线粒体嵴变浅,出现凋亡小体的超微病理改变。龟鹿二仙胶灌胃治疗后,能够改善肾精亏虚的症状,促进血红细胞数量和血红蛋白含量增高,血清EPO含量升高,血清睾酮含量增加,骨髓有核细胞数量增加,骨髓造血组织得到修复。骨髓造血干细胞线粒体数量增加,凋亡小体减少,减少骨髓CD34+细胞的凋亡。本实验结论归纳如下:(1)利用“仿地震平台及光电刺激+苯+环磷酰胺”成功建立肾精亏虚雄性大鼠模型。(2)肾精亏虚大鼠血清EPO含量下降,骨髓组织抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白、Bcl-2m RNA含量下降,促凋亡蛋白Bax蛋白及Baxm RNA表达增加,激活了线粒体/细胞色素c通路,发生级联效应,激活Caspase-3蛋白,诱导骨髓CD34+细胞的凋亡。骨髓Fas和Fasl蛋白及Fas和Faslm RNA含量升高,激活了死亡受体途径,激活Caspase-3蛋白,诱导CD34+细胞细胞的凋亡。CD34+细胞过度凋亡,骨髓造血干细胞活性降低,可能是肾精亏虚导致骨髓抑制影响骨髓造血功能的机制之一。(3)首次采用龟鹿二仙胶治疗肾精亏虚,改善骨髓造血功能。龟鹿二仙胶能有效缓解肾精亏虚大鼠的症状,治疗骨髓抑制性贫血有效。提高血清EPO含量,促进抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达,抑制促凋亡蛋白Bax蛋白、Fas和Fasl蛋白的表达,减少Caspase-3蛋白的表达,抑制CD34+细胞的凋亡,从而保护造血干细胞。刺激骨髓造血干细胞的增殖,避免其发生过度凋亡,可能是龟鹿二仙胶发挥其疗效机制之一。(4)从生成来源和生物学功能来看,EPO可能是肾精的物质基础之一。(5)造血干细胞是肾精在细胞层次的表现形式,是“肾精化血”功能的执行者。
常征辉[5](2021)在《益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究》文中研究说明少弱精子症是常见的男性不育疾病之一,其发病率在近些年逐年升高,亟需安全有效的治疗手段。西医治疗本病存在一定的局限性,疗效欠佳,中医药在男性不育的防治方面有独特优势。益肾兴阳胶囊作为一种中成药,早期主要用于治疗阳痿早泄,现在越来越广泛地用于治疗少弱精子症,因此研究并揭示益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制具有重要意义。然而,目前尚未对其整体的药效机理形成全面的认识,为此迫切需要有效的研究思路和方法来对其药效物质基础及作用机制进行研究,指导临床安全、合理地用药。论文包括文献综述、网络药理学预测和实验研究。文献综述系统总结了近年来中医药对少弱精子症的研究进展,探讨了传统中医药对少弱精子症的认识、中医辨证分型、中药复方研究等进展;从现代医学角度探讨了少弱精子症的病因、睾丸生精功能的调控机制、治疗方法等。以上内容的探讨,为本课题顺利开展做了铺垫。研究目的:本研究拟通过网络药理学预测益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键靶点、生物通路等相关机制,为动物实验药效机制研究奠定基础。设计动物实验,观察益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型精子质量、生精细胞凋亡、增殖分化、以及精子能量代谢的影响,阐述其作用机制,为益肾兴阳胶囊组方用药及作用机制提供实验探索。研究方法:1.网络药理学通过多个中药成分与靶标数据库收集和筛选益肾兴阳胶囊的化学成分,构建益肾兴阳胶囊作用靶点PPI网络(protein protein interaction network,PPI network);同时从疾病基因数据库对少弱精子症靶点进行检索及筛选;并将疾病基因映射到PPI网络,获取益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点;构建益肾兴阳胶囊来源中药-成分-靶点-模块-通路网络,通过富集分析预测益肾兴阳胶囊的潜在作用机制。2.实验研究。复制环磷酰胺诱导的少弱精子症小鼠模型,采用精液分析、电镜、流式细胞、Western Blot等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、精子腺嘌吟核苷三磷酸(Adenosine triphosphate,ATP)含量、生精细胞周期、睾丸超微结构、睾丸组织 B 细胞淋巴瘤-2 基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)、磷脂酶肌醇 3-激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase,PI3k)、蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)、干细胞因子(Stem Cell Factor,SCF)、C-Kit 原癌基因(C-Kit proto-oncogeneprotein,C-Kit)、A 细胞凋亡信号调节激酶 1(Apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、c-JunN 端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)表达的检测。复制雷公藤多苷诱导的少弱精子症大鼠模型,采用精液分析、ELISA、流式细胞、RT-PCR等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、性激素水平、线粒体膜电位、睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路蛋白、电压依赖性阴离子通道2(Voltage-dependent anion channel 2,VDAC2)、电压依赖性阴离子通道 3(Voltage-dependent anion channel 3,VDAC3)、细胞周期检查点激酶 1(Cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)、细胞周期检查点激酶 2(Cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2)蛋白表达的检测。研究结果:1.网络药理学共得到益肾兴阳胶囊418个化学成分、2447个靶点和少弱精子症134个致病基因;其中17个靶点为益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点,它们参与了 8个关键模块;中药-成分-靶点-模块-通路网络分析发现,其中有57个成分参与调控了关键的作用靶点和关键模块,有可能影响生精细胞凋亡、增殖分化和精子能量代谢。2.动物实验首先模型建立成功,与正常对照组相比,模型动物少弱精子症成立。小鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症小鼠模型精子质量和精子ATP含量(P<0.01);睾丸组织超微结构与模型组相比,益肾兴阳胶囊各组生精细胞、支持细胞线粒体明显增多,轻微肿胀,并且可见正常形态高尔基体,睾丸超微结构改善明显。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症小鼠模型生精细胞周期、睾丸组织Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达(P<0.05)。大鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症大鼠模型精子质量、性激素水平和精子线粒体膜电位(P<0.05)。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路、VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达(P<0.05)。通过动物实验,验证了网络药理学相关的生物学通路预测。研究结论:1.益肾兴阳胶囊可以显着提高少弱精子症模型精子质量并改善睾丸组织超微结构损伤情况。2.益肾兴阳胶囊可以抑制少弱精子症模型生精细胞凋亡,具体机制可能与调控 Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达有关。3.益肾兴阳胶囊可以改善睾丸的生精功能,促进生精细胞增殖分化,具体机制可能与调控TGF-β1/Smads信号转导通路以及CHK1、CHK2蛋白表达有关。4.益肾兴阳胶囊可以增强少弱精子症模型精子能量代谢,具体机制可能与提高线粒体膜电位、增强VDAC2、VDAC3蛋白表达有关。综上所述,本研究证实了益肾兴阳胶囊具有补肾精、促生殖的治疗效果,也揭示了益肾兴阳胶囊通过抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖分化、增强精子能量代谢治疗少弱精子症的相关作用机制。
汪坤[6](2021)在《铜锌/锌铜合金作为活性节育器选材的体内外生物相容性研究》文中认为非意愿妊娠是当前全球所面临的重要公共健康问题,因多以人工流产方式结局,严重影响育龄女性的生殖健康,尤其是反复多次终止妊娠的女性。采取合适的避孕措施是保护女性生殖健康的重要手段。含铜宫内节育器(Copper-containing intrauterine device,Cu-IUD)是当今全球使用率较高的避孕方法之一,具有安全、长效、可逆、方便、经济等特点。然而置入初期的铜离子(Cupric ion.Cu2+)爆释和腐蚀表面粗糙所引起的下腹不适、异常出血和疼痛等问题是停用Cu-IUD的主要原因。目前,Cu-IUD在宫内节育器械研发方面占据了主体。为了降低Cu-IUD副作用,本论文向金属铜(Copper,Cu)中引入生物活性物质锌(Zinc,Zn),制备了 Cu-38Zn(锌含量为38%)合金,并以工业H62(商业黄铜)为对照。锌作为人体的第二丰富的微量元素,参与众多的酶催化和代谢过程。锌离子(Zinc ion,Zn2+)具有避孕、伤口愈合以及抗菌等功能。此外,Cu2+和Zn2+结合对细胞毒性有拮抗作用,在抗菌活性有协同作用。因此,在降低不良反应的方面,Zn具有很大的潜力和广阔的应用前景。早在1969年,Zipper在动物实验中发现Cu、Zn等金属盐具有避孕作用。随着材料科学和医学的快速发展,生物医用可降解锌合金研发有了新的突破,在骨科材料和心血管支架领域均有研究报道。本论文尝试研制了 Zn-0.5Cu(铜含量为0.5%)和Zn-1Cu(铜含量为1%)合金用于IUD领域,一方面是评估锌合金作为活性金属IUD材料的可行性,另一方面是扩宽现有活性金属IUD材料选择。本论文通过体外长期浸泡实验、细胞毒性实验和体内植入实验等系统研究了铜基和锌基合金材料的体内外腐蚀性能、离子释放特性、生物相容性以及避孕效果。1.铜锌合金主要研究结果:体外模拟宫腔液离子释放的研究表明,纯Cu和H62材料初始Cu2+释放速率为38.91±4.24 μg/day和21.53±2.11μg/day,而Cu-38Zn材料为12.24±0.56 μg/day,相比于纯Cu和H62,Cu-38Zn材料可以明显降低初期Cu2+的爆释,后期可维持0.68±0.14 μg/day的速率稳定释放。Zn2+伴随着Cu2+的释放,呈现相同趋势变化。体内外腐蚀性能的研究表明,相比于纯Cu,Cu-38Zn和H62材料在宫腔微环境表现出良好的耐腐蚀性能。三组材料表面的粗糙程度:Cu-38Zn<H62<纯Cu。Cu-38Zn材料表的腐蚀产物较少,且没有观察到明显的脱落。体外细胞毒性和体内大鼠子宫组织病理学研究表明,相比于纯Cu和H62材料,Cu-38Zn材料的细胞毒性显着降低,子宫内膜的刺激较轻,子宫内膜修复速率较快,细胞相容性和组织相容性明显优于纯Cu和H62。抗生育实验研究表明,Cu-38Zn和H62材料的避孕有效率与纯Cu材料无明显差异。2.锌铜合金主要研究结果体外浸泡实验中,Zn-0.5Cu和Zn-1Cu材料浸泡初期和后期Zn2+的平均释放速率明显高于纯Zn。浸泡样品表面观察发现,三种材料表面可见的腐蚀产物随浸泡时间延长逐渐积累增多,且腐蚀产物形貌存在一定的差异。电化学实验显示Zn-0.5Cu和Zn-1Cu材料的腐蚀速率明显高于纯Zn。体外细胞毒性和体内大鼠子宫组织病理学研究表明,Zn-0.5Cu和Zn-1Cu材料的细胞毒性和组织反应性有显着的差别,相比于纯Zn,Zn-1Cu材料具有较好的细胞形容性和组织相容性,而Zn-0.5Cu材料则相反。抗生育实验研究表明,纯Zn、Zn-0.5Cu和Zn-1Cu三组材料均表现出良好的避孕效果。通过上述研究结果表明,Cu-38Zn合金可以显着降低初期Cu2+爆释,材料表面粗糙度低,能够促进子宫组织修复,可以大幅度减轻传统Cu-IUD的副作用,有望成为一种新型低副作用IUD材料。Zn-1Cu合金表现出较为良好的生物相容性和避孕效果,具有成为新型可降解IUD材料的潜力。
胡素芹[7](2021)在《基于TLR/MyD88/NF-κB通路研究五子衍宗丸对热应激诱发睾丸炎症反应的影响》文中认为背景在精子发生的过程中,生精细胞会产生许多具有免疫原性的蛋白,却并没有诱发睾丸内天然免疫反应,这有赖于睾丸免疫豁免功能,它与天然免疫共同调控并维持着睾丸内免疫环境平衡,保证精子发生的顺利进行。迄今为止,多种因素被报道影响男性生殖能力,其中温度甚至被认为是生殖活动和睾丸稳态的重要调节器。研究表明,高温严重影响着男性精子发生和精子质量,甚至导致男性不育。一般阴囊的温度比腹腔温度低2~7℃,才能保证睾丸内精子发生的正常进行。但在日常生活中,男性阴囊温度容易受到生活方式、坐姿、职业等因素影响。大量研究表明,睾丸局部热应激不仅可诱发生精细胞的凋亡,还影响支持细胞和血睾屏障的功能。支持细胞和血睾屏障是免疫豁免的重要物质基础。这提示我们热应激后,睾丸局部豁免功能受到影响,热应激损伤与内源性睾丸炎的发生密切相关。然而,关于热应激对睾丸内免疫豁免和免疫稳态的影响尚未见报道。五子衍宗丸是补肾代表方,中医临床上常用于治疗男性不育,能有效提高精子计数和活力,并且在免疫调控方面的研究也被广泛报道。课题组前期研究发现五子衍宗丸能够抑制生精细胞凋亡,维持支持细胞和血睾屏障功能,有效改善热应激生精障碍。在上述基础上,本研究首次探讨了热应激对睾丸免疫环境的影响及五子衍宗丸对该过程的调控作用和机制,旨在揭示睾丸热应激生殖障碍涉及的免疫学机制及五子衍宗丸干预睾丸热应激损伤的作用靶点,为中医药治疗非感染性睾丸炎提供实验依据。方法1.实验一五子衍宗丸对单次热处理大鼠睾丸免疫环境的作用:①35只雄性SD大鼠按照体重随机分为5组,即对照组(Controlgroup)、模型组(Modelgroup)、五子衍宗丸低剂量组(L-dosegroup)、五子衍宗丸中剂量组(M-dosegroup)和五子衍宗丸高剂量组(H-dosegroup),每组有大鼠7只。五子衍宗丸(低、中、高)组的大鼠分别按照每天0.5 g/kg、1 g/kg、2g/kg的剂量,给予五子衍宗丸药液灌胃(灌胃体积:1 ml/100g);对照组和模型组则给予同样体积的生理盐水,连续操作灌胃15天。在第15天时,五组大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠(40~50 mg/kg)麻醉后,将模型组、五子衍宗丸低、中、高剂量组的大鼠睾丸置于43℃恒温水浴锅中热处理20分钟,对照组的大鼠睾丸置于室温。24h后,大鼠麻醉,腹主动脉取血,摘取双侧睾丸。②采用QAH-CAA-640芯片法检测睾丸内细胞因子TNF-α、MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4的表达变化;采用蛋白免疫印迹法(western blot)检测睾丸内Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化NF-κBp65、磷酸化IκB-α的表达;实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测睾丸内TAM(Tyro3、Axl和MerTK)受体mRNA的表达。旨在初步探讨单次热处理对睾丸在免疫方面的影响,以及五子衍宗丸对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的作用。2.实验二持续热处理诱发大鼠睾丸内免疫炎症反应:①36只雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只,即对照组、20 min×3d组、20 min × 5 d组、20 min × 7 d组、30 min × 3 d组、30 min × 5d组。经戊巴比妥钠麻醉后,对照组的大鼠置于室温,另外5组大鼠每天进行43℃恒温水浴20分钟或30分钟。待大鼠苏醒后,放入笼中继续饲养。热水浴20分钟的大鼠在连续热处理3天、5天和7天后取材,热水浴30分钟的大鼠在连续热处理3天和5天后取材。各组大鼠摘取双侧睾丸和附睾,腹主动脉取血。②大鼠、睾丸和附睾称重后,按照脏器系数%=睾丸或附睾重量/体重公式来计算睾丸和附睾脏器系数;精子自动分析仪检测各组大鼠附睾内精子数量和精子活力;酶联免疫吸附(ELISA)法检测睾丸内MCP-1、TNF-α和IL-6的表达变化;western blot技术检测大鼠睾丸内紧密连接蛋白 ZO-1、occludin 和 claudin11、TLR4、MyD88、磷酸化 NF-κB p65、磷酸化IκB-α、Tyro3、Axl、MerTK以及SOCS1/3的表达,以观察不同强度和时间热处理对大鼠精子参数、睾丸内炎症因子、紧密连接、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路以及睾丸免疫负调控分子TAM受体和SOCS1/3的作用。3.实验三五子衍宗丸对热应激诱发睾丸炎症反应的作用和机制研究:①35只雄性SD大鼠随机分为5组,每组有大鼠7只,分组同实验一。五子衍宗丸(低、中、高)给药组按照实验一给予不同浓度的复方灌胃;对照组和模型组则给予同样体积的生理盐水,连续灌胃15天。从灌胃的第11天开始,模型组、五子衍宗丸低剂量组、五子衍宗丸中剂量组和五子衍宗丸高剂量组的大鼠睾丸置于43℃恒温水浴锅中热处理30分钟,对照组的大鼠置于室温。连续热处理5天后,各组大鼠麻醉后,摘取双侧附睾和睾丸,腹主动脉取血。②采用透射电镜观察睾丸内组织细胞及紧密连接结构;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测睾丸内TLR1~5、TLR10~11m RNA的表达变化;其余检测指标及检测方法同实验二。结果1.实验一:单次热处理组的大鼠睾丸内MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α的表达显着增加,Tyro3、Axl和MerTK的mRNA表达显着下降;五子衍宗丸抑制MyD88表达,阻断NF-κB信号通路,并上调TAM受体基因表达;但各组间促炎因子TNF-α、MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4以及TLR4表达变化没有统计学差异。2.实验二:①热处理后,大鼠体重持续下降,睾丸系数和附睾系数也减少,热处理20 min组并未随着天数增加而显着减少,其中在30 min×5d减少的最多;②热处理20 min连续3天组精子数量和活力有下降趋势;随着热处理天数的增加,精子数量和活力持续下降;相同热处理天数下,睾丸热处理30 min 比 20 min下降的更多,20 min × 7d组与30 min × 5 d组间的差异没有统计学意义。③睾丸内IL-6的表达仅在20 min × 7 d组和30 min × 5 d组显着增加;TNF-α和MCP-1的表达在20 min × 5 d组、20 min × 7 d组和30 min × 5 d组显着增加。热处理后睾丸内紧密连接蛋白(ZO-1、occludin和claudin11)、TAM 受体及 SOCS1/3 的表达均明显减少,而 TLR4、MyD88、p-NF-κB 和p-IκB-α、p-p38MAPK的表达均显着增多,但30 min × 5 d组表达差异最显着。3.实验三:①五子衍宗丸可增加持续热应激大鼠睾丸和附睾系数及精子数量,增强精子活力,改善睾丸内部超微结构,提高紧密连接蛋白(ZO-1、occludin和claudin11)表达来维持BTB完整性;②持续性热处理后,睾丸内炎症因子(IL-6、TNF-α和MCP-1)分泌增多,TLR2、TLR4和TLR5的mRNA表达量显着上升,TLR1、TLR3、TLR10和TLR11的mRNA表达量变化没有统计学意义;TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达显着增加,而五子衍宗丸可抑制上述炎症因子的增加及TLR2或TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活;③持续性热处理后睾丸内TAM受体和SOCS1/3的表达减少,而五子衍宗丸显着上调了它们的表达。结论1.局部单次热处理(43℃,20min)不能引起睾丸内的炎症反应,但上调了 MyD88表达并激活了NF-κB信号通路,还抑制了TAM受体的表达。五子衍宗丸对三者均有显着的调控作用。2.大鼠睾丸连续热处理(43℃,20 min或30 min)5天以上才能促进炎症因子IL-6、TNF-α和MCP-1表达,诱发由TLR2或4/MyD88/NF-κB或p38MAPK信号通路介导的睾丸炎症反应,破坏睾丸内免疫稳态,这与连续热处理后TAM/SOCS负调控分子表达被抑制及BTB被严重破坏密切相关。此外,与热处理20 min × 7 d相比,30 min ×5 d组的指标分子表达变化更显着。3.对于热应激(43℃,30 min × 5d)诱发的睾丸炎,五子衍宗丸可通过直接抑制TLR2/4的表达;或通过上调TAM受体和SOCS1/3,进而减少TRAF6表达和TAK1磷酸化来间接阻断TLR2或4/MyD88/NF-κB信号通路,并恢复BTB结构功能,最终抑制炎症因子表达,降低组织细胞损伤,维持睾丸免疫环境平衡。
刘宇轩[8](2021)在《基于ERK1/2-CREB信号途径研究卡马西平对雄性大鼠的生殖毒性》文中研究表明目的观察卡马西平对正常雄性大鼠生殖毒性,从影响睾酮合成及ERK1/2-CREB信号通路角度,分析卡马西平产生生殖毒性的可能作用机制,为临床安全用药提供实证依据。方法取120只6~8周龄,体重200~220g的雄性SD级大鼠适应性饲养一周,随机分为正常对照组和卡马西平50、100、200、400 mg/kg剂量组,每组24只。各组按剂量灌胃给药,连续给药90天,正常组给予等容量蒸馏水。分别于卡马西平给药30、60、90天以及停药30天称重取材,每次实验前禁食不禁水12h,3%水合氯醛麻醉动物,腹主动脉采血,摘取睾丸、附睾等脏器。计算脏器系数、检测精子活率及活力;酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血液以及睾丸组织性激素睾酮(Testoserone,T)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(Estradiol,E2)、催乳素(Prolactin,PRL)和孕酮(Progesterone,P)六项;苏木精伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察睾丸组织病理变化;免疫组化(Immunohistochemistry)染色观察StAR、3β-HSD、17β-HSD在睾丸组织上表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测睾丸组织StAR、3β-HSD、17β-HSD、ERK1/2、CREB、p-ERK1/2、p-CREB蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测睾丸组织ERK1/2、CREBmRNA表达情况。结果1.卡马西平对大鼠脏器系数影响:连续灌胃90天,卡马西平各组与正常组相比睾丸重量和睾丸脏器系数减小,其中200、400mg/kg剂量组下降明显,具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。2.卡马西平对大鼠精子质量及睾丸病理的影响:连续灌胃90天以及停药30天后,卡马西平各组与正常组相比精子活动率、精子活力均明显降低,差异均具有统计学意义(p<0.05或p<0.01),其中以400mg/kg组精子活率及活力降低最为显着。与正常组比较,卡马西平各组睾丸出现不同程度的病变,生精小管上皮退化,各级生精细胞排列紊乱,部分间质细胞空泡化,其中400mg/kg剂量组病变明显。3.卡马西平对大鼠血清及睾丸组织性激素水平影响:血清性激素六项水平结果显示,连续灌胃90天,与正常组相比卡马西平给药各组T水平明显降低,并随药物浓度升高呈梯度性下降,差异具有统计学意义(p<0.05),停药30天后,给药各组与正常组相比T水平下降,且停药后各组T水平与给药90天时相比无明显差异;LH、FSH水平于给药30、60、90天时明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05),停药30天后,给药各组与正常组相比LH、FSH水平下降,且停药后各组LH、FSH水平与给药90天时相比无明显差异。睾丸组织性激素六项水平结果显示,连续灌胃90天,与正常组相比卡马西平给药各组T、P水平明显降低,给药组T水平在30、60、90天时随药物浓度升高呈梯度性下降,P水平在60、90天时随药物浓度升高呈梯度性下降,差异具有统计学意义(p<0.05),停药30天后,给药各组与正常组相比T、P水平下降,且停药后各组T、P水平与给药90天时相比无明显差异;LH、FSH水平于给药30、60、90天时明显升高,差异具有统计学意义(p均<0.05),停药30天后,给药各组与正常组相比LH、FSH水平下降,且停药后各组LH、FSH水平与给药90天时相比无明显差异。4.卡马西平对大鼠睾丸睾酮合成相关蛋白StAR、3β-HSD、17β-HSD的影响:连续给药90天,与正常组比较,卡马西平给药各组StAR、3β-HSD、17β-HSD蛋白表达显着降低,且随药物浓度升高呈梯度性下降,差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。5.卡马西平对大鼠ERK1/2-CREB信号通路的影响:连续给药90天,与正常组比较,卡马西平给药各组ERK1/2、CREBmRNA含量显着降低,差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。给药各组ERK1/2、CREB、p-ERK1/2、p-CREB蛋白表达降低,差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。结论卡马西平对正常雄性大鼠的生殖系统具有明显毒性,其作用机制之一可能是通过调控ERK1/2-CREB信号通路转导,抑制了间质细胞睾酮合成相关酶蛋白的表达导致睾酮合成减少,从而应激HPT轴产改变了激素及相关受体水平,最终导致大鼠精子质量下降。
邓维泽[9](2016)在《保健食品金钗石斛葛杞丸开发与研究》文中认为贵州赤水优越的自然生态环境孕育出了丰富的道地中药材金钗石斛,它已成为当地农民的主要经济收入,但主要以初级加工中药材出售,附加价值不高,本课题主要围绕提高贵州赤水道地中药材金钗石斛的附加价值,开发以金钗石斛为主要原料的保健食品,带动当地经济发展。本课题在传统中医药理论的基础上,依据古方化载,借鉴现代食品科学及毒理学试验评价方法,以金钗石斛为君药,配伍枸杞子、葛根、五味子,开发具有增强免疫力和对化学性肝损伤有辅助保护作用的金钗石斛葛杞丸,主要适用于免疫力低下者和具有化学性肝损伤危险的人群。本论文详细的阐述了金钗石斛葛杞丸的处方依据,较为系统的对其制备工艺、质量标准、稳定性及安全性进行了研究。依据中医古方及现有的研究报道结果,理论性的确定了金钗石斛葛杞丸的处方(一天服用量)为金钗石斛2.4g、枸杞子3.6g、葛根3.6g、五味子1.2g。根据工艺特点、处方药材有效成分性质及其功效主治,以石斛碱、粗多糖含量和干浸膏得率为考察指标,采用正交试验设计并结合综合评分法,对金钗石斛、枸杞子、五味子混合药材的醇提工艺及水提工艺进行了优化,其最佳工艺条件为:95%乙醇浸泡3h至透心后,10倍量95%乙醇回流提取3次、每次提取1.5h,过滤,合并醇提液后减压浓缩(80℃,-0.07Mpa-0.08Mpa)至相对密度为1.15(80℃)的清膏备用;药渣再加10倍量水、煎煮提取2次、每次提取2h,过滤,合并水提液,减压浓缩至(80℃,-0.07Mpa-0.08Mpa)相对密度为1.15(80℃)的清膏,与上述醇提清膏合并,减压干燥(80℃,-0.07Mpa-0.08Mpa),粉碎成120目的浸膏粉。加入120目的葛根细粉,混合均匀,以70%乙醇为润湿剂,制软材、出条、分粒、搓丸,于温度55℃,真空度-0.08Mpa下干燥12h,即得金钗石斛葛杞丸。中试生产三批样品,其三批样品的平均成品率达96.4%。通过检验检测金钗石斛葛杞丸的理化指标、微生物指标、标志性成分,并参照GB16740、GB 2763、GB 29921和《中华人民共和国药典》初步建立了金钗石斛葛杞丸的质量标准,并对金钗石斛丸粗多糖的检测方法进行了方法学考察,最终根据技术要求起草了金钗石斛葛杞丸质量标准文本。在质量标准中,规定金钗石斛葛杞丸标志性成分粗多糖(以葡萄糖计)≥2.0(g/100g),葛根素≥1.5(g/100g)。金钗石斛葛杞丸质量稳定,在温度37±2℃,相对湿度75±5%的条件下贮存3个月,以粗多糖和葛根素为主的功效成份含量及卫生指标基本保持不变,各项指标仍然符合规定,暂定产品保质期为24个月。金钗石斛葛杞丸对大、小鼠急性经口毒性试验结果MTD值均>15000mg/kg.BW,按急性毒性分级,属无毒级;三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸形试验)结果未见金钗石斛葛杞丸致突变作用;30天喂养试验发现大鼠的每周体重、每周进食量、每周食物利用率、总食物利用率、脏体比值、血液学指标、末期血生化指标检测结果及组织病理学检查与对照组比较,均在正常值范围内。这安全性试验研究结果充分说明金钗石斛丸能够安全食用。
谭成森,靳翠红,刘秋芳,赵剑,蔡原[10](2006)在《铅和乙醇对雄性大鼠生殖系统的联合毒作用》文中研究表明采用整体动物实验方法,观察铅和乙醇对大鼠精子数量和质量,以及血中性激素水平的联合作用。结果显示,精子计数联合组比铅和乙醇单独作用组显着减少;精子活动度分析联合组与其他各组比较显着下降。铅和乙醇单独作用均可使雄性大鼠血清睾酮(T)升高,促黄体生成激素(LH)下降,联合作用使T降低,LH较单独作用组升高。提示铅和乙醇联合染毒对雄性大鼠生殖毒性影响可能具有增毒作用。
二、铅和乙醇联合作用对大鼠精子的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、铅和乙醇联合作用对大鼠精子的影响(论文提纲范文)
(1)金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文缩略语 |
第一部分 文献综述 |
综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
1. 男性不育症中医病名认识 |
2. 男性不育症病因病机 |
3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
参考文献 |
综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
1. 特发性弱精子症流行病学 |
2. 特发性弱精子症诊断 |
3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
3.1 氧化应激损伤 |
3.2 线粒体功能障碍 |
3.3 表观遗传学作用 |
3.4 基因异常 |
3.5 精子蛋白组差异 |
3.6 翻译后修饰 |
3.7 环境因素 |
3.8 不良生活方式 |
3.9 精神心理因素 |
4. 特发性弱精子症的治疗 |
4.1 一般治疗 |
4.2 药物治疗 |
4.3 辅助生殖技术 |
参考文献 |
第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
前言 |
1. 研究伦理 |
2. 研究对象 |
2.1 病例来源 |
2.2 诊断标准 |
2.3 纳入标准 |
2.4 排除标准 |
2.5 中止/退出标准 |
2.6 中止/退出病例的处理 |
3. 研究方法 |
3.1 分组及样本量计算 |
3.2 研究用药及疗程 |
3.3 观察指标及观察时点 |
3.4 精液采集及精液分析 |
4. 统计学分析 |
5. 研究结果 |
5.1 试验入组及完成情况 |
5.2 一般资料分析 |
5.3 有效性分析 |
5.4 安全性分析 |
6. 讨论 |
7. 小结 |
参考文献 |
第三部分 实验研究 |
实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
前言 |
1. 材料与方法 |
1.1 动物伦理 |
1.2 实验动物 |
1.3 主要实验仪器 |
1.4 主要实验试剂与药品 |
1.5 实验方法 |
1.6 实验检测指标 |
1.7 统计学分析 |
2. 结果 |
2.1 大鼠一般情况变化 |
2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
2.4 大鼠精子浓度变化 |
2.5 大鼠精子活力变化 |
2.6 大鼠性激素水平变化 |
2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
3. 讨论 |
3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
4. 小结 |
实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
前言 |
1. 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要实验仪器 |
1.3 主要实验试剂 |
1.4 实验方法 |
1.5 实验检测指标 |
1.6 统计学分析 |
2. 结果 |
2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
3. 讨论 |
4. 小结 |
参考文献 |
结论 |
创新点 |
不足与展望 |
致谢 |
个人简历 |
附件 |
附件1 |
附件2 |
中医药科技查新报告书 |
(2)piRNA-DQ765261/Bcl-xL和AMPK/ULK在镉诱导生精细胞自噬中的作用(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
英文缩写对照表(Abbreviations) |
前言 |
第一章 镉对大鼠睾丸中piRNA表达的影响及piRNA靶基因预测 |
1.1 材料和方法 |
1.1.1 主要试剂与仪器 |
1.1.2 实验方法 |
1.2 结果 |
1.2.1 CdCl_2暴露对大鼠睾丸piRNA表达影响 |
1.2.2 筛选验证CdCl_2暴露后大鼠睾丸组织差异性表达的piRNA |
1.2.3 piRNA-DQ765261 预测的靶基因的GO功能注释 |
1.2.4 piRNA-DQ765261 预测靶基因的KEGG通路分析 |
1.3 讨论 |
第二章 piRNA-DQ765261/Bcl-x L和 AMPK/ULK在镉诱导GC-2spd细胞自噬中的作用 |
2.1 材料和方法 |
2.1.1 实验试剂 |
2.1.2 实验仪器设备 |
2.1.3 主要试剂的配置 |
2.1.4 实验方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 CCK-8 法测定细胞活力 |
2.2.2 CdCl_2对GC-2spd细胞自噬的影响 |
2.2.3 CdCl_2对GC-2spd细胞ROS的影响 |
2.2.4 CdCl_2对GC-2spd细胞Bcl-x L、p-AMPKα、p-ULK1、Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平的影响 |
2.3 讨论 |
2.3.1 CdCl_2可诱导GC-2spd细胞自噬 |
2.3.2 CdCl_2可通过ROS诱导GC-2spd细胞自噬 |
2.3.3 CdCl_2可通过ROS调控piRNA-DQ76526#1BclxL和AMPKULK1诱导GC-2spd细胞自噬 |
第三章 结论与展望 |
致谢 |
参考文献 |
综述 自噬对精子发生的调节作用 |
参考文献 |
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 |
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 |
(3)砷暴露与卵巢储备功能减退(DOR)的关联性及其对卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响(论文提纲范文)
英文词汇缩写列表 |
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 卵泡液金属元素与DOR的关联性研究 |
引言 |
1 材料与方法 |
1.1 研究方法 |
1.2 研究对象 |
1.3 资料收集 |
1.4 卵泡液收集 |
1.5 卵泡液金属元素含量检测 |
1.6 统计学分析 |
2 结果 |
2.1 研究对象的一般情况 |
2.2 血清激素水平与卵巢储备功能减退的关系 |
2.3 卵泡液中金属元素与卵巢储备功能减退的关系 |
2.4 卵泡液中金属元素之间的相关性 |
2.5 卵泡液金属元素谱变化情况 |
2.6 卵泡液金属元素的Logistic回归分析 |
2.7 卵泡液金属元素的多因素Logistic回归分析 |
2.8 血清激素与金属元素的多元线性回归分析 |
3 讨论 |
第二部分 砷暴露对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响 |
引言 |
1 材料与方法 |
1.1 人卵巢颗粒细胞 |
1.2 主要耗材 |
1.3 主要试剂 |
1.4 主要仪器设备 |
1.5 主要试剂配制 |
1.6 人卵巢颗粒细胞分离与培养 |
1.7 人卵巢颗粒细胞染砷处理 |
1.8 细胞增殖-毒性检测 |
1.9 人卵巢颗粒细胞培养液激素水平测定 |
1.10 人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因m RNA测定 |
1.11 人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因蛋白测定 |
2 结果 |
2.1 不同时间点砷暴露对人卵巢颗粒细胞增殖活力的影响 |
2.2 砷暴露对人卵巢颗粒细胞激素生成的影响 |
2.3 砷暴露对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因m RNA表达的影响 |
2.4 砷暴露对人颗粒细胞类固醇激素合成相关基因蛋白表达的影响 |
3 讨论 |
第三部分 断乳至性成熟期砷暴露对大鼠卵巢类固醇激素合成的影响及机制探讨 |
引言 |
1 材料与方法 |
1.1 主要试剂和仪器 |
1.2 实验方法 |
2 结果 |
2.1 砷暴露对大鼠饮水、摄食及体重的影响 |
2.2 砷暴露对大鼠脏器系数的影响 |
2.3 砷暴露对大鼠阴道开放时间及动情周期的影响 |
2.4 砷暴露对大鼠卵巢组织形态及卵泡构成比的影响 |
2.5 砷暴露对大鼠血清激素水平的影响 |
2.6 砷暴露对大鼠卵巢激素合成关键酶m RNA表达的影响 |
2.7 砷暴露对大鼠卵巢SF-1 及激素合成关键酶蛋白表达的影响 |
2.8 砷暴露对SF-1 基因启动子区甲基化水平的影响 |
2.9 砷暴露对DNMTs m RNA表达水平的影响 |
3 讨论 |
全文结论 |
参考文献 |
综述 砷暴露对生殖系统影响的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
(4)肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
前言 |
第一部分 理论研究 |
1 肾藏精理论研究 |
1.1 肾精的生成来源 |
1.2 肾精的功能 |
1.3 肾精的现代医学研究 |
2 “髓”的理论研究 |
2.1 “髓”的含义及生理功能 |
2.2 “髓”的生成与肾精 |
2.3 “骨髓”的现代医学研究 |
3 “血”的研究理论 |
3.1 血的涵义及生理功能 |
3.2 血的生成与肾精 |
3.3 贫血的现代医学研究 |
4 补肾方龟鹿二仙胶 |
5 结语 |
第二部分 实验研究 |
实验1 肾精亏虚对SD雄性大鼠造血功能影响的实验研究 |
1 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验药物 |
1.3 主要实验试剂 |
1.4 主要仪器及耗材 |
1.5 造模方法及分组、给药 |
1.6 检测指标及方法 |
1.7 统计方法 |
2 实验结果 |
2.1 一般情况 |
2.2 红细胞数量(RBC)、血红蛋白(HGB)含量比较 |
2.3 血清促红细胞生成素(EPO)、睾酮(T)含量比较 |
2.4 附睾精子质量比较 |
2.5 睾丸组织病理学比较 |
2.6 骨髓象比较 |
3 讨论 |
3.1 肾精亏虚大鼠模型的建立 |
3.2 肾精亏虚大鼠造血组织形态学的改变 |
3.3 肾精亏虚对血清EPO含量的影响 |
实验2 肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血细胞及CD34+细胞凋亡的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 动物及分组 |
1.2 造模方法 |
1.3 药物及灌胃 |
1.4 仪器设备及试剂 |
1.5 检测指标 |
1.6 统计方法 |
2 结果 |
2.1 各组大鼠骨髓造血干细胞的超微病理形态学观察 |
2.2 流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的结果 |
2.3 骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测CD34+细胞凋亡结果 |
3 讨论 |
实验3 肾精亏虚对SD雄性大鼠导致骨髓造血细胞凋亡的机制研究 |
1 材料与方法 |
1.1 动物及分组 |
1.2 造模方法 |
1.3 药物及灌胃 |
1.4 仪器、试剂及耗材 |
1.5 检测指标 |
1.6 统计方法 |
2 结果 |
2.1 骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和 Fasl蛋白表达结果 |
2.2 骨髓 Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas 和 FaslmRNA RT-PCR 结果 |
3 讨论 |
3.1 肾精亏虚对大鼠骨髓Fas/Fasl蛋白表达的影响 |
3.2 肾精亏虚对大鼠骨髓Bcl-2、Bax蛋白及Bcl-2m RNA、Baxm RNA表达的影响 |
3.3 肾精亏虚对大鼠骨髓Caspase-3 表达的影响 |
讨论 |
1.肾精亏虚与贫血的关系 |
2.肾精亏虚大鼠模型建立评估 |
3.肾精亏虚对骨髓造血功能影响的可能机制 |
4.龟鹿二仙胶改善骨髓造血功能的作用机制 |
结论 |
展望与不足 |
参考文献 |
附录 |
1 综述 肾虚与贫血关系的研究进展 |
参考文献 |
2 发表论文 |
致谢 |
(5)益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
文献综述 |
综述一 中医药对少弱精子症的研究进展 |
1. 中医药对少弱精子症的认识 |
2. 中医病因及辨证分型 |
3. 中药复方研究 |
参考文献 |
综述二 现代医学对少弱精子症的研究进展 |
1. 少弱精子症的病因 |
2. 睾丸生精细胞增殖分化相关机制 |
3. 少弱精子症的西医治疗 |
4. 小结 |
参考文献 |
第一部分 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的网络药理学预测 |
1. 引言 |
2. 方法与材料 |
2.1 益肾兴阳胶囊活性成分筛选及作用靶点预测 |
2.2 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症PPI网络的构建 |
2.3 功能模块分析及作用机制解析 |
3. 结果 |
3.1 益肾兴阳胶囊化学成分筛选、作用靶点和疾病靶点预测结果 |
3.2 少弱精子症和益肾兴阳胶囊蛋白互作网络构建 |
3.3 功能模块分析结果 |
3.4 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制和有效成分分析 |
3.5 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的活性成分验证 |
4. 讨论 |
5.结论 |
参考文献 |
第二部分 益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型治疗作用与机制的实验研究 |
第一章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型的实验研究 |
第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子质量影响 |
参考文献 |
第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子ATP影响 |
参考文献 |
第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型生精细胞周期影响 |
参考文献 |
第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织生精细胞、支持细胞超微结构影响 |
第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织PI3K、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响 |
参考文献 |
第二章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型的实验研究 |
第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子质量影响 |
参考文献 |
第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型血清性激素影响 |
参考文献 |
第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子线粒体膜电位影响 |
参考文献 |
第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路影响 |
参考文献 |
第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达的影响 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
个人简介 |
(6)铜锌/锌铜合金作为活性节育器选材的体内外生物相容性研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 铜锌合金在宫腔微环境下的腐蚀性能和生物相容性研究 |
第一节 铜锌合金在模拟宫腔液中的腐蚀性能研究 |
1.1 引言 |
1.2 材料与方法 |
1.3 结果 |
1.4 讨论 |
第二节 体外细胞相容性研究 |
2.1 引言 |
2.2 材料与方法 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
第三节 动物植入实验 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
小结 |
第二部分 锌铜合金在宫腔微环境下的腐蚀性能和生物相容性研究 |
第一节 锌铜合金在模拟宫腔液下的腐蚀性能研究 |
1.1 引言 |
1.2 材料与方法 |
1.3 结果 |
1.4 讨论 |
第二节 体外细胞相容性测试 |
2.1 引言 |
2.2 体外细胞相容性实验 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
第三节 动物植入实验 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
小结 |
结论 |
研究工作的创新性和局限性 |
参考文献 |
综述 锌在抗生育领域的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
缩略词表 |
(7)基于TLR/MyD88/NF-κB通路研究五子衍宗丸对热应激诱发睾丸炎症反应的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
一 文献综述 |
综述一 五子衍宗丸免疫调控功能的研究进展 |
1. 中药调控机体免疫系统的依据 |
2. 五子衍宗丸中的单味药及其提取物对免疫的影响 |
3. 五子衍宗丸对免疫调节的研究 |
4. 结语 |
参考文献 |
综述二 Toll样受体信号通路对雄性生殖系统的作用 |
1. Toll样受体分子的结构和细胞定位 |
2. Toll样受体激活及其信号传导途径 |
3. 在雄性生殖系统的表达和调控 |
4. 中药对Toll样受体通路的调控作用 |
5. 结语 |
参考文献 |
二 实验研究 |
前言 |
第一章 五子衍宗丸对单次热处理睾丸免疫微环境的作用 |
第一节 概述 |
第二节 材料和方法 |
第三节 结果 |
第四节 讨论 |
第二章 持续热处理诱发大鼠睾丸内免疫炎症反应 |
第一节 概述 |
第二节 实验部分 |
第三节 结果 |
第四节 讨论 |
第三章 五子衍宗丸对热应激诱发睾丸内炎症反应的作用和机制研究 |
第一节 概述 |
第二节 材料和方法 |
第三节 结果 |
第四节 讨论 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
个人简历 |
(8)基于ERK1/2-CREB信号途径研究卡马西平对雄性大鼠的生殖毒性(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文词缩略表(Abreviation) |
前言 |
第一部分 卡马西平对于雄性大鼠生殖毒性作用 |
1 实验材料 |
1.1 动物 |
1.2 药物 |
1.3 主要试剂 |
1.4 仪器 |
2 实验方法 |
2.1 动物分组与给药 |
2.2 标本采集 |
2.3 检测指标 |
2.3.1 脏器系数测定 |
2.3.2 精子计数、精子活动率及活力测定 |
2.3.3 血清及睾丸组织性激素含量测定 |
2.3.4 睾丸组织病理检查 |
2.4 统计学分析 |
3 实验结果 |
3.1 卡马西平连续用药90 天对大鼠体重及脏器系数的影响 |
3.2 卡马西平连续用药90 天对大鼠精子计数、精子活率及活力的影响 |
3.3 卡马西平连续用药90 天对大鼠血清及睾丸组织性激素水平的影响 |
3.4 卡马西平连续用药90 天对大鼠睾丸组织结构影响 |
3.5 卡马西平停药30 天对大鼠精子质量及睾丸组织激素水平影响 |
4 小结 |
第二部分 卡马西平对于雄性大鼠睾酮合成及ERK1/2-CREB信号通路影响 |
1 实验材料 |
1.1 动物 |
1.2 药物 |
1.3 主要试剂 |
1.4 主要仪器 |
2 实验方法 |
2.1 动物分组与给药 |
2.2 检测指标 |
2.2.1 免疫组化染色睾丸组织StAR、3β-HSD、17β-HSD表达 |
2.2.2 蛋白免疫印迹检测睾丸组织St AR、3β-HSD、17β-HSD、ERK1/2、CREB、p-ERK1/2、p-CREB表达 |
2.2.3 实时qPCR法检测睾丸组织ERK1/2、CREBmRNA表达 |
2.3 统计学分析 |
3 结果 |
3.1 卡马西平对正常雄性大鼠睾丸St AR、3β-HSD、17β-HSD表达影响 |
3.1.1 免疫组化测定卡马西平对正常雄性大鼠睾丸组织St AR、3β-HSD、17β-HSD表达影响 |
3.1.2 采用Western印迹法检测睾酮合成关键酶蛋白的表达水平 |
3.2 卡马西平对大鼠睾丸ERK1/2、p-ERK1/2、CREB、p-CREB表达影响 |
3.3 卡马西平对大鼠睾丸ERK1/2、CREBmRNA表达影响 |
4 小结 |
全文总结 |
1 实验结果 |
2 讨论 |
2.1 ERK1/2-CREB信号通路与雄性生殖系统关系 |
2.1.1 ERK1/2-CREB信号通路 |
2.1.2 ERK1/2-CREB信号通路与睾酮合成关系 |
2.1.3 ERK1/2-CREB信号通路影响Leydig Cells合成睾酮 |
2.2 睾酮水平与下丘脑-垂体-睾丸轴关系 |
2.3 抗癫痫药生殖毒性动物模型研究进展 |
参考文献 |
综述 抗癫痫药物对男性生殖系统的影响研究进展 |
参考文献 |
个人简介 |
攻读学位期间发表论文情况 |
致谢 |
(9)保健食品金钗石斛葛杞丸开发与研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 绪论 |
1.1 保健食品开发研究现状 |
1.1.1 保健食品的起源与发展 |
1.1.2 保健食品的定义 |
1.1.3 国内保健食品审批及开发情况 |
1.2 金钗石斛丸开发的意义 |
1.3 金钗石斛丸开发的意义 |
2 金钗石斛葛杞丸处方及依据 |
2.1 金钗石斛丸处方 |
2.1.1 金钗石斛 |
2.1.2 葛根 |
2.1.3 枸杞子 |
2.1.4 五味子 |
2.2 处方依据 |
2.3 剂型选择依据 |
3 制备工艺研究 |
3.1 材料、仪器和试剂 |
3.1.1 材料 |
3.1.2 主要仪器 |
3.1.3 主要试剂 |
3.2 工艺路线初步确定 |
3.3 指标性成分的测定 |
3.3.1 干浸膏得率测定 |
3.3.2 石斛碱的测定 |
3.3.3 粗多糖的测定 |
3.4 提取工艺研究 |
3.4.1 吸醇率的测定 |
3.4.2 正交试验优化醇提工艺 |
3.4.3 正交试验优化水提工艺 |
3.5 浓缩与干燥 |
3.6 丸剂的制备 |
3.6.1 软材制备 |
3.6.2 制条 |
3.6.3 分粒、搓丸 |
3.6.4 干燥、选丸 |
3.7 制备工艺流程图 |
3.8 中试研究 |
4 质量标准及稳定性研究 |
4.1 材料、仪器和试剂 |
4.1.1 材料 |
4.1.2 主要仪器 |
4.1.3 主要试剂 |
4.2 金钗石斛葛杞丸质量标准初步建立 |
4.2.1 性状 |
4.2.2 检查 |
4.2.3 粗多糖的测定 |
4.2.4 粗多糖测定方法学考察 |
4.2.5 质量标准文本编制 |
4.3 金钗石斛葛杞丸稳定性研究 |
5 金钗石斛葛杞丸安全性研究 |
5.1 材料和方法 |
5.1.1 试验样品 |
5.1.2 实验动物 |
5.1.3 剂量选择与受试物给予方式 |
5.1.4 主要仪器与试剂 |
5.1.5 试验方法 |
5.1.6 试验数据统计分析方法 |
5.1.7 结果判定方法 |
5.2 结果与分析 |
5.2.1 急性经口毒性试验 |
5.2.2 Ames试验 |
5.2.3 骨髓细胞微核试验 |
5.2.4 精子畸形试验 |
5.2.5 30天的喂养试验 |
5.3 小结 |
结论 |
参考文献 |
附录A |
附录A.1 保健食品与其他食品、药品的区别 |
附录A.2 既是食品又是药品物品名单 |
附录A.3 可用于保健食品的物品名单 |
附录A.4 金钗石斛葛杞丸质量标准 |
攻读硕士学位期间发表论文及科研成果 |
致谢 |
(10)铅和乙醇对雄性大鼠生殖系统的联合毒作用(论文提纲范文)
1 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要试剂与仪器 |
1.3 实验方法 |
1.3.1 动物分组及染毒 |
1.3.2 睾丸及附睾脏器系数的测定 |
1.3.3 血清铅含量测定 |
1.3.4 精子检查 |
1.3.5 血清性激素的测定 |
1.4 数据处理 |
2 结果 |
2.1 动物体重与睾丸、附睾脏器系数及血铅浓度 |
2.2 精子质量与数量检查及血清性激素水平 |
3 讨论 |
四、铅和乙醇联合作用对大鼠精子的影响(论文参考文献)
- [1]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]piRNA-DQ765261/Bcl-xL和AMPK/ULK在镉诱导生精细胞自噬中的作用[D]. 滕增光. 武汉科技大学, 2021(01)
- [3]砷暴露与卵巢储备功能减退(DOR)的关联性及其对卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的影响[D]. 陈益钦. 福建医科大学, 2021(02)
- [4]肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究[D]. 吕建芳. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究[D]. 常征辉. 北京中医药大学, 2021(02)
- [6]铜锌/锌铜合金作为活性节育器选材的体内外生物相容性研究[D]. 汪坤. 北京协和医学院, 2021(02)
- [7]基于TLR/MyD88/NF-κB通路研究五子衍宗丸对热应激诱发睾丸炎症反应的影响[D]. 胡素芹. 北京中医药大学, 2021(02)
- [8]基于ERK1/2-CREB信号途径研究卡马西平对雄性大鼠的生殖毒性[D]. 刘宇轩. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [9]保健食品金钗石斛葛杞丸开发与研究[D]. 邓维泽. 西华大学, 2016(12)
- [10]铅和乙醇对雄性大鼠生殖系统的联合毒作用[J]. 谭成森,靳翠红,刘秋芳,赵剑,蔡原. 中国工业医学杂志, 2006(05)