一、褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用（论文文献综述）
关丽,赵惠茹,李伟泽,李瑞佳,胡娅琪[1]（2021）在《阿魏酸在阿尔茨海默病领域的研究进展》文中进行了进一步梳理阿魏酸（ferulic acid, FA）是一种含酚羟基的苯丙素类天然产物,药理活性广泛,如抗炎、抗氧化等,大量研究表明FA对阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease, AD）具有一定的活性。近年来,针对AD的FA衍生物的设计与合成被广泛研究。本文作者综述了从2008年至今,FA在AD领域的研究进展,包括FA本身体内外抗AD药理活性研究以及FA衍生物的合成与抗AD研究成果,旨在为FA在AD领域的进一步研究提供依据。
陈晓玲[2]（2021）在《基于PP2A/PP5/AMPK-JNK信号通路的异甘草酸镁/二甲双胍抗镉诱导细胞凋亡分子机制研究》文中提出本研究采用细胞培养、RNA干扰、Western Blot分析、蛋白荧光标记、HE染色、DAPI和TUNEL染色、台盼蓝染色、细胞活性分析等细胞学和分子生物学技术与方法,以ICR小鼠以及L02细胞、AML-12细胞、PC12细胞、SH-SY5Y细胞和小鼠原代神经元为实验对象,通过建立的镉染毒体内和体外模型,综合研究了异甘草酸镁和二甲双胍分别在抗镉诱导肝细胞和神经细胞凋亡中的作用,深入解析了异甘草酸镁和二甲双胍分别通过调控ROS介导PP2A-JNK和PP5/AMPK-JNK信号通路发挥抗肝细胞和神经细胞凋亡分子机理。结果如下:1异甘草酸镁通过抑制镉诱导肝细胞JNK通路激活抗凋亡L02和AML-12细胞、或分别感染Ad-GFP、Ad-dn-c-Jun的L02或AML-12细胞用异甘草酸镁（10-104μg/ml或100-800μg/ml或400μg/ml）预处理4 h,或用SP600125（20μM）预处理1 h后再用异甘草酸镁（400μg/ml）预处理4 h,接着镉（50μM）处理6 h或24 h。然后,观察细胞形态、台盼蓝染色统计活细胞数量、DAPI和TUNEL染色评估细胞凋亡表现、Western Blot检测相关蛋白表达。结果显示,异甘草酸镁显着阻止镉引起的L02和AML-12细胞形态皱缩、细胞活力下降、Cleaved-PARP表达水平升高和细胞凋亡增加;异甘草酸镁阻滞镉激活JNK通路抗肝细胞凋亡,这被JNK抑制剂SP600125和钝化c-Jun表达强化异甘草酸镁抗镉诱导肝细胞活性下降和凋亡的证据支持。提示:异甘草酸镁通过抑制镉诱导肝细胞JNK通路激活抗凋亡。2异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS依赖的PP2A-JNK信号通路抗凋亡L02和AML-12细胞、或分别感染Ad-GFP、Ad-PP2A-wt的L02或AML-12细胞用10-104μg/ml或100-800μg/ml异甘草酸镁预处理4 h、或用5 m M乙酰半胱氨酸或100 n M冈田酸预处理1 h后再用400μg/ml异甘草酸镁预处理4 h,接着镉（50μM）处理6 h、12 h或24 h。使用CM-H2DCFDA探针检测细胞ROS水平、台盼蓝染色统计活细胞数量、DAPI染色评估细胞凋亡表现、Western Blot检测相关蛋白表达水平。结果显示,异甘草酸镁逆转镉和/或冈田酸诱导的肝细胞PP2A失活、JNK激活和凋亡;过表达PP2A强化异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞JNK激活依赖的凋亡;异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS产生;乙酰半胱氨酸增强异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS依赖的PP2A-JNK通路抗凋亡。提示:异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS依赖的PP2A-JNK信号通路抗凋亡。3二甲双胍改善小鼠镉染毒模型大脑海马神经元凋亡关联ROS和PP5/AMPK-JNK信号通路变化将36只成年健康ICR雄性小鼠随机分为6组,包括对照组（0.9%生理盐水）、二甲双胍处理组（200 mg/kg体重/天）、两个镉处理组（0.5和1 mg/kg体重/天）、两个二甲双胍（200 mg/kg体重/天）与镉（0.5和1 mg/kg体重/天）联合处理组。实验给药采用灌胃方式,实验周期为6周。采用HE和Nissl染色观察脑组织病理变化、TUNEL染色评估海马神经元凋亡、生化分析脑组织ROS水平变化、Western Blot检测分析脑组织AMPK、JNK、Cleaved-caspase-3等相关蛋白表达水平。结果显示,二甲双胍对镉染毒小鼠脑组织损伤有保护作用;二甲双胍改善小鼠镉染毒模型大脑海马神经元凋亡涉及调节PP5/AMPK-JNK信号通路变化;二甲双胍抑制镉染毒小鼠脑组织ROS水平。提示:二甲双胍改善小鼠镉染毒模型大脑海马神经元凋亡关联ROS和PP5/AMPK-JNK信号通路变化。4二甲双胍抗镉诱导神经细胞凋亡PC12细胞、SH-SY5Y细胞和原代神经元用二甲双胍（1 m M）预处理24 h,然后暴露Cd（10μM和20μM）4 h或24 h。采用MTS检测分析细胞活性、DAPI和TUNEL染色以及线粒体膜电位检测评估细胞凋亡、Caspase-3/7活性分析、Western Blot分析Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达。结果显示,二甲双胍显着抑制镉诱导PC12细胞、SH-SY5Y细胞和原代神经元活性及线粒体膜电位下降,以及阻滞镉诱导细胞Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3表达和Caspase-3/7活性升高和凋亡增加。提示:二甲双胍抵抗镉诱导的神经细胞凋亡。5二甲双胍调控PP5-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡PC12细胞、SH-SY5Y细胞和小鼠原代神经元、或分别感染Ad-GFP、Ad-dn-c-Jun、Ad-PP5的PC12细胞用二甲双胍（1 m M）预处理24 h、或用二甲双胍（1 m M）预处理24 h后再用SP600125（20μM）预处理1 h,然后暴露镉（10和/或20μM）4 h或24 h。采用MTS检测分析细胞活性、DAPI染色评估细胞凋亡表现、细胞免疫荧光检测分析p-JNK（Thr183/Tyr185）表达、Western Blot检测相关蛋白表达。结果显示,二甲双胍抑制镉诱导神经细胞JNK通路激活;用SP600125抑制JNK或钝化c-Jun表达强化二甲双胍抗镉诱导神经细胞凋亡;二甲双胍逆转镉诱导神经细胞PP5失活;过表达PP5增强二甲双胍抑制镉诱导JNK通路激活依赖的神经细胞凋亡。提示:二甲双胍调控PP5-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡。6二甲双胍调控AMPK抗镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡PC12细胞、SH-SY5Y细胞和/或小鼠原代神经元、或分别感染Ad-GFP、Ad-dn-AMPKα、Ad-AMPKα-ca的PC12细胞用二甲双胍（1 m M）预处理24 h、或用二甲双胍（1 m M）预处理24 h后再用AICAR（2 m M）预处理1 h,然后用镉（10和/或20μM）处理4 h或24 h。MTS检测分析细胞活性、DAPI染色评估细胞凋亡表现;Western Blot检测相关蛋白表达。结果显示,二甲双胍抵抗镉诱导神经细胞AMPK失活;AICAR激活AMPK强化二甲双胍抑制镉激活JNK通路依赖的神经细胞凋亡;钝化AMPKα表达抵抗二甲双胍抑制镉激活JNK通路依赖的神经细胞凋亡,而持续激活AMPKα表达增强二甲双胍抑制镉激活JNK通路依赖的神经细胞凋亡。提示:二甲双胍调控AMPK抗镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡。7二甲双胍调控线粒体ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡PC12细胞、SH-SY5Y细胞和/或小鼠原代神经元用二甲双胍（1 m M）预处理24 h、或用二甲双胍（1 m M）预处理24 h后再用NAC（5 m M）/Mito-TEMPO（10μM）预处理1 h,然后暴露Cd（10和/或20μM）4 h或24 h。使用CM-H2DCFDA探针检测分析细胞ROS水平、DAPI染色评估细胞凋亡表现、Western Blot检测相关蛋白表达。结果显示,二甲双胍抑制镉诱导神经细胞过量ROS产生;NAC强化二甲双胍抑制ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡;Mito-TEMPO增强二甲双胍抑制ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡。提示:二甲双胍调控线粒体ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡。
骆航[3]（2021）在《脑缺血再灌注模型建立及PCA神经保护研究》文中提出脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI）是指大脑缺血一段时间后恢复供血,大脑受到更严重损伤的现象。CIRI会严重影响人类生命健康水平,主要表现为大脑的结构损伤、代谢障碍以及功能障碍等。目前作为重要新药研发工具的体外细胞培养模型和动物模型培养周期长、成本高,需要重复多次筛选才有可能进入临床阶段最终走向市场,这使得新药研发效率很低且失败风险大大增加。微流控技术（Microfluidic technology）作为一种新兴技术,具有可以控制液体流动速度和方向,消耗的试剂样品少,大幅度提高分析效率的优点,因此有希望成为新药研发及药物评价的重要实验平台。本论文首先基于微流控技术设计加工了一种CIRI病理模型芯片还原了血脑屏障（Blood-brain barrier,BBB）及受CIRI损伤严重的额叶颞叶区域,两层芯片均采用聚二甲基硅氧烷（Polydimethylsiloxane,PDMS）加工制成,顶层和底层分别为由聚甲基丙烯酸甲酯（Polymethylmethacrylate,PMMA）制成的夹板来对芯片进行固定支撑。两层芯片上分别设计有半径为8mm的培养孔,培养孔与夹在芯片之间的聚四氟乙烯（Poly tetra fluoroethylene,PTFE）膜相互作用作为细胞生长发育的空间环境,芯片还设计有用于细胞接种及培养液的流入流出孔道。对设计加工的芯片进行流体力学仿真模拟,培养液流速在0.956-6.22m/min区间时,培养液到达处神经细胞（Nerve cells,NCs）的剪切力满足人脑颅内0.3-2KPa的真实剪切力情况;对二氧化碳在芯片内扩散情况进行仿真模拟,将芯片置于环境500s后芯片内的气体环境即与外界环境一致,为后续芯片内的细胞培养提供理论依据。接着本论文完成了对NCs的培养与选取:提取新生24h大鼠的NCs后进行原代培养及纯化,将纯化3天后的NCs进行免疫荧光鉴定,表达其特异性标志物（β-TubulinⅢ）;传代培养PC12细胞,对细胞生长曲线进行测定,选取5×104Cells/m L的细胞密度接种。比较后选取PC12细胞作为NCs接种到微流控芯片内,通入低糖培养液置于低氧箱完成了NCs氧糖剥夺的模拟进行模拟缺血过程,再将接种细胞的芯片从低氧箱转移至CO2培养箱同时换用高糖培养基完成复糖复氧的模拟进而实现对CIRI的模拟,通过加入不同浓度的原儿茶酸（Protocatechuic acid,PCA）在芯片体系内考察PCA（0、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L）对CIRI的神经保护作用。实验结果表明,设计加工的CIRI微流控芯片能够在24h内较好的维持NCs的生长状态,CIRI会导致微流控芯片内的NCs增殖变缓,死细胞数量升高,活细胞数量降低,乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量增加,TNF-α、Notch1蛋白表达含量增加,Bcl-2蛋白表达含量降低;PCA对NCs的神经保护作用呈现出浓度依赖性:随着PCA浓度的增加,NCs受CIRI影响逐渐减小,较CIRI组相比,一定程度地使NCs增殖变快,死细胞数量减少,活细胞数量增多,LDH漏出量减少,TNF-α、Notch1蛋白表达含量降低,Bcl-2蛋白表达含量升高。综上所述,本文设计加工了CIRI微流控芯片,将选取的NCs接种到CIRI微流控芯片内,设置Control组、CIRI组、PCA1组、PCA10组、PCA100组五个对照组,在微流控芯片体系内探究了PCA可以通过促进细胞增殖、降低死细胞数量、提高活细胞数量、减少乳酸脱氢酶漏出、降低TNF-α、Notch1蛋白表达含量、提高Bcl-2蛋白表达含量来对经CIRI的NCs起到神经保护作用,并呈现出浓度依赖性。
张峻榕[4]（2021）在《Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究》文中研究指明阿尔兹海默症（Alzheimer’s Disease,AD）是一种慢性进行性的神经退行性疾病,其发病的原因十分复杂,与自身因素,遗传条件和环境影响都有关系。目前研究表明,氧化应激现象在老年斑和神经原纤维缠结出现之前就已发生,是AD发病机制最早的变化之一。值得注意的是,在AD患者大脑中会经常检测出丙二醛、过氧化亚硝酸盐和硫巴比土酸等一系列的氧化应激标记物,这说明AD患者脑死亡的主要诱因与抗氧化系统失衡有关。因此通过研发一种介导抑制氧化应激产生的抗氧化剂,已成为预防AD治疗的有效途径。金纳米颗粒（AuNPs）作为细胞内药物或基因递送的纳米载体,具有毒性低,大的比表面积,表面易可控组装和高特异性等特征,这使得它被广泛应用于生物医学领域。本论文通过采用柠檬酸钠还原四氯金酸的经典方法,对两种不同粒径大小的Au NPs进行合成,而后为了使良好抗氧化特性的玉米源单体肽TPM（Leu-Asp-Tyr-Glu）能够与Au NPs自组装在一起,我们将TPM亮氨酸的N端连接一分子3-巯基丙酸组合成为s-TPM,这样重组之后的玉米源活性肽可稳定装载到Au NPs的表面,并由此构建成为功能型的两种纳米抗氧化剂S-Au@TPM和L-Au@TPM。同时利用研究该抗氧化剂分别在细胞和动物模型中的活性作用效果,最终验证出S-Au@TPM和L-Au@TPM在用于抗AD领域应用中具备一定的可行性和适用性。具体研究内容如下:本论文首先对PC12低分化细胞给药后的形态学进行了观察,发现经S-Au@TPM和L-Au@TPM处理48小时后,对细胞具有促分化的作用,细胞轴突会随给药剂量的增加,类似神经元突触一样而伸长,初步证明构建的纳米抗氧化剂对PC12低分化细胞具备一定的神经保护作用,为此我们继续对体外AD细胞模型中的具体抑制作用进行更深入的探究。实验选择L-谷氨酸（L-Glu）作为细胞模型建立药物,利用MTT方法筛选出最优建模剂量为25 m M。在细胞类AD模型中,给药0.25 n M和0.5 n M的S-Au@TPM和L-Au@TPM可显着抑制由L-Glu诱导产生的细胞凋亡率,此时细胞的存活率分别可达90.02±13.89%和86.89±13.24%。本论文的阳性对照药物是盐酸多奈哌齐（Donepezil hydrochloride,DH）。它是一种可逆性中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂,被广泛应用于治疗AD患者的认知功能障碍。我们使用Hochest 33342荧光染色法对细胞凋亡形态和数量进行观察,发现与阳性对照药DH和阴性对照药s-TPM相比,纳米抗氧化剂能够显着抑制模型细胞内凋亡核的固缩数目。同时利用系列实验再次验证,结果表明在L-Glu诱导损伤细胞中,通过给药不同浓度的S-Au@TPM和L-Au@TPM预处理3小时后,可显着降低细胞内乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和丙二醛（MDA）生成量的增多,抑制胞内Ca2+浓度的升高,改善线粒体跨膜电位以及过氧化氢酶（CAT）活性的异常,从而缓解建模药物所致的细胞内活性氧（ROS）的过量淤积。以上研究说明,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够显着抑制体外细胞类AD模型中的系列损伤,进而对抗氧化应激所造成的氧化系统的失衡。在抗AD动物模型活性研究中,采用Al Cl3与D-半乳糖联合给药的方式,对雌性昆明小鼠进行AD模型的建立。该模型可以充分复制AD主要的病理特征和临床表现,会造成实验小鼠氧化与抗氧化系统失衡、海马和大脑皮层神经元变性坏死、胆碱能系统异常、大脑皮层老年斑病变以及行为学方面的动作障碍等。在本部分实验中,结果表明,AD模型小鼠在给药浓度为0.5 mg/kg、0.7 mg/kg和1.0 mg/kg的S-Au@TPM和L-Au@TPM治疗16天后,会显着改善动物行为学中的系列指标:（1）在水迷宫测试中,能够增强模型小鼠的空间学习和记忆的能力;（2）在疲劳转棒行为学中,能够改善模型小鼠运动的协调能力以及对转棒旋转速度的迟缓应激能力;（3）在自主活动测试中,能够增加模型小鼠在陌生黑暗环境中的适应能力,并对环境做出适时的灵敏应激行为;综上所述,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够改善AD模型小鼠神经系统功能性损伤所导致的行为障碍。进一步我们对胆碱能相关指标进行了检测,发现AD模型小鼠经过给药不同剂量的S-Au@TPM和L-Au@TPM治疗后,在下丘脑及血清中缺失的乙酰胆碱（ACh）和乙酰胆碱转移酶（Ch AT）的含量会有所提升,而神经元突触中过度释放的乙酰胆碱酯酶（Ach E）含量被得到了抑制,说明纳米抗氧化剂对胆碱能系统的活性可以进行有效的调控。此外,我们研究了纳米抗氧化剂对Nrf-2/Keap-1途径蛋白干扰表达的影响。结果显示,与AD模型小鼠相比,S-Au@TPM和L-Au@TPM能够上调Nrf-2和HO-1的表达,增加超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和CAT的活性,并降低MDA含量以及Keap-1的蛋白水平。以上结果表明,S-Au@TPM和L-Au@TPM可通过Nrf-2或Keap-1的途径,来减轻由Al Cl3-和D-半乳糖所诱导产生的损伤。同时我们通过电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）方法分析发现,实验小鼠经给药S-Au@TPM和L-Au@TPM处理后,在体内组织（小肠、肝、脾、肺、肾、脑）中都有纳米抗氧化剂的分布,其中,在小肠中二者的积累较多。在其余器官中,S-Au@TPM的富集量要低于L-Au@TPM,表明小尺寸的S-Au@TPM在体内可以实现较长时间的血液循环,进而达到更加有效的生物利用度。纳米抗氧化剂的富集分布量会随着给药时间的推移而降低,证明它最终会被逐渐的排出体外,避免产生过多的纳米毒性。综上所述,本论文构建的S-Au@TPM和L-Au@TPM具有良好的抗氧化保护作用,可有效抑制细胞体内外AD模型中所引发的系列损伤。S-Au@TPM的抗氧化活性强于L-Au@TPM,这可能是由于小粒径的Au NPs,会与装载的功能性活性肽进行更有效地结合。并且,与大粒径Au NPs相比,小粒径Au NPs更容易穿透细胞膜进入病患组织从而发挥疗效。因此,本论文的研究为开发治疗或预防AD的新型药物提供了新的思路。
陈蔚翔[5]（2021）在《线粒体去极化在脑出血后继发性神经损伤中的作用及机制研究》文中研究表明背景与目的:脑出血（Intracerebral hemorrhage,ICH）是一种非常常见和严重的疾病,其患病率约为120/100000,58%的患者在一年内死亡。三分之二的幸存者将面临中度甚至重度残疾。脑出血的高发病率和高死亡率是由占位效应所致原发性损伤和血红蛋白降解产物诱导的继发性损伤共同造成的。目前缺乏基于循证医学证据的外科手术策略,促使研究人员寻找治疗ICH后继发性损伤的可能干预靶点及手段。脑出血后继发性脑损伤包括神经元死亡、ROS爆发和DNA损伤。动物模型和人体样本的证据表明,脑出血后神经元死亡的主要类型是坏死并伴随着严重的炎症、水肿和组织损伤。细胞坏死既往被认为是一种伴随炎症和组织损伤的非程序性细胞死亡。但是,随着2005年首次报道部分细胞坏死过程可以被调控,不同类型的调节性细胞坏死相继被发现,其中多种类型的细胞坏死与中枢神经系统疾病相关。调节性坏死通过促进炎症和组织损伤在中枢神经系统疾病的发展中起着极其重要的作用,甚至被认为是成熟中枢神经系统细胞死亡的主要执行者。动物模型和人类样本的证据表明脑出血后神经元死亡的主要类型是坏死。一些证据表明,铁可以直接引发导致神经元死亡,而其他研究表明铁的积累只是神经元死亡的诱发因素。总的来说,铁超载及其对神经元死亡的影响尚不完全清楚。游离铁离子可引起不同类型细胞的脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤。已有的研究发现,脑出血后患者和实验动物脑组织出现急性和严重的铁超载,铁超载与继发性脑损伤密切相关。动物研究表明,清除过量的铁可以改善脑出血的预后。目前,针对脑出血后铁超载引起损伤的治疗主要集中在铁螯合剂和抗氧化剂。然而,最近的临床研究结果显示铁螯合剂或抗氧化剂治疗没有显着改善ICH患者脑出血的预后。铁离子参与细胞的许多正常生理功能,包括细胞色素氧化酶等某些酶的活性维持、中枢系统中的突触形成等生理过程。活性氧也参了机体正常的生理功能,如NOX（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NADPH]）氧化酶参与的吞噬功能和一些细胞内信号传导。因此,铁螯合和ROS清除的一个挑战是在尽量少影响铁和ROS依赖性的生理功能情况下,减轻病理性铁和ROS过量积累引起的脑损伤。可见,目前迫切需要寻找特异且精准的铁超载相关神经细胞损伤靶点,以利于通过干预来减轻继发性神经损伤。在本研究中,我们围绕以下三个方面进行研究:1、我们首先用小鼠自体血ICH模型确定脑出血后血肿周围脑组织铁离子价态,再利用体外铁超载模型及RNA-sequencing寻找铁离子引起的神经细胞损伤靶点与主要损伤特征;2、确定脑出血后铁超载引起神经元损伤的具体分子机制;3、针对我们所确定的机制,探讨对实验性小鼠脑出血的治疗作用。第一部分:线粒体功能障碍是脑出血后神经元铁超载的主要损伤特征目的:发现并确认脑出血后铁超载导致的主要损伤靶点方法:为验证脑出血（ICH）后血肿周围的铁离子的价态,提取脑出血后血肿周围与皮层脑组织,采用一种新的铁离子检测方法分别测定Fe2+和Fe3+。从不同铁离子剂量处理的PC-12细胞中提取RNA,并对其进行序列测定,探讨铁离子诱导神经元损伤的机制。其次,根据测序筛选结果应用线粒体功能检测试剂研究亚铁离子对线粒体复合体Ⅰ功能的影响,用能量代谢检测仪与ATP检测分析铁超载对氧耗率（OCR）和三磷酸腺苷（ATP）的影响。结果:（1）脑出血后24小时,二价铁（而非三价铁）浓度急剧升高,脑出血后28天皮层和内囊中的铁离子浓度仍显着高于正常浓度。（2）用50或250μM FeCl2处理PC-12细胞后,RNA测序检测到差异表达基因。与未处理的PC-12细胞相比,50μM FeCl2处理的细胞有110个基因的表达发生了显着变化,而250μM FeCl2处理的细胞有129个基因的表达发生了显着变化。此外,50和250μM FeCl2处理后细胞的线粒体相关基因占差异表达基因的比例分别为42%和19%。对线粒体相关基因的进一步分析显示,50μM和250μM FeCl2处理后细胞的线粒体呼吸复合物I相关基因的表达发生了显着变化。（3）Fe2+以剂量依赖的方式降低细胞的氧耗率（OCR）和三磷酸腺苷（ATP）水平,且铁超载显着降低了线粒体NAD+/NADH比值。利用四甲基罗丹明甲酯（TMRM）及活细胞工作站实时检测PC-12细胞线粒体膜电位（ΔΨm）发现,250μM亚铁处理PC-12细胞12h后TMRM的荧光强度降低。结论:线粒体功能障碍是神经元亚铁超载的重要生物标志物,以NAD+/NADH比值下降、OCR与ATP含量降低、线粒体膜电位去极化为其主要特点。第二部分:线粒体Fe2+内流/CypD乙酰化正反馈分子环路介导的线粒体去极化促进脑出血后神经元坏死目的:确认线粒体Fe2+内流/CypD乙酰化正反馈分子环路及其在脑出血后线粒体去极化依赖的神经元死亡中的作用方法:利用活细胞二价铁离子探针RPA（罗丹明B-[（1,10-菲咯啉-5-基）氨基羰基]苄基酯）检测线粒体游离Fe2+,免疫共沉淀检测线粒体分子CypD乙酰化水平,钙黄绿素释放试验原位评价mPTP开放,CRISPR-Cas9技术构建CypD敲除的细胞（CypD-KO-PC-12细胞系）,RNAi方法敲低PC-12细胞的ABCB10。结果:（1）线粒体亚铁超载导致神经元线粒体膜电位降低。（2）线粒体亚铁超载导致CypD乙酰化增加,使神经元mPTP开放。（3）开放的mPTP增加（促进）神经元线粒体Fe2+超载。（4）CypD乙酰化抑制剂或CypD缺失可抑制铁超载引起的线粒体功能障碍和膜电位去极化引起的神经元死亡。结论:Fe2+超载可降低线粒体膜电位、增加CypD的乙酰化。CypD乙酰化的增加促使神经元细胞mPTP开放,进而促进亚铁(线粒体Fe2+内流)通过开放的mPTP进入线粒体基质,加速神经元死亡;而抑制CypD乙酰化或CypD缺失则可抑制Fe2+超载引起的线粒体功能障碍和神经元死亡。即,线粒体Fe2+内流/CypD乙酰化正反馈分子环路介导的线粒体去极化促进了脑出血后神经元坏死。第三部分:脑出血后抑制线粒体去极化的神经保护作用目的:探讨抑制线粒体去极化对脑出血后神经系统的保护作用方法:PI染色检测亚铁与兴奋性氨基酸情况下的原代神经元死亡。小鼠脑出血模型下,应用BMS、pole test和旷场实验评价小鼠脑出血后的神经功能。结果:（1）兴奋性氨基酸加重了Fe2+超载引起的神经元坏死。（2）环孢素A治疗或CypD缺失可在体内外抑制脑出血后的神经元坏死,改善神经功能。（3）线粒体活性氧清除剂MitoQ减轻脑出血导致的白质损伤,改善神经功能。结论:线粒体Fe2+内流/CypD乙酰化正反馈分子环路是ICH的治疗靶点,CsA与MitoQ处理或CypD缺失能明显抑制脑出血后急性期和慢性期的神经功能缺损。
赵凡睿[6]（2021）在《核桃抗氧化肽改善学习和记忆功能障碍的分子机制研究》文中进行了进一步梳理随着全球人口老龄化进程加快,我国也面临着剧烈的人口结构变化。截止到2020年底,我国60岁及以上人口达2.6亿,占全国人口18.7%,预计到2050年将增加至37.2%。人口老龄化带来的公共卫生健康挑战日益严峻,尤其是老年人认知功能下降,给家庭和社会造成巨大的情感负担和经济压力。研究表明,认知功能具有可塑性,通过适当的干预手段可以有效保护认知功能或者延缓其衰退,膳食干预是其中有效手段之一。因此,寻找绿色、安全、高效且具有神经保护活性的功能性因子进行膳食干预防认知功能下降具有重要意义。我国核桃资源丰富,尤其是长白山地区野生核桃产量高,品质好。核桃蛋白酶解物（<3k Da组分）已被证实具有改善小鼠学习和记忆活性,但活性肽结构和分子作用机制尚不明确。因此,本论文以纯化鉴定后的核桃肽为研究对象,结合BIOPEP数据库筛选出具有潜在改善记忆活性和抗氧活性的核桃肽,通过体外实验,筛选出高抗氧化活性核桃肽;结合自噬激活剂和自噬抑制剂,探讨核桃肽对Aβ25-35诱导神经细胞氧化应激的保护作用机理;通过动物体内实验验证了核桃肽具有改善小鼠学习和记忆障碍的神经保护作用;基于蛋白质组学和磷酸化修饰组学,明确了核桃肽缓解东莨菪碱诱导学习和记忆障碍小鼠的生物学功能;结合NRF2抑制剂,进一步揭示了核桃肽具有保护H2O2诱导HT-22细胞氧化损伤的作用,阐明核桃肽改善神经损伤和学习记忆障碍的作用机制。主要结果如下:（1）核桃活性肽结构鉴定及筛选。采用de novo从头测序法对纯化后的组分进行结构鉴定,以可信度≥90%为指标,从2341条肽序列中筛选出645条核桃肽。结合BIOPEP数据库（http://www.uwm.edu.pl/biochemia/index.php/pl/biopep）和文献报道的记忆肽结构特点,选取疏水性氨基酸和芳香族氨基酸相对含量较多、且未报道的可能具有改善记忆和抗氧化双重作用的活性肽12条。利用化学实验ORAC,结合体外PC12细胞模型,以ROS、细胞凋亡、ATP和GSH-Px为指标,筛选出TWLPLPR、YVLLPSPK和KVPPLLY 3条核桃高抗氧化活性肽。利用RP-HPLC检测核桃高抗氧化活性肽稳定性,实验结果表明:TWLPLPR（20℃-60℃）、YVLLPSPK（20℃-80℃）和KVPPLLY（20℃-100℃）具有耐高温特性,且3条高抗氧化核桃肽经过胃蛋白酶和胰蛋白消化后均不会被降解,为接下来的研究奠定基础。（2）核桃活性肽TWLPLPR、YVLLPSPK和KVPPLLY促进自噬改善氧化应激的机理初探。以Aβ25-35诱导PC12细胞为神经毒性模型,结合自噬激活剂RAPA和自噬抑制剂3-MA,证明核桃肽通过显着调节p-Akt/Akt（p<0.01）和p-mTOR/mTOR（p<0.01）蛋白表达激活Akt/mTOR信号通路,促进自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/LC3Ⅱ比率、p62、Beclin-1）和溶酶体相关蛋白（LAMP1、LAMP2、Cathepsin D）的表达,增加自噬小体和自噬溶酶体数量,进而显着降低Aβ25-35诱导PC12细胞内ROS含量（p<0.01）和细胞凋亡水平,显着增加ATP活性（p<0.01）。核桃肽TWLPLPR、YVLLPSPK和KVPPLLY通过Akt/mTOR信号通路介导自噬,改善Aβ25-35诱导PC12神经细胞氧化应激,为研究保护神经元氧化损伤提供实验基础和理论依据。（3）核桃活性肽YVLLPSPK改善小鼠学习和记忆障碍的研究。以东莨菪碱诱导衰老小鼠为实验动物模型,灌胃核桃肽YVLLPSPK没有引起其他副作用,也没有导致C57BL/6J小鼠毛发、摄食、摄水、行为出现异常变化,小鼠体重无显着性变化（p>0.05）。利用H&E染色,在不同倍数下详细观察小鼠组织结构,实验结果表明:核桃肽对小鼠肝脏和肾脏均未发生炎症、坏死、变性、增生以及纤维化等病理变化,证明灌胃核桃肽对小鼠没有毒副作用。通过Morris水迷宫行为学实验研究核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠学习和记忆改善作用,实验结果表明:在定位航行实验中,核桃肽显着降低小鼠潜伏期（p<0.05）和游走总距离（p<0.01）,显着增加小鼠在有效区游走距离（p<0.01）和时间（p<0.01）;在空间探索实验中,活性肽显着增加穿越原平台次数（p<0.05）、逃逸平台时间（p<0.01）、有效区游走距离（p<0.01）和时间（p<0.01）。利用罗丹明B标记活性肽YVLLPSPK进行小鼠活体成像检测,实验结果表明:核桃肽可以被血液吸收,并随时间分布在机体的各个器官（肾脏、肝脏、脾脏、膀胱、大肠和小肠）中。以上实验表明,核桃肽口服后可以保持其完整性,进而被机体吸收与利用,改善东莨菪碱诱导小鼠学习和记忆障碍,在植物源功能性食品中具有潜在的开发与应用价值,为将来其应用于功能食品或医药领域提供可行性依据。（4）核桃活性肽YVLLPSPK改善东莨菪碱诱导小鼠海马组织的组学分析。对小鼠海马组织进行全蛋白及磷酸化修饰4D-label free定量蛋白质组学研究,分析核桃肽YVLLPSPK对东莨菪碱诱导C57BL/6J小鼠脑内海马组织蛋白差异表达情况。通过对差异蛋白（阈值>1.5）进行GO、KEGG富集和聚类分析结果表明,差异蛋白主要富集在转录和翻译、线粒体磷脂转运、微管运动调节、膜转运、神经元再生、分化和运动等生物过程,与突触内带膜细胞器和膜的组成成分有关,主要与跨膜转运蛋白、VDAC和ATP酶活性等分子功能相关。KEGG通路结果表明,差异蛋白富集在运输与分解代谢、细胞运动途径中。聚类富集结果表明,核桃肽改善东莨菪碱诱导小鼠学习和记忆障碍可能线粒体生物学功能途径有关,并参与调节含有不同转运蛋白膜系统。（5）核桃活性肽YVLLPSPK介导PINK1促进线粒体自噬改善神经元损伤的作用机制。核桃活性肽YVLLPSPK显着降低东莨菪碱诱导小鼠海马组织内蛋白质羰基（p<0.01）、LPO（p<0.01）、8-OHd G（p<0.01）水平和TUNEL凋亡水平（p<0.01）,显着增加ATP活性（p<0.01）;核桃肽恢复东莨菪碱诱导小鼠海马组织内线粒体形态,降低线粒体空泡化,增加线粒体嵴。通过蛋白免疫印迹实验表明,核桃肽显着增加东莨菪碱诱导小鼠海马组织内线粒体融合蛋白（MFN2）蛋白表达（p<0.05）,显着降低线粒体分裂蛋白（DRP1）、VDAC1和CYCS蛋白表达（p<0.01）;核桃肽显着增加线粒体外膜标记物PINK1和Parkin蛋白的表达水平（p<0.01）;显着增加自噬标记物LC3-II/LC3-I比率和Beclin-1蛋白（p<0.01）,显着降低p62蛋白表达（p<0.01）,显着增加溶酶体相关蛋白（LAMP1）的表达水平（p<0.01）;免疫荧光实验结果表明,核桃肽显着增加东莨菪碱诱导小鼠海马组织内自噬标记物LC3-II和线粒体标记蛋白PINK1共定位（p<0.01）。核桃肽显着增加东莨菪碱诱导小鼠海马组织内细胞核NRF2和HO-1蛋白表达（p<0.01）,显着降低KEAP1蛋白表达（p<0.01）;免疫荧光实验结果也表明,核桃肽显着增加东莨菪碱诱导小鼠海马组织内细胞核NRF2移位（p<0.01）。同时,抑制剂ML385显着调节核桃肽对H2O2诱导HT-22细胞内线粒体相关蛋白（DRP1、MFN2、VDAC1、CYCS、PINK1、Parkin）和线粒体自噬相关蛋白（LC3-II/LC3-I比率、Beclin-1、p62、LAMP1）的影响（p<0.01）;利用流式细胞观察,核桃肽显着降低H2O2诱导HT-22细胞内ROS、细胞凋亡水平和线粒体超氧化物（Mito SOX）水平（p<0.01）;利用荧光显微镜观察,核桃肽YVLLPSPK显着增加MMP水平（p<0.01）。然而,加入抑制剂ML385后,细胞内ROS、细胞凋亡、线粒体超氧化物和MMP水平均显着被抑制（p<0.01）。以上实验为核桃肽改善学习和记忆障碍提供理论支持和实验依据,也为今后开发改善学习记忆功能食源性活性物质奠定了基础。
刘进[7]（2020）在《逐级靶向纳米递送系统构建及其治疗缺血性脑卒中的应用研究》文中进行了进一步梳理缺血性脑卒中（Cerebral Ischemic Stroke,CIS）具有高发病率、高致死率、高致残率、高复发率等特点,严重危害人类的健康。神经细胞线粒体氧化应激损伤的有效逆转对于CIS发生时脑组织的保护及其功能恢复至关重要,但受限于血脑屏障的存在和药物的全脑分布等问题,往往难以实现疾病的有效治疗。本课题拟采用前体药物技术和双级靶向纳米递送系统将褪黑素主动转运至脑组织氧化应激损伤神经细胞的线粒体中,提高药物治疗效果,有效保护神经细胞,实现CIS精准、高效治疗。目的:构建靶向脑组织氧化应激损伤神经细胞的线粒体的TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束,从而达到精准、高效治疗CIS的目的。方法:（1）以抗氧化剂褪黑素为模型药物,将线粒体靶向分子三苯基膦（TPP）与褪黑素反应合成三苯基磷-褪黑素（TPP-Melatonin,TPP-MLT）,采用柱层析分离制得TPP-MLT,并借助核磁共振氢谱、质谱确证其结构。采用高效液相色谱法定量考察细胞线粒体中的褪黑素含量,通过双氧水诱导构建氧化应激损伤细胞模型,采用MTT法和死/活细胞染色技术比较细胞存活率。采用荧光探针DCFH-DA标记氧化应激损伤细胞内ROS水平并采用JC-1荧光探针标记线粒体膜电位。（2）以TPP-MLT为模型药物,对血脑屏障具有高亲和力的TGN肽和对CIS发生时氧化应激损伤神经细胞特异性上调的谷氨酸受体具有高亲和力的SHp肽为靶向基团,聚乙二醇-聚乳酸为载体材料,构建TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束。（3）采用荧光成像技术及流式细胞术探讨TGN/SHp/TPP-MLT逐级靶向载药胶束的靶向性和跨体外血脑屏障能力及摄取情况。通过双氧水诱导构建氧化应激损伤细胞模型,采用MTT法和死/活细胞染色技术比较细胞存活率。采用荧光探针DCFH-DA标记氧化应激损伤细胞内ROS水平。采用线栓法制作短暂性左侧大脑中动脉闭塞的CIS动物模型,分别考察神经功能缺损评分、TTC染色、磁共振成像影像学检查、H&E染色技术、氧化应激指标检测。结果:（1）结果证实褪黑素在TPP线粒体跨膜电位的推动作用下,线粒体中的含量大大增加;TPP-MLT对于改善细胞存活率的效果要显着优于MLT,并且TPP-MLT更为有效地降低细胞内ROS。膜电位的结果进一步证实TPP-MLT可更为有效地改善氧化应激损伤细胞线粒体膜电位。（2）该载药胶束的粒径在30 nm左右,呈球形,粒径分布均一;包载于纳米载体中的TPP-MLT具有一定的缓释特性,体外释药研究结果证实其药物累积释放时间可维持在24 h左右;当TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束浓度在500μg/m L时,对在小鼠脑微血管内皮细胞b End.3和肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12的细胞活性均未产生明显影响;TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束静脉给药不会引起溶血现象,且在治疗剂量下,不会引起体重、肝肾功能等指标的异常变化,具有良好的生物安全性。（3）TGN/SHp/TPP-MLT逐级靶向载药胶束,2 h累积透过率是游离药物的3.9倍;进一步在SHp肽介导下,TGN/SHp纳米载体可被氧化应激损伤神经细胞PC-12特异性摄取;药动学结果显示TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束尾静脉给药后可持续释放药物24 h,生物利用度大大提高;体内药物分布实验结果显示TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束可显着增加抗氧化剂的脑组织转运,且更多地富集于脑组织损伤部位;通过双氧水诱导构建氧化应激损伤细胞模型,采用MTT法和死/活细胞染色技术证实TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束可更为有效地改善细胞存活率;采用荧光成像技术证实TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束可更为有效地改善氧化应激损伤细胞内ROS水平及线粒体膜电位;通过神经功能缺损评分、TTC染色、磁共振成像影像学检查、H&E染色技术、氧化应激指标检测等手段,明确TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对于大鼠CIS动物模型的治疗作用。结论:本项目成功构建了TGN/SHp/TPP-MLT逐级靶向载药胶束并可以主动转运至脑组织氧化应激损伤神经细胞的线粒体中,提高药物治疗效果,有效保护神经细胞,实现CIS精准、高效治疗。
刘雅文[8]（2019）在《褪黑素在铅所致神经细胞毒性中的保护作用研究》文中研究表明目的:铅是工业上广泛运用的重金属,因其化学性质十分稳定,可在自然环境中长期稳定存在,故铅污染是我国面临的严重环境问题之一。铅对人体的多个系统均有毒性效应,其中尤以神经系统最为严重,然而目前铅所致神经毒性的机制尚未完全明确,有研究认为氧化应激是铅致神经毒性的关键因素。褪黑素（melatonin,MT）是目前市面上常见的膳食补充剂,研究发现其具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多项生理功能,但其是否能够减轻铅引起的神经损伤仍不清楚。本研究以PC12细胞作为研究对象探究褪黑素是否对铅所致神经毒性具有保护作用及其可能的机制。方法:用不同剂量的褪黑素（25μM、50μM、100μM、200μM、400μM或800μM）处理细胞,CCK-8实验检测各组细胞的存活率。PC12细胞分为对照组、25μM醋酸铅（Lead acetate,PbAc）染毒组、50μM MT处理组和50μM MT预处理+25μM PbAc组,处理24小时后CCK-8和LDH实验检测各组细胞存活率和损伤率;Hoechst染色实验检测细胞凋亡;免疫荧光法检测Cleaved-Caspase-3和细胞色素C（Cytochrome C,Cyto C）在细胞内的定位和表达;DCFH和Mito SOX荧光染料染色分别检测细胞内和线粒体中活性氧（Reactive oxidative species,ROS）含量;检测细胞内谷胱甘肽（Glutathione,GSH）含量和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活力。为了探讨MT抗氧化作用的机制,采用Western Blot法检测核因子E2相关因子2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）和血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）蛋白的表达。结果:CCK-8实验结果显示不同浓度MT对细胞存活率无明显影响,而PbAc处理可降低PC12细胞的存活率,且存活率的下降与PbAc的剂量呈正相关,25μM PbAc处理细胞24h可导致PC12细胞存活率降低至（66.16±8.73）%;而MT预处理后细胞存活率提高至（90.42±6.81）%（P<0.01）。与此结果相一致的是,LDH实验结果显示25μM PbAc处理细胞24h可导致细胞损伤率升高至（25.32±2.94）%,而MT预处理+PbAc组细胞损伤率则降低至（2.91±1.38）%（P<0.001）。Hoechst染色结果表明,PbAc组细胞凋亡率升高至（30.67±4.75）%,而MT预处理+PbAc组细胞凋亡率则降低至（18.15±1.55）%。免疫荧光染色结果表明,PbAc组的PC12细胞内凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3含量增多,同时胞浆中Cyto C蛋白增多;MT则可抑制PbAc诱导的Cleaved-Caspase-3增多,并减少Cyto C在胞浆中的含量。荧光探针检测结果显示PbAc染毒处理细胞可导致胞浆内和线粒体ROS水平增加（P<0.001）,且细胞形态出现异常;而且细胞抗氧化能力下降,如GSH含量减少、SOD酶活力降低。MT处理则可显着降低细胞胞浆和线粒体ROS水平（P<0.001）,以及细胞内GSH含量和SOD酶活力均提高（P<0.05）。MT组细胞的细胞存活率、损伤率、ROS水平、凋亡相关蛋白和抗氧化物质均无明显变化。Western Blot实验发现50400μM MT可增加细胞内抗氧化蛋白Nrf2和HO-1的水平。结论:一定剂量的褪黑素可减轻铅引起的PC12细胞内氧化应激,并减少细胞死亡,对铅所致神经细胞毒性具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。
王菲菲[9]（2018）在《环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究》文中研究表明研究目的环烯醚萜类化合物是一类在天然界中广泛存在的次生代谢产物,具有多种生物学活性,临床用于阿尔茨海默病、抑郁症以及心血管等疾病的治疗。目前研究认为,这些疾病的发生与机体内氧化应激水平有着密切的关系。氧化应激是指机体内氧化-还原体系失衡,产生过剩的不能被身体消除的自由基（ROS或RNS）。细胞内过量的ROS会诱发多种疾病。本文通过研究环烯醚萜类化合物降低机体氧化应激作用,探讨此类化合物的活性作用机制及其构效关系,对于环烯醚萜类化合物的活性研究及新药开发都具有重要意义。本文以环烯醚萜成分的氧化应激活性为中心,选取了栀 栀子苷、胡黄连苷Ⅱ、马钱苷、缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯等6种活性较强且具有代表性的化合物进行研究。通过结构确证、抗氧化能力分析、肿瘤细胞杀伤作用和神经细胞保护作用,研究化合物的活性差异,探讨该类化合物的作用机理及其构效的相互关系。研究方法1.环烯醚萜苷和酯类化合物结构的确定和体外抗氧化能力分析（1）乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯是同分异构体,其结构在文献中存在混淆情况。实验通过 UV、IR、MS 和1H-NMR、13C-NMR 和二维 NMR（HMQC 和 HMBC谱）进行分析,对乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯的结构进行全归属。（2）采用铁离子还原抗氧化力（Ferric reducing antioxidantpower,FRAP）、羟自由基（Hydroxyl free radical,OH·）、超氧阴离子（Superoxide anion,O-·）清除力、ABTS+·清除力和DPPH·的清除能力实验,研究栀子苷、胡黄连苷Ⅱ、马钱苷、缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯6种化合物自由基清除能力。2.环烯醚萜苷和酯类化合物促进肿瘤细胞调亡的可能机制选择不同的肿瘤细胞模型:人肝癌细胞（Human liver carcinoma cells,HepG2）、人宫颈癌细胞（human cervix carcinoma cells,HeLa）和人乳腺癌细胞（human breast cancer cells,MDA-MB-231）,及正常细胞系人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,采用MTT法对活细胞生存率进行分析。采用Annexin V-FITC/PI双标标记调亡细胞,通过流式细胞术检测HepG2细胞早期调亡和晚期调亡的细胞数量,并通过监测细胞内DCF荧光变化,分析给药前后细胞内ROS浓度变化,分析化合物是否是通过降低细胞内ROS浓度而表现出肿瘤细胞杀伤作用。3.环烯醚萜苷和酯类化合物神经细胞保护的可能机制选择已分化的PC12细胞系模拟神经细胞,用不同浓度和时间H202损伤PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型。通过MTT法对H202损伤的PC12细胞生存率进行分析,确定最适损伤浓度和时间。将实验分为空白组,模型组和给药挽救组,通过MTT法比较模型组和给药挽救组细胞生存率差异,分析不同化合物的挽救效果。采用Annexin V-FITC/PI双标标记调亡细胞,通过流式细胞术检测早期调亡和晚期调亡的细胞数量化合物的挽救效果,并通过监测细胞内DCF荧光变化,分析给药挽救前后细胞内ROS水平,分析化合物是否能通过降低损伤细胞内ROS浓度起到神经细胞保护作用。4.蜘蛛香及啤酒花缬草提取物片（制剂）的活性研究,与单体化合物活性比较为明确蜘蛛香药材及其制剂中抗氧化应激的物质基础,实验选择蜘蛛香药材（2批次）和制剂（3批次）进行研究,首先采用LC-MS对药材及制剂的极性和非极性成分进行分析,采用对照品比对和MS解析,确定药材和制剂的主要成分。通过挽救H202损伤PC12细胞模型研究药材和制剂对细胞的挽救效率。通过含量折算,分析缬草三酯、乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯与药材、制剂之间的量效关系。5.缬草环烯醚萜类成分的强制降解实验及其降解前后抗氧化应激活性比较研究通过强制降解实验:酸性条件（0.01MHCl,25℃,5h）,碱性条件（O.O1MNaOH,25 ℃,10 min）,氧化条件（3%～6%H202,25℃,24h）,加热条件（甲醇溶液60℃,0,1,2,4,或6 h;固体4℃,7天;固体25 ℃,7天）和光照条件（强度5000 lx,3 h）。分析缬草环烯醚萜的可能降解规律,通过DPPH·-TLC-MS、LC-MS分析,对环烯醚萜热降解产物的结构进行推断;通过ABTS+·清除力、DPPH·的清除能力、肿瘤细胞杀伤实验对抗氧化能力和肿瘤细胞杀伤作用、促进细胞调亡能力和降低细胞ROS水平进行检测,从而分析环烯醚萜酯类化合物结构与活性之间的关系。研究结果1.乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯是同分异构体,差异仅为一个乙酰基团连接位置不同。通过HMBC图谱解析可以发现,与乙酰基相连的羰基碳会向高场移动,通过全谱归属（乙酰缬草三酯:δC 171.2（C-13）,169.8（C-16）,170.4（C-22）和 170.8（C-2’）;1-β乙酰缬草三酯:δC 171.2（C-13）,171.6（C-16）,167.6（C-22）和170.9（C-2’））,本文确定了乙酰缬草三酯和1-β乙酰缬草三酯的结构。通过体外清除自由基能力分析可知,胡黄连苷Ⅱ具有较强的自由基清除能力,这可能其结构中的酚羟基和三元氧环结构有关系。环烯醚萜酯类化合物清除自由基能力次之,栀子苷和马钱苷在自由基清除能力中未表现出清除自由基能力。2.在肿瘤细胞杀伤实验中,环烯醚萜苷类化合物对实验中的肿瘤细胞无明显杀伤作用,在高浓度时还具有促进细胞生长的作用。环烯醚萜酯类化合物对肿瘤细胞具有明显细胞毒作用,实验表明环烯醚蔽酯类化合物可通过降低细胞内ROS水平促进HepG2细胞凋亡。对HepG2细胞的杀伤作用依次为:缬草三酯>乙酰缬草三酯>1-β乙酰缬草三酯。3.实验采用80 μM H202处理PC12细胞12 h（细胞生存率下降至空白对照组50%以下）作为模型组。通过加入不同浓度和环烯醚萜苷和酯类化合物挽救48小时进行比较,与模型组相比,给药组细胞存活率均显着上升,凋亡率显着下降,细胞内ROS水平也显着下降。其中,栀子苷对H202损伤PC12细胞挽救效果最佳（在给药浓度为10 mM时,挽救率为17.5%）,马钱苷和胡黄连苷Ⅱ作用次之（在给药浓度为20 mM时,挽救率分别为16.3%和12.9%）,缬草环烯醚萜酯类化合物挽救效果较环烯醚萜苷类化合物弱,在给药75mM时挽救效率在（11.5,15.5）%。对PC 12细胞修复作用:栀子苷>马钱苷>胡黄连苷Ⅱ>缬草三酯类化合物。4.蜘蛛香药材（提取物或制剂）与单体化合物的活性相当,表明缬草环烯醚萜酯类化合物是蜘蛛香药材及制剂的主要活性成分。缬草环烯醚萜酯类化合物、药材、制剂均可通过降低细胞内ROS水平对损伤的PC12细胞进行保护。5.通过强制降解实验可知,缬草环烯醚萜类成分对于酸碱和甲醇溶液加热不稳定。在酸碱条件下,降解产物以酯键断裂为主,且反应剧烈不易控制;在甲醇溶液加热条件下,降解产物以三元氧环开环结构为主。在对热降解产物进行自由基清除实验和肿瘤细胞杀伤实验中发现,降解产物具有一定活性,但较原化合物活性下降明显,表明三元氧环是缬草环烯醚萜酯类化合物活性的重要结构基团。结论环烯醚萜苷和酯类成分具有较强生物学活性,推断环烯醚萜母核（半缩醛-烯醚环戊烷）是重要结构基础,抗氧化应激是其作用的重要途径之一。环烯醚萜酯可通过抗氧化应激起到肿瘤细胞杀伤作用。环烯醚萜酯是缬草及其制剂抗氧化活性的重要物质基础。三元氧环是缬草环烯醚萜酯类化合物抗氧化应激的重要结构基团。推断环烯醚蔽苷和酯类化合物可通过抗氧化应激起到神经细胞保护作用。
李旭哲[10]（2017）在《Anastatins A&B及其衍生物抗氧化作用及对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究》文中进行了进一步梳理氧化应激可导致细胞损伤和死亡,可能会引起许多疾病,如肝脏损伤、衰老、癌症、中风、心肌梗死、阿尔茨海默病和帕金森病等。Anastatins A&B是含生草（Anastatica hierochuntica）中提取得到的一种种黄酮类化合物,有报道显示Anastatins A&B对大鼠的原代肝细胞损伤具有一定保护作用。本课题组前期首次用化学法成功合成Anastatins A和Anastatins B并进行衍生化得到24个衍生物,本论文以Anastatins A&B及其衍生物为研究对象,首次在体外化学水平、体外细胞水平和动物水平上完整的研究了 Anastatins A&B及其衍生物的抗氧化作用及对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究。首先是体外化学评价方法,运用总还原能力、ABTS·自由基清除能力和DPPH·自由基清除能力三种化学评价方法,评价了 Anastatins A&B及其衍生物的抗氧化活性,结果发现衍生物1-38c在这三种测试方法中均表现出良好的抗氧化活性,其总还原能力为318.13 g/mol;ABTS·自由基清除力的EC50值为0.08 mM;DPPH·自由基清除力的EC50值为0.06 mM,抗氧化活性强于Vc,与没食子酸相当。接着用到了体外细胞模型评价方法,运用PC-12细胞氧化损伤模型和L02肝细胞氧化损伤模型,评价了它们的细胞毒性和抗氧化保护作用,H2O2刺激PC-12细胞氧化损伤模型中,衍生物1-38c在10μM时将细胞存活率从1 6.80%提高到70.59%;H202刺激L02肝细胞氧化损伤模型中,1-38c在10μM时将细胞存活率从39.90%提高到78.10%,1-38c在两种细胞模型评价中均表现了良好保护效果,比阳性对照没食子酸保护效果好。最后选择衍生物1-38c进行体内评价,运用CC14诱导的小鼠急性肝损伤模型评价其保肝活性,结果表明1-38c对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤体现出良好的保护作用,有效抑制了肝损伤指标AST、ALT、LDH的活性及含量;提升了动物体内重要的保护酶GSH的含量;抑制CYP2E1的表达。综上所述,衍生物1-38c在体外化学水平、体外细胞水平和体内动物水平都具有良好的抗氧化和肝损伤保护作用,其作用机制可能与抑制细胞色素P450酶家族中CYP2E1的表达有关,今后将深入地研究其抗氧化作用及肝损伤保护作用的机制。
二、褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用（论文提纲范文）
（1）阿魏酸在阿尔茨海默病领域的研究进展（论文提纲范文）
| 1 阿魏酸抗AD药理研究进展 |
| 1.1 体外研究 |
| 1.2 体内研究 |
| 1.3 药物联用 |
| 2 抗AD阿魏酸衍生物的设计与合成 |
| 2.1 他克林-阿魏酸衍生物 |
| 2.2 小檗碱-阿魏酸衍生物 |
| 2.3 他克林-阿魏酸-一氧化氮供体衍生物 |
| 2.4 多奈哌齐-阿魏酸衍生物 |
| 2.5 咔唑-阿魏酸衍生物 |
| 2.6 memoquin-阿魏酸衍生物 |
| 2.7 异山梨醇-2-氨基甲酸酯-阿魏酸衍生物 |
| 2.8 阿魏酸水溶性衍生物 |
| 2.9 阿魏酸-他克林-褪黑素衍生物 |
| 2.10 利斯的明-阿魏酸衍生物 |
| 2.11 阿魏酸叔胺衍生物 |
| 2.12 喹啉-阿魏酸衍生物 |
| 2.13 美金刚-阿魏酸衍生物 |
| 2.14 阿魏酸其他衍生物 |
| 3 结语与展望 |
（2）基于PP2A/PP5/AMPK-JNK信号通路的异甘草酸镁/二甲双胍抗镉诱导细胞凋亡分子机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词(Abbreviations) |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 镉与细胞凋亡、氧化应激/ROS的关系 |
| 1 镉与细胞凋亡 |
| 1.1 镉的理化性质及其污染概述 |
| 1.2 镉对肝细胞凋亡的影响 |
| 1.3 镉对神经细胞凋亡的影响 |
| 2 镉与氧化应激的关系 |
| 3 ROS与细胞凋亡的关系 |
| 3.1 ROS概述 |
| 3.2 ROS与肝细胞凋亡的关系 |
| 3.3 ROS与神经细胞凋亡的关系 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 异甘草酸镁及二甲双胍研究进展 |
| 1 异甘草酸镁研究进展 |
| 1.1 Mg IG的理化性质 |
| 1.2 Mg IG的临床应用 |
| 2 二甲双胍研究进展 |
| 2.1 二甲双胍的理化性质 |
| 2.2 二甲双胍的临床应用 |
| 2.3 二甲双胍的多效性研究 |
| 2.4 二甲双胍与神经变性疾病 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 PP2A/PP5/AMPK-JNK信号转导及其与细胞凋亡的关系 |
| 1 PP2A的分子结构 |
| 2 PP5 的分子结构 |
| 3 AMPK的分子结构 |
| 4 JNK分子结构及MAPK信号家族 |
| 5 PP2A-JNK信号与细胞凋亡 |
| 6 PP5/AMPK-JNK信号与细胞凋亡 |
| 7 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第四章 异甘草酸镁通过抑制镉诱导肝细胞JNK通路激活抗凋亡机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 L02 及AML-12 细胞培养 |
| 1.3 细胞形态学观察 |
| 1.4 细胞活性分析 |
| 1.5 乳酸脱氢酶细胞毒性检测 |
| 1.6 重组腺病毒的构建及细胞感染 |
| 1.7 台盼蓝染色分析 |
| 1.8 DAPI/TUNEL染色 |
| 1.9 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.10 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 异甘草酸镁抗镉诱导肝细胞凋亡性死亡 |
| 2.2 异甘草酸镁靶向阻滞镉激活JNK通路抗肝细胞凋亡 |
| 2.3 钝化c-Jun表达增强异甘草酸镁抗镉诱导肝细胞凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS依赖的PP2A-JNK信号通路抗凋亡机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 L02 及AML-12 细胞培养 |
| 1.3 重组腺病毒的构建及细胞感染 |
| 1.4 胞内ROS成像分析 |
| 1.5 细胞活性检测 |
| 1.6 DAPI染色 |
| 1.7 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 异甘草酸镁逆转镉诱导肝细胞PP2A失活、JNK激活和凋亡 |
| 2.2 过表达PP2A强化异甘草酸镁抑制镉激活肝细胞JNK依赖的凋亡 |
| 2.3 异甘草酸镁抑制镉诱肝细胞过量ROS产生 |
| 2.4 异甘草酸镁抑制镉诱导肝细胞ROS依赖的PP2A-JNK信号通路抗凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 二甲双胍改善小鼠镉染毒模型大脑海马神经元凋亡与ROS和PP5/AMPK-JNK信号通路关系研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 实验动物来源与模型建立 |
| 1.3 脑组织石蜡包埋与样品处理 |
| 1.4 HE染色 |
| 1.5 Nissl染色 |
| 1.6 TUNEL染色 |
| 1.7 脑组织ROS分析 |
| 1.8 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 二甲双胍对镉染毒小鼠大脑海马组织的保护作用 |
| 2.2 二甲双胍抗镉染毒小鼠大脑海马神经元凋亡关联PP5/AMPK-JNK信号通路 |
| 2.3 二甲双胍抑制镉染毒小鼠脑组织ROS水平 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第七章 二甲双胍抗镉诱导神经细胞凋亡实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 PC12及SH-SY5Y细胞培养 |
| 1.3 小鼠原代神经元的分离和培养 |
| 1.4 细胞活性检测 |
| 1.5 DAPI和 TUNEL染色分析 |
| 1.6 Caspase-3/7 活性分析 |
| 1.7 线粒体膜电位检测 |
| 1.8 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.9 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 二甲双胍抗镉诱导的神经细胞活性下降 |
| 2.2 二甲双胍低抗镉诱导神经细胞凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第八章 二甲双胍调控PP5-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 PC12及SH-SY5Y细胞培养 |
| 1.3 小鼠原代神经元的分离和培养 |
| 1.4 重组腺病毒的构建及细胞感染 |
| 1.5 细胞免疫荧光染色 |
| 1.6 DAPI染色分析 |
| 1.7 细胞活性检测 |
| 1.8 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.9 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 二甲双胍通过抑制镉激活JNK通路抗神经细胞凋亡 |
| 2.2 钝化c-Jun强化二甲双胍抗镉诱导神经细胞凋亡 |
| 2.3 二甲双胍逆转镉诱导神经细胞PP5 失活 |
| 2.4 过表达PP5 增强二甲双胍抑制镉诱导JNK通路激活依赖的神经细胞凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第九章 二甲双胍调控AMPK抗镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 PC12及SH-SY5Y细胞培养 |
| 1.3 小鼠原代神经元的分离和培养 |
| 1.4 重组腺病毒的构建及细胞感染 |
| 1.5 DAPI染色分析 |
| 1.6 细胞活性检测 |
| 1.7 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 二甲双胍激活神经细胞AMPK表达并抵抗镉诱导AMPK失活 |
| 2.2 AICAR强化二甲双胍抑制镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡 |
| 2.3 钝化AMPK抵抗二甲双胍抑制镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡 |
| 2.4 持续激活AMPKα增强二甲双胍抑制镉诱导神经细胞JNK通路激活依赖的凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十章 二甲双胍调控线粒体ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和药品 |
| 1.2 PC12及SH-SY5Y细胞培养 |
| 1.3 小鼠原代神经元的分离和培养 |
| 1.4 胞内ROS成像分析 |
| 1.5 DAPI染色分析 |
| 1.6 免疫印迹(Western blot)分析 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 二甲双胍抑制镉诱导神经细胞过量ROS产生 |
| 2.2 NAC强化二甲双胍抑制镉诱导神经细胞ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗凋亡 |
| 2.3 Mito-TEMPO增强二甲双胍抑制镉诱导神经细胞ROS介导PP5/AMPK-JNK信号通路抗凋亡 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 全文结论 |
| 附1 攻读博士学位期间研究成果及获奖情况 |
| 致谢 |
（3）脑缺血再灌注模型建立及PCA神经保护研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 绪论 |
| 1.1 脑缺血再灌注概述 |
| 1.1.1 脑的结构与功能 |
| 1.1.2 神经细胞 |
| 1.1.3 脑缺血再灌注的机制 |
| 1.1.4 脑缺血再灌注的危害 |
| 1.1.5 脑缺血再灌注模型 |
| 1.1.6 脑缺血再灌注治疗药物进展 |
| 1.2 微流控芯片简介 |
| 1.2.1 微流控芯片的概念及发展 |
| 1.2.2 微流控芯片在类器官方向的应用 |
| 1.2.3 人脑类器官微流控芯片简介 |
| 1.2.4 未来发展方向及前景 |
| 1.3 原儿茶酸简介 |
| 1.4 本论文研究目的及研究内容 |
| 2 脑缺血再灌注微流控芯片的设计、加工及仿真模拟 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2.1 设计及模拟软件 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 脑缺血再灌注微流控芯片的设计 |
| 2.3.1 芯片设计理念 |
| 2.3.2 芯片设计内容 |
| 2.3.3 芯片设计取得的有益效果 |
| 2.4 脑缺血再灌注微流控芯片的加工 |
| 2.4.1 加工溶液的配制 |
| 2.4.2 PMMA材质顶层、底层夹板的加工 |
| 2.4.3 PDMS材质微流控芯片的加工 |
| 2.5 脑缺血再灌注微流控芯片的流体模拟 |
| 2.5.1 脑缺血再灌注芯片内的流体力学仿真 |
| 2.5.2 脑缺血再灌注芯片内的二氧化碳扩散仿真 |
| 2.6 小结 |
| 3 神经细胞的培养与选取 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验动物与实验细胞 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 溶液的配制 |
| 3.3.2 新生24h大鼠皮层神经元的提取 |
| 3.3.3 新生24h大鼠皮层神经元的原代培养 |
| 3.3.4 新生24h大鼠皮层神经元的免疫荧光染色鉴定 |
| 3.3.5 PC12 细胞的传代培养 |
| 3.3.6 PC12 细胞的冻存与复苏 |
| 3.3.7 PC12 细胞的生长曲线测定 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 新生24h大鼠皮层神经元原代培养的形态学观察 |
| 3.4.2 皮层神经元的免疫荧光染色鉴定 |
| 3.4.3 PC12 细胞传代培养的形态学观察 |
| 3.4.4 PC12 细胞的生长曲线测定 |
| 3.5 小结 |
| 4 芯片体系内原儿茶酸对脑缺血再灌注神经保护作用的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验试剂与仪器 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 溶液的配制 |
| 4.3.2 装置的搭建 |
| 4.3.3 对照组设置 |
| 4.3.4 形态学观察 |
| 4.3.5 CCK-8 增殖活性测定 |
| 4.3.6 荧光死活染色 |
| 4.3.7 乳酸脱氢酶漏出测定 |
| 4.3.8 免疫印记(Western Blot) |
| 4.3.9 统计学分析 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 PCA对经CIRI的 NCs形态学的影响 |
| 4.4.2 PCA对经CIRI的 NCs增殖活性变化的影响 |
| 4.4.3 PCA对经CIRI的 NCs死活情况的影响 |
| 4.4.4 PCA对经CIRI的 NCs乳酸脱氢酶漏出的影响 |
| 4.4.5 PCA对经CIRI的 NCs蛋白表达情况的影响 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（4）Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 阿尔茨海默症 |
| 1.1.1 阿尔兹海默症概述与发展趋势 |
| 1.1.2 阿尔兹海默症的发病机制 |
| 1.1.3 阿尔兹海默症的建模药物 |
| 1.1.4 阿尔兹海默症治疗药物的应用进展 |
| 1.2 金纳米粒子 |
| 1.2.1 金纳米粒子的特异性 |
| 1.2.2 金纳米粒子在生物医药领域中的应用 |
| 1.3 生物活性肽 |
| 1.3.1 生物活性肽的概述 |
| 1.3.2 功能性玉米肽 |
| 1.3.3 生物活性肽的治疗优势 |
| 1.4 立题依据与研究内容 |
| 第二章 Au@TPM纳米抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 S-Au@TPM抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.3.2 L-Au@TPM抗氧化剂的构建与表征 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 S-Au@TPM抗氧化剂的合成表征结果 |
| 2.4.2 L-Au@TPM抗氧化剂的合成表征结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 Au@TPM对L-谷氨酸诱导AD细胞模型的活性作用及相关机制的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 PC12 低分化细胞的培养 |
| 3.3.2 Au@TPM对 PC12 低分化细胞作用48 小时的形态学检测 |
| 3.3.3 L-谷氨酸对体外细胞模型建立的最适给药浓度筛选 |
| 3.3.4 盐酸多奈哌齐作为阳性对照药对PC12 低分化细胞最适给药剂量的筛选 |
| 3.3.5 s-TPM作为阴性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选 |
| 3.3.6 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导体外AD模型的细胞活力变化影响 |
| 3.3.7 细胞凋亡形态的分析检测 |
| 3.3.8 细胞内LDH含量的检测 |
| 3.3.9 细胞内Ca~(2+)内流浓度的检测 |
| 3.3.10 细胞内线粒体跨膜电位的检测 |
| 3.3.11 细胞内MDA含量的检测 |
| 3.3.12 细胞内CAT含量的检测 |
| 3.3.13 细胞内ROS含量的测定 |
| 3.3.14 统计学分析 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 Au@TPM诱导PC12 低分化细胞作用48 小时的形态学观察 |
| 3.4.2 L-谷氨酸对PC12 低分化细胞体外建模的最适给药浓度结果 |
| 3.4.3 盐酸多奈哌齐作为阳性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选结果 |
| 3.4.4 s-TPM作为阴性对照药对PC12 低分化细胞最适给药浓度的筛选结果 |
| 3.4.5 Au@TPM抑制由L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞损伤的活力变化结果 |
| 3.4.6 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞凋亡形态的影响 |
| 3.4.7 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞LDH的影响 |
| 3.4.8 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞Ca~(2+)内流的影响 |
| 3.4.9 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞线粒体跨膜电位的影响 |
| 3.4.10 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中MDA的影响 |
| 3.4.11 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中CAT的影响 |
| 3.4.12 Au@TPM对 L-谷氨酸诱导PC12 低分化细胞中ROS的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 Au@TPM对 Al Cl_3与D-半乳糖联合建立AD小鼠模型的神经保护作用及相关机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 阿尔兹海默症模型小鼠的建立和各组给药办法 |
| 4.3.2 实验小鼠给药后的体重指标检测 |
| 4.3.3 Morris水迷宫检测 |
| 4.3.4 自主活动实验 |
| 4.3.5 疲劳转棒行为学实验 |
| 4.3.6 实验各组小鼠的样本收集处理 |
| 4.3.7 乙酰胆碱(ACh)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.8 乙酰胆碱转移酶(Ch AT)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.9 乙酰胆碱酯酶(Ach E)含量在下丘脑及血清中的检测 |
| 4.3.10 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中MDA含量的影响 |
| 4.3.11 超氧化物歧化酶(SOD)在下丘脑及血清中含量的检测 |
| 4.3.12 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中CAT含量的影响 |
| 4.3.13 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)在下丘脑及血清中含量检测 |
| 4.3.14 Western Blot的检测分析 |
| 4.3.15 Au@TPM的体内生物分布研究 |
| 4.3.16 数据统计处理 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 各组实验小鼠给药后对体重指标的影响 |
| 4.4.2 Au@TPM改善实验小鼠水迷宫行为的结果 |
| 4.4.3 Au@TPM对实验小鼠疲劳转棒的影响 |
| 4.4.4 Au@TPM改善实验小鼠自主活动行为的结果 |
| 4.4.5 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中ACh的检测结果 |
| 4.4.6 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中Ch AT的检测结果 |
| 4.4.7 Au@TPM对 AD模型小鼠下丘脑及血清中Ach E的检测结果 |
| 4.4.8 Au@TPM抑制AD模型小鼠脑内MDA的含量 |
| 4.4.9 Au@TPM上调AD模型小鼠下丘脑及血清中SOD的含量 |
| 4.4.10 Au@TPM上调AD模型小鼠脑内CAT的含量 |
| 4.4.11 Au@TPM上调AD模型小鼠下丘脑及血清中GSH-Px的含量 |
| 4.4.12 Au@TPM对 AD模型小鼠脑组织中氧化应激信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 4.4.13 Au@TPM的体内生物分布影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）线粒体去极化在脑出血后继发性神经损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 线粒体功能障碍是脑出血后神经元铁超载的主要损伤特征 |
| 2.1 Fe~(2+)诱导PC-12神经元样细胞线粒体功能障碍 |
| 2.2 线粒体Fe~(2+)超载导致线粒体氧化呼吸异常与线粒体去极化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 线粒体Fe~(2+)内流/CypD乙酰化正反馈分子环路介导线粒体去极化 |
| 3.1 线粒体Fe~(2+)超载导致神经元线粒体膜电位去极化 |
| 3.2 CypD乙酰化介导线粒体亚铁超载导致的线粒体膜电位去极化 |
| 3.3 CypD乙酰化介导的mPTP开放促进线粒体Fe~(2+)内流 |
| 3.4 CypD乙酰化介导亚铁超载引起的线粒体功能障碍 |
| 3.5 CypD乙酰化介导亚铁超载引起的神经元死亡 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 小结 |
| 第四章 抑制线粒体去极化的脑出血后的神经保护作用 |
| 4.1 抑制CypD乙酰化可减少FeCl_2导致的神经元氧化应激而不影响细胞铁代谢 |
| 4.2 环孢素A治疗或CypD缺失可抑制脑出血后线粒体损伤和神经元调节性坏死 |
| 4.3 环孢素A治疗或CypD缺失可改善脑出血后神经功能 |
| 4.4 MitoQ减少脑出血后铁超载导致的OPC膜电位去极化及白质损伤 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 脑出血后线粒体损伤与氧化应激的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生学习期间所发表论文 |
| 致谢 |
（6）核桃抗氧化肽改善学习和记忆功能障碍的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 选题来源 |
| 1.2 氧化应激概述 |
| 1.3 坚果抗氧化肽概述 |
| 1.3.1 坚果抗氧化肽制备 |
| 1.3.2 坚果活性肽抗氧化检测方法 |
| 1.3.3 抗氧化肽分离纯化与鉴定 |
| 1.3.4 抗氧化肽构效关系 |
| 1.4 核桃活性肽概述 |
| 1.4.1 核桃营养及价值 |
| 1.4.2 核桃蛋白利用现状 |
| 1.4.3 核桃肽生物活性研究 |
| 1.5 记忆与认知功能障碍概述 |
| 1.5.1 记忆形成和记忆障碍 |
| 1.5.2 记忆与认知功能障碍发病机制 |
| 1.5.3 记忆与认知功能障碍检测方法 |
| 1.6 论文研究目的与意义 |
| 1.7 研究内容及创新点 |
| 1.7.1 主要研究内容 |
| 1.7.2 创新点 |
| 1.8 实验技术路线 |
| 第二章 核桃活性肽结构鉴定及筛选 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 核桃活性肽ESI-MS/MS结构鉴定及合成 |
| 2.2.2 核桃活性肽对氧自由基吸附能力的研究 |
| 2.2.3 核桃活性肽对体外细胞氧化损伤的研究 |
| 2.2.4 核桃活性肽热稳定性研究 |
| 2.2.5 核桃活性肽模拟胃肠道消化稳定性研究 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 核桃活性肽促进自噬改善氧化应激的机理初探 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 核桃活性肽对自噬相关蛋白表达的研究 |
| 3.2.2 核桃活性肽对溶酶体相关蛋白表达的研究 |
| 3.2.3 核桃活性肽对自噬小体的研究 |
| 3.2.4 核桃活性肽对Akt/mTOR信号通路的研究 |
| 3.2.5 自噬激活剂和自噬抑制剂对核桃肽改善PC12内氧化应激的研究 |
| 3.2.6 核桃活性肽对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞促进自噬降低氧化应激的作用机理 |
| 3.3 小结 |
| 第四章 核桃活性肽改善小鼠学习和记忆障碍的研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 MWM评估核桃活性肽对东莨菪碱诱导小鼠学习和记忆研究 |
| 4.2.2 核桃活性肽对小鼠体重及脏器毒性的研究 |
| 4.2.3 核桃活性肽对小鼠海马区病理形态的研究 |
| 4.2.4 尼式染色观察核桃活性肽对海马组织内神经元细胞结构的研究 |
| 4.2.5 罗丹明B标记核桃活性肽在小鼠体内吸收与分布的研究 |
| 4.3 小结 |
| 第五章 核桃活性肽改善东莨菪碱诱导小鼠海马组织的组学分析 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 质谱检测质量控制 |
| 5.2.2 样品重复性检测 |
| 5.2.3 蛋白磷酸化修饰组学鉴定结果 |
| 5.2.4 蛋白磷酸化修饰组学蛋白差异修饰结果 |
| 5.2.5 聚类分析 |
| 5.3 小结 |
| 第六章 核桃活性肽介导PINK1促进线粒体自噬改善神经元损伤的作用机制 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠海马组织内氧化应激和线粒体损伤的研究 |
| 6.2.2 TUNEL法检测小鼠海马区内神经元细胞凋亡情况 |
| 6.2.3 核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠海马组织内线粒体形态的研究 |
| 6.2.4 核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠海马组织线粒体相关蛋白表达的研究 |
| 6.2.5 核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠海马组织线粒体自噬相关蛋白表达的研究 |
| 6.2.6 核桃肽对东莨菪碱诱导小鼠海马组织NRF2/KEAP1/HO-1信号通路的研究 |
| 6.2.7 核桃肽对HT-22细胞活性的研究 |
| 6.2.8 核桃肽对H_2O_2诱导HT-22细胞内线粒体自噬的研究 |
| 6.2.9 核桃肽对H_2O_2诱导HT-22细胞内线粒体氧化应激的研究 |
| 6.2.10 核桃肽介导PINK1促进线粒体自噬改善小鼠学习记忆作用机理 |
| 6.3 小结 |
| 第七章 讨论 |
| 7.1 抗氧化肽的氨基酸序列 |
| 7.2 氧化应激与学习和记忆障碍的关系 |
| 7.3 自噬与学习和记忆障碍的关系 |
| 7.4 活性肽在体内吸收与分布的研究 |
| 第八章 结论与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（7）逐级靶向纳米递送系统构建及其治疗缺血性脑卒中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 第2章 线粒体靶向抗氧化剂三苯基膦-褪黑素合成及评价 |
| 2.1 材料和仪器 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 TPP-MLT合成与结构确证 |
| 2.2.2 TPP-MLT的细胞摄取 |
| 2.2.3 TPP-MLT的线粒体靶向研究 |
| 2.2.4 TPP-MLT的细胞活性研究 |
| 2.2.5 TPP-MLT的抗氧化活性研究 |
| 2.2.6 细胞内ROS检测 |
| 2.2.7 线粒体膜电位检测 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 TPP-MLT的合成 |
| 2.3.2 TPP-MLT的细胞摄取 |
| 2.3.3 TPP-MLT的线粒体靶向分布 |
| 2.3.4 TPP-MLT对氧化应激损伤细胞存活率的影响 |
| 2.3.5 TPP-MLT对氧化应激损伤细胞ROS产生的影响 |
| 2.3.6 TPP-MLT对氧化应激损伤细胞线粒体膜电位的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 TGN/SHp/TPP-MLT逐级靶向载药胶束构建及评价 |
| 3.1 材科和仪器 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 TGN-PEG-PLGA与 SHp-PEG-PLGA的合成及表征 |
| 3.2.2 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的构建 |
| 3.2.3 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的粒径与表面电位 |
| 3.2.4 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的形态结构观察 |
| 3.2.5 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的载药量 |
| 3.2.6 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的体外释放行为研究 |
| 3.2.7 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的稳定性研究 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 TGN-PEG-PLGA与 SHp-PEG-PLGA的合成及表征 |
| 3.3.2 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的构建 |
| 3.3.3 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的理化表征 |
| 3.3.4 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的载药量 |
| 3.3.5 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的体外释药研究 |
| 3.3.6 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的稳定性研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 TGN/SHp/TPP-MLT逐级靶向载药胶束的生物安全性评价 |
| 4.1 试剂与仪器 |
| 4.1.1 试剂 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的细胞毒性 |
| 4.2.2 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的生物相容性实验 |
| 4.2.3 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的体内毒性试验 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的细胞毒性 |
| 4.3.2 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的生物相容性 |
| 4.3.3 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的体内毒性 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中褪黑素及其代谢物浓度药代动力学研究 |
| 5.1 试剂与仪器 |
| 5.1.1 试剂 |
| 5.1.2 仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 色谱条件与质谱条件 |
| 5.2.2 标准品溶液的配制 |
| 5.2.3 血浆样本的处理 |
| 5.2.4 方法学考察 |
| 5.2.5 大鼠药代动力学研究 |
| 5.3 实验结果与讨论 |
| 5.3.1 方法学评价与优化 |
| 5.3.2 专属性 |
| 5.3.3 标准曲线绘制和定量下限 |
| 5.3.4 精密度和准确度 |
| 5.3.5 提取回收率和基质效应 |
| 5.3.6 稳定性考察 |
| 5.3.7 方法学应用 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 TGN/SHp/TPP-MLT 载药胶束的体内分布及药代动力学研究 |
| 6.1 试剂与仪器 |
| 6.1.1 试剂 |
| 6.1.2 仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 载荧光探针cy3的TGN/SHp/cy3 载药胶束的制备 |
| 6.2.2 b End.3 细胞摄取 |
| 6.2.3 体外血脑屏障转运 |
| 6.2.4 PC-12 细胞摄取 |
| 6.2.5 血液和组织中的TPP-MLT测定方法建立 |
| 6.2.6 药动学研究 |
| 6.2.7 体内分布 |
| 6.3 实验结果与讨论 |
| 6.3.1 TGN/SHp/cy3 载药胶束的b End.3 细胞摄取研究 |
| 6.3.2 TGN/SHp纳米载体的体外血脑屏障模型转运研究 |
| 6.3.3 TGN/SHp/cy3 载药胶束的PC-12 细胞摄取研究 |
| 6.3.4 TGN/SHp/cy3 载药胶束的药动学研究 |
| 6.3.5 TGN/SHp/cy3 载药胶束的体内分布研究 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束的药效学研究 |
| 7.1 试剂与仪器 |
| 7.1.1 试剂 |
| 7.1.2 仪器 |
| 7.1.3 实验动物 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 细胞活性研究 |
| 7.2.2 细胞内ROS检测 |
| 7.2.3 线粒体膜电位检测 |
| 7.2.4 缺血性脑卒中动物模型构建 |
| 7.2.5 实验分组及给药 |
| 7.2.6 神经功能缺失评分 |
| 7.2.7 磁共振检查 |
| 7.2.8 TTC染色 |
| 7.2.9 CIS模型动物脑组织氧化应激指标检测 |
| 7.2.10 CIS模型动物脑组织病理切片 |
| 7.3 实验结果与讨论 |
| 7.3.1 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对氧化应激损伤神经细胞存活率的影响 |
| 7.3.2 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对氧化应激损伤细胞ROS产生的影响 |
| 7.3.3 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对氧化应激损伤细胞线粒体膜电位的影响 |
| 7.3.4 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对CIS模型动物行为学的影响 |
| 7.3.5 磁共振检查 |
| 7.3.6 TGN/SHp/TPP-MLT载药胶束对CIS模型动物脑梗死的影响 |
| 7.3.7 组织病理学检查结果 |
| 7.3.8 CIS模型动物脑组织氧化应激水平的变化 |
| 7.4 本章小结 |
| 第8章 结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 褪黑素治疗脑缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
（8）褪黑素在铅所致神经细胞毒性中的保护作用研究（论文提纲范文）
| 全文缩写词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 设备 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.4 细胞处理 |
| 1.5 CC-8 实验检测细胞存活率 |
| 1.6 LDH实验检测细胞损伤率 |
| 1.7 Hoechst染色检测细胞凋亡率 |
| 1.8 免疫荧光检测Cleaved-Caspase-3和Cyto C的表达 |
| 1.9 荧光染色检测细胞和线粒体内ROS水平 |
| 1.10 蛋白提取 |
| 1.11 蛋白定量 |
| 1.12 Western Blot检测Nrf2和HO-1 蛋白水平 |
| 1.13 GSH含量测定 |
| 1.14 SOD酶活力测定 |
| 1.15 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 褪黑素减少铅所致PC12 细胞死亡 |
| 2.2 褪黑素减少铅所致PC12 细胞核损伤 |
| 2.3 褪黑素抑制Cleaved-Caspase-3 激活和Cyto C释放 |
| 2.4 褪黑素抑制铅所致PC12 细胞ROS水平升高 |
| 2.5 褪黑素抑制铅所致GSH含量减少和SOD酶活力下降 |
| 2.6 褪黑素提高PC12 细胞HO-1 和胞核Nrf2 蛋白的水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文索引表 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 近年来环烯醚萜类化合物的结构和生物学活性研究进展 |
| 1. 环烯醚萜类化合物的结构 |
| 2. 环烯醚萜的生物学活性 |
| 参考文献 |
| 综述二 环烯醚萜类化合物对氧化应激诱发疾病的药效学研究进展 |
| 1. 氧化应激的可能机理 |
| 2. 环烯醚萜类化合物降低机体氧化应激诱导疾病的实例 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 环烯醚萜类化合物结构确定及体外抗氧化研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 仪器和试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据处理 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 环烯醚萜类化合物自由基清除能力比较 |
| 3.2 环烯醚萜酯类化合物的结构确定和结构与活性关系研究 |
| 4. 小结 |
| 第三章 环烯醚萜类成分基于抗氧化应激的肿瘤细胞杀伤作用研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器与实验方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 环烯醚萜类化合物对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 3.2 环烯醚萜酯类化合物对促进HepG 2细胞凋亡作用的比较 |
| 3.3 环烯醚萜酯类化合物对HepG2细胞内ROS浓度的作用研究 |
| 4. 小结 |
| 第四章 环烯醚萜类成分基于抗氧化应激的神经细胞保护作用研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 试剂与耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 PC12细胞形态观察 |
| 3.2 H_2O_2处理PC12细胞损伤模型的建立及鉴定 |
| 3.3 环烯醚萜化合物对PC 12细胞生长的影响 |
| 3.4 细胞存活率实验结果 |
| 3.5 环烯醚萜类化合物降低氧化损伤后的PC12细胞作用研究 |
| 3.6 环烯醚萜类化合物降低氧化损伤的PC12细胞内ROS浓度的作用研究 |
| 4. 小结 |
| 4.1 实验涉及的主要离子通道介绍 |
| 4.2 环烯醚萜苷类的主要离子通道分析 |
| 第五章 蜘蛛香药材及啤酒花缬草提取物片成分及生物活性分析 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验部分 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器及实验方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 数据统计 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 蜘蛛香药材中主要活性成分定性定量分析 |
| 3.2 蜘蛛香及其主要活性成分自由基清除能力分析 |
| 3.3 缬草啤酒花提取物片(制剂)成分分析 |
| 3.4 蜘蛛香药材、制剂及化合物生物活性比较 |
| 3.5 缬草环烯醚萜酯类化合物的降解规律探讨 |
| 4. 小结 |
| 4.1 蜘蛛香中抗氧化活性成分分析 |
| 4.2 缬草环烯醚萜酯类化合物信号通路分析 |
| 4.3 蜘蛛香药材和制剂在缓解由氧化应激诱导的睡眠障碍和焦虑症的讨论 |
| 4.4 药材、制剂与单体之间的相互关系 |
| 第六章 结语 |
| 1. 结果与讨论 |
| 2. 主要创新点 |
| 3. 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（10）Anastatins A&B及其衍生物抗氧化作用及对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 氧化应激概述 |
| 1.1.1 氧化应激与自由基 |
| 1.1.2 自由基清除与抗氧化 |
| 1.1.3 氧化应激与疾病 |
| 1.2 肝损伤 |
| 1.3 抗氧化能力评价方法的研究进展 |
| 1.3.1 体外化学方法评价抗氧化能力 |
| 1.3.2 体外细胞模型评价抗氧化能力 |
| 1.3.3 体内动物肝损伤评价模型 |
| 1.4 抗氧化物质的类型及应用 |
| 1.4.1 天然抗氧化产物 |
| 1.4.2 合成类抗氧化物质 |
| 1.5 ANASTATINS A&B研究简介 |
| 1.6 本课题的立题依据和研究内容 |
| 1.6.1 立题依据 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 细胞株 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 测试化合物 |
| 2.1.6 常用试剂配制 |
| 2.1.7 细胞的培养与冻存 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Anastatins A&B及其衍生物的体外化学评价 |
| 2.2.2 (±)Anastatins A&B及其衍生物细胞模型活性评价 |
| 2.2.3 1-38c对PC12细胞氧化损伤的保护作用机制研究 |
| 2.2.4 化合物1-38c对小鼠的急毒试验研究 |
| 2.2.5 化合物1-38c对小鼠急性肝损伤的保护作用研究 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 ANASTATINSA&B及其衍生物的体外化学评价 |
| 3.1.1 总还原能力的实验结果 |
| 3.1.2 ABTS·自由基清除能力的实验结果 |
| 3.1.3 DPPH·自由基清除能力法评价的实验结果 |
| 3.2 ANASTATINS A&B及其衍生物细胞模型活性评价 |
| 3.2.1 H_2O_2刺激PC-12细胞氧化损伤的保护作用结果 |
| 3.2.2 H_2O_2刺激L02细胞氧化损伤的保护作用结果 |
| 3.3 衍生物1-38c对PC12细胞氧化损伤的保护作用机制研究 |
| 3.4 衍生物1-38c对小鼠的急毒试验研究 |
| 3.5 衍生物1-38c对小鼠急性肝损伤的保护作用研究 |
| 3.5.1 血清AST的活性变化 |
| 3.5.2 血清ALT的活性变化 |
| 3.5.3 血清LDH的活性变化 |
| 3.5.4 肝匀浆中GSH的含量变化 |
| 3.5.5 HE染色 |
| 3.5.6 血清中CYP2E1的活性 |
| 3.5.7 肝脏中CYP2E1蛋白的表达 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 6 参考文献 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 8 致谢 |
四、褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用（论文参考文献）
- [1]阿魏酸在阿尔茨海默病领域的研究进展[J]. 关丽,赵惠茹,李伟泽,李瑞佳,胡娅琪. 中国药物化学杂志, 2021(10)
- [2]基于PP2A/PP5/AMPK-JNK信号通路的异甘草酸镁/二甲双胍抗镉诱导细胞凋亡分子机制研究[D]. 陈晓玲. 南京师范大学, 2021
- [3]脑缺血再灌注模型建立及PCA神经保护研究[D]. 骆航. 大连理工大学, 2021(01)
- [4]Au@TPM的构建及抗阿尔兹海默症活性作用的机制研究[D]. 张峻榕. 吉林大学, 2021(01)
- [5]线粒体去极化在脑出血后继发性神经损伤中的作用及机制研究[D]. 陈蔚翔. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021
- [6]核桃抗氧化肽改善学习和记忆功能障碍的分子机制研究[D]. 赵凡睿. 吉林农业大学, 2021
- [7]逐级靶向纳米递送系统构建及其治疗缺血性脑卒中的应用研究[D]. 刘进. 南昌大学, 2020(01)
- [8]褪黑素在铅所致神经细胞毒性中的保护作用研究[D]. 刘雅文. 华中科技大学, 2019(01)
- [9]环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究[D]. 王菲菲. 北京中医药大学, 2018(08)
- [10]Anastatins A&B及其衍生物抗氧化作用及对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究[D]. 李旭哲. 天津科技大学, 2017(01)