一、心肌梗死后神经生长因子的动态表达及其与交感神经重构的关系（论文文献综述）
张学丽[1]（2021）在《LncRNA H19调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制》文中进行了进一步梳理研究背景心肌梗死（myocardial infarction,MI）严重威胁着人类的健康,而且发病率呈上升的趋势,患者年龄也逐渐年轻化。恶性室性心律失常（ventricular arrhythmias,VAs）及心源性猝死（sudden cardiac death,SCD）是 MI 患者致死、致残的重要原因。近年来一系列研究及我们既往研究证实MI后恶性Vas及SCD与心脏交感神经再生重构导致的心脏自主神经失衡引发心电不稳定有关。因此探索MI后交感神经重构的具体机制将为降低Vas及SCD发生率、改善远期预后提供防治措施和理论依据。交感神经再生重构与炎症反应密切相关。交感神经重构主要发生在炎症细胞和炎症因子等大量聚集的梗死灶周,炎症细胞（巨噬细胞、成纤维细胞等）通过分泌神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对交感神经重构起着关键性调控作用。在交感神经重构的过程中,NGF是不可或缺的重要因子,抑制NGF分泌可有效降低交感神经过度重构,其调控机制未完全阐明。近年研究显示,长链非编码RNA（long Non-coding RNA,lncRNA）虽然不编码蛋白,但其可在组织生理生化发生变化时,与DNA、RNA或蛋白质相互作用,通过基因印记、染色质重塑等机制调控基因表达。lncRNA H19是一种目前研究较多的lncRNA,多项研究已证实,lncRNA H19参与肿瘤、炎症、代谢相关疾病的发生、发展过程,并成为有效治疗靶点。在心血管领域,lncRNA H19已被发现参与动脉粥样硬化、肥厚性心肌病以及心力衰竭等疾病的病理生理过程。lncRNA H19是否参与MI后交感神经再生重构过程尚不得而知。lncRNA H19可作为多种miRNA的“海绵”（miRNA sponge）,通过序列互补结合miRNA,进而控制miRNA的数量及活性,调控其靶基因的表达水平。通过生物信息学分析网站RNAhybrid和Targetscan,我们预测到lncRNA H19及NGF均是miR-let-7a的靶基因,课题组前期研究也发现过表达miR-let-7a可抑制NGF的表达,进而改善了 MI后交感神经重构。因此我们提出假说:MI后过表达的lncRNA H19可能通过结合miR-let-7a发挥miRNA海绵（miRNA sponge）作用,通过ceRNA机制减少了 miR-let-7a对其靶基因NGF的抑制作用,NGF表达增加,进而促进心脏交感神经损伤后的再生重构。干预lncRNA H19-miR-let-7a-NGF信号通路将为MI后室性心律失常的防治提供新靶点。研究目的我们旨在探讨lncRNA H19、miR-let-7a和NGF在MI后的调控关系,以及是否参与MI后交感神经重构和可能的机制。研究方法实验一:为明确MI后7天lncRNA H19和NGF的表达情况,将14只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（260-280g左右）分成心肌梗死组和假手术组,每组7只。Western blotting和qRT-PCR检测NGF和lncRNA H19的表达差异。心肌梗死组心梗模型结扎其左冠状动脉前降支;假手术组只在相应冠脉部位穿线但不打结。实验二:为了研究lncRNA H19、NGF和MI后交感神经重构的调控关系,将32只SD大鼠随机分为4组:假手术+对照病毒组、假手术+lncRNA H19沉默病毒组、心肌梗死+对照病毒组、心肌梗死+lncRNA H19沉默病毒组,每组8只。在MI手术当天,将lncRNA H19沉默慢病毒或对照病毒注射入左心室心肌。在MI后7天处死之前,进行程序电刺激实验检测心律失常易感性;然后取出心脏和血液进行 western blotting,ELISA 检测 NGF 表达,qRT-PCR 检测 lncRNA H19 表达情况;交感神经再生情况则通过免疫荧光实验观察梗死灶周生长相关蛋白43（growthassociatedprotein43,GAP43）和酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase,TH）的阳染面积进行分析。实验三:为了验证沉默lncRNA H1 9通过调控NGF表达而抑制MI后交感神经重构,将24只SD大鼠随机分为心肌梗死+对照病毒组、心肌梗死+lncRNA H19沉默病毒组和心肌梗死+lncRNA H19沉默病毒+NGF过表达病毒组,每组8只,进行回复实验。采用Western blotting和免疫荧光实验检测梗死灶周NGF的表达及TH及GAP43两种神经纤维的阳性表达来分析交感神经再生情况。实验四:为了验证lncRNA H19、miR-let-7a和NGF的调控机制,通过RNAhybrid和Targetscan 分别预测了 lncRNA H19 和 miR-let-7a 以及 miR-let-7a 和 NGF 的靶向作用,然后沉默lncRNA H19后行qRT-PCR检测miR-let-7a表达情况,再行双荧光素酶报告基因分析验证以上两者各自直接作用情况。研究结果1.MI 后 7 天,lncRNAH19、NGF 表达上调;2.沉默lncRNA H19降低了 MI后交感神经重构;与假手术组相比,心肌梗死组TH,GAP43阳染面积升高,表明MI后交感神经再生;在心梗造模后左室壁定点注射lncRNA H19沉默慢病毒后,与心肌梗死+对照病毒组相比,心肌梗死+lncRNA H19沉默病毒组TH和GAP43阳染面积显着下降,则沉默lncRNA H19的表达可改善心肌梗死后心脏交感神经的重构;程序性电刺激示:心肌梗死+对照病毒组实验大鼠较假手术+对照病毒组对VAs的易感性增加,而与心肌梗死+对照病毒组相比,心肌梗死+lncRNA H19沉默病毒组VAs成功诱发率下降,评分降低,说明沉默lncRNA H19降低了 MI后的VAs易感性;3.lncRNA H.19通过调控NGF抑制心肌梗死后交感神经重构:如前所述,与假手术组相比,MI 7天后lncRNA H19和NGF表达水平均升高,而随着lncRNAH19的沉默,NGF表达下调;转染NGF过表达病毒可减弱lncRNAH19沉默病毒对NGF蛋白表达的抑制作用,免疫荧光结果显示:转染NGF过表达病毒可部分改善lncRNA H19沉默病毒对TH和GAP43的抑制作用;以上实验结果进一步表明NGF在心梗后交感神经重构中的作用且lncRNA H19通过调控NGF参与了心肌梗死后交感神经重构;4.lncRNA H19 靶向调控miR-let-7a:RNAhybrid预测两者具有靶点结合位点;无论是假手术组还是心肌梗死组,沉默lncRNA H19均使miR-let-7a表达上调;双荧光素酶报告基因结果示:与miR-let-7a质粒共转染显着降低了 lncRNA H19野生型的相对荧光素酶活性,但对突变型几乎没有影响;5.miR-let-7a靶向调控NGF:Targetscan预测两者具有直接作用靶点;双荧光素酶报告基因分析示:与相应的对照相比,miR-let-7a抑制了野生型NGF 3’UTR的荧光素酶活性,而不抑制突变型NGF 3’UTR在293T细胞中的荧光素酶活性,提示NGF是miR-let-7a的直接靶基因。结论1.MI后过表达的lncRNA H19可能在交感神经重构中起着重要作用;2.lncRNA H19 通过 ceRNA 机制结合 miR-let-7a,解除了 miR-let-7a 对其靶基因NGF的抑制作用,NGF表达增加;3.沉默lncRNAH19,抑制了 MI后交感神经的再生重构,干预lncRNAH19-miR-let-7a信号通路将为MI后室性心律失常的防治提供新靶点。
李赛赛[2]（2021）在《连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV和血浆CA的影响及相关机制研究》文中研究说明冠心病是临床常见病和多发病,严重威胁着人们的身体健康和生命安全。随着生活节奏的加快、工作压力的增加、饮食结构的改变等,痰热痹阻在胸痹的发生发展中占据着不容忽视的地位,临床应重视痰热型冠心病患者的存在。临床观察发现,冠心病痰热证患者表现症状与现代医学自主神经功能失调状态相符合。研究表明,自主神经系统在“心主血脉”与“心主神明”之间发挥着重要的介导作用,冠心病痰热证与自主神经功能紊乱关系密切。导师李平教授创立连夏宁心方,共奏清热化痰以畅血脉,宁心安神以调神明,达到血脉-神明共治之效。本研究临床部分从自主神经角度阐述连夏宁心方对冠心病痰热证患者心率变异性（Heart rate variability,HRV）和血浆儿茶酚胺（Catecholamine,CA）的干预作用。团队前期通过高效液相-电喷雾-三重四级杆质谱法（HPLC-ESI-MS/MS）分析,显示连夏宁心方的重要有效组分来自黄连、半夏。基础实验以连夏颗粒给药干预,明确对心梗大鼠HRV、血浆CA和炎症反应的影响,并从NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路探讨连夏颗粒改善交感神经重构的作用机制。研究一连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV和血浆CA影响目的:初步评价连夏宁心方治疗冠心病痰热证患者HRV和血浆CA的疗效和安全性。方法:本试验采用随机双盲安慰剂平行对照的研究方法,共纳入符合入组标准的冠心病痰热证患者80例,随机分配至连夏宁心方治疗组与安慰剂对照组,两组各40例。治疗组给予西医常规治疗联合连夏宁心方,对照组则在西医常规治疗的基础上给予安慰剂,均治疗4周。通过统计分析两组患者治疗前后的HRV指标（SDNN、SDNN index、SDANN、rMSSD、PNN50）、血浆CA（去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）、肾上腺素（Epinephrine,E）和多巴胺（Dopamine,DA））和痰热证量表评分,验证连夏宁心方对冠心病痰热证患者的心率变异性、血浆儿茶酚胺及中医证候的有效性。结果:（1）在心率变异性方面,治疗4周后,治疗组SDNN、SDANN、PNN50均有增高趋势,组内比较差异具有显着性（P<0.05）,对照组治疗前后组内比较,各指标变化不一,变化趋势均不显着（P>0.05）。治疗4周后组间比较显示,治疗组SDNN、SDANN指标优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,余指标组间两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）在血浆儿茶酚胺方面,治疗4周后,组内比较,治疗组NE指标较治疗前明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,余指标变化无显着性（P>0.05）;对照组组内比较差异无统计学意义（P>0.05）。治疗4周后组间比较,治疗组NE指标优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,余指标组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。（3）在痰热证评分方面,组内比较,两组治疗2周后、治疗4周后与治疗前比较,差异均具有统计学意义;治疗组在治疗4周与治疗2周比较,差异也具有统计学意义;但对照组治疗4周与治疗2周比较不具有显着性差异。组间比较,治疗2周时,两组患者痰热证评分疗效相当,差异不具有统计学意义（F=0.795,P=0.378）;治疗4周时,治疗组患者痰热证评分较对照组患者痰热证评分明显降低,差异具有统计学意义（F=9.789,P=0.003）。（4）安全性方面,两组患者肝肾功能无明显异常,未见明显不良反应。结论:连夏宁心方可提高冠心病痰热证患者的HRV,降低血浆CA,改善自主神经功能,但有待于更大样本量的研究进一步证实。研究二连夏颗粒对心肌梗死大鼠HRV、血浆CA和炎症反应的影响目的:观察连夏颗粒对心肌梗死大鼠HRV、血浆CA及炎症反应的影响。方法:采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法制备心肌梗死模型,将造模成功的SD大鼠随机分为模型组、连夏颗粒高、中、低剂量组和美托洛尔组,另设假手术组。连续给予相应药物干预30天后,记录大鼠Ⅱ导联心电图,测定大鼠HRV低频功率（Low-frequency power,LF）、高频功率（High-frequency power,HF）和 LF/HF 比值,ELISA法检测血浆CA和血清TNF-α、IL-Iβ的含量,Western Blot检测心肌P38蛋白表达,RT-PCR检测心肌P38mRNA水平,HE染色观察心肌病理学改变。结果:（1）HRV:与假手术组比较,模型组大鼠LF、LF/HF显着降低（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组LF显着提高（P<0.01）,连夏颗粒高剂量组LF/HF显着提高（P<0.01）,连夏颗粒中剂量组和美托洛尔组LF/HF明显提高（P<0.05）。各组之间HF未见明显差异（P>0.05）。（2）血浆CA:与假手术组比较,模型组大鼠血浆CA含量显着升高（P<0.01）。连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组大鼠血浆CA含量显着低于模型组（P<0.01）。（3）血清TNF-α、IL-Iβ:与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-Iβ显着升高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高、中剂量组和美托洛尔组大鼠血清TNF-α、IL-Iβ显着降低（P<0.01）,连夏颗粒低剂量组血清TNF-α显着降低（P<0.01）,连夏颗粒低剂量组IL-Iβ未见显着性差异（P>0.05）。（4）心肌P38蛋白和mRNA:与假手术组比较,模型组大鼠心梗周围区心肌组织P38蛋白和mRNA表达显着上升（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高剂量组P38蛋白表达明显降低（P<0.05）,余组P38蛋白表达有降低趋势,但未见明显统计学差异（P>0.05）。与模型组比较,连夏颗粒高、中剂量组和美托洛尔组的P38mRNA表达显着降低（P<0.01）,连夏颗粒低剂量组P38mRNA表达明显降低（P<0.05）。（6）HE染色:与假手术组相比,模型组大鼠心梗周围区心肌细胞肿胀、排列紊乱,心肌间质出现大量炎症细胞浸润。连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组心肌纤维排列较为整齐,炎症细胞浸润程度明显减轻。结论:连夏颗粒可改善心梗大鼠HRV,降低血浆CA水平,减轻炎症反应。研究三基于NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路探讨连夏颗粒对心肌梗死大鼠交感神经重构的影响目的:探讨连夏颗粒对心肌梗死大鼠交感神经重构的影响及潜在机制。方法:通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、连夏颗粒高、中、低剂量组和美托洛尔组,另设假手术组。干预30天后干预30天后采用在体程控电刺激检测大鼠心律失常发生率,运用Western blot和RT-PCR法检测大鼠心梗周围区TH、NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路关键蛋白和mRNA的表达,免疫组织化学染色检测TH神经纤维的分布。结果:（1）TH蛋白和mRNA表达:与假手术组比较,模型组心梗周围区TH蛋白和mRNA的表达显着升高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组TH蛋白和mRNA的表达显着降低（P<0.01）。（2）免疫组化TH表达及分布:与假手术组比较,模型组TH阳性神经纤维明显增多,形态粗大,分布紊乱,部分聚集成束,模型组TH阳性表达的平均光密度显着增加（P<0.01）。连夏高、中、低剂量组和美托洛尔组TH表达减少,与模型组比较,连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组TH阳性表达的平均光密度显着降低（P<0.01）。（3）心律失常发生率:电生理结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心律失常发生率显着提高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高剂量组和美托洛尔组心律失常发生率降低（P<0.01,P<0.05）,连夏颗粒中、低剂量组心律失常诱发率有降低趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。（4）NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路mRNA表达:与假手术组比较,模型组心梗周围区心肌组织NGF和TrKA mRNA的表达显着升高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高剂量组和美托洛尔组NGF和TrKA mRNA表达显着降低（P<0.01）,连夏颗粒中剂量组NGF和TrKA mRNA表达不同程度的降低（P<0.01,P<0.05）,连夏颗粒低剂量组未见统计学差异（P>0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠心梗周围区PI3K mRNA和AKT mRNA的表达显着升高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高、中剂量组和美托洛尔组PI3K mRNA和AKT mRNA表达显着下降（P<0.01）。连夏颗粒低剂量组PI3K mRNA和AKT mRNA表达明显下降（P<0.05）。（5）NGF/TrKA/PI3K/AKT通路关键蛋白表达:与假手术组比较,模型组大鼠NGF和TrKA蛋白表达显着增加（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高、中剂量组和美托洛尔组NGF和TrKA蛋白表达显着下降（P<0.01）,连夏颗粒低剂量组NGF和TrKA蛋白表达不同程度的下降（P<0.01,P<0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠P-PI3K蛋白、P-AKT蛋白、P-Bad蛋白表达显着升高（P<0.01）。与模型组比较,连夏颗粒高中低剂量组和美托洛尔组P-PI3K蛋白、P-AKT蛋白、P-Bad蛋白表达显着下降（P<0.01）。结论:连夏颗粒可能通过调控NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路改善了心梗后交感神经重构。
郑璐[3]（2020）在《miR-let-7a调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制》文中研究说明研究背景随着心源性猝死（sudden cardiac death,SCD）的病死率不断增加,越来越多的人开始关注心肌梗死,这一冠心病（Coronary heart disease,CHD）中最为严重的类型。临床上冠状动脉内的不稳定斑块突然破裂,炎症细胞等细胞因子不断聚集,导致血流部分阻断或完全闭塞,局部心肌细胞缺血性坏死,从而引起的一系列病理生理学过程,称之为心肌梗死（myocardial infarction,MI）。MI后室性心律失常（VAs）的出现,是造成该疾病患者死亡的主要原因之一,以往我们的研究已经证实,MI后VAs的频发多与交感神经活性相关,异常的交感神经激活与再生将会造成心脏电生理不稳定,而神经生长因子（NGF）又是这一过程的关键因子。因此如何寻找到上游有效靶点对VAs的发生起到很好的控制作用,在临床意义上来讲有着至关重要的作用。miRNA是一种非编码RNA,序列较为短小的单链RNA,于真核生物中高度表达,与靶基因的3’ UTR的部分区域或者全部区域通过碱基互补配对的方式相结合,从而使靶基因的mRNA分解,无法实现蛋白的翻译过程,进一步抑制下游因子发挥作用,最后起到调节细胞因子的释放、组织器官的生长和发育、内环境的稳定等作用。已有国内外研究者发现miRNA与肿瘤、炎症、冠心病、糖尿病等疾病相关。miR-let-7a作为miRNA中最早发现的一种,可以通过多种机制参与细胞增殖与分化、血管生成、器官发育等病理生理过程,很多文献也有记载,miR-let-7a与肥厚型心肌病、冠心病、心力衰竭等心脏疾病有着密切的联系,由此可见,miR-let-7a在心血管疾病中的作用非同小可,也有文章表明miR-let-7a可以参与促炎性因子的分泌调控炎症反应,但在心律失常领域,miR-let-7a发挥的作用机制有待进一步研究。因此我们猜想,miR-let-7a是影响NGF表达的较为关键的一环,参与了 VAs的发病机制。研究目的利用miR-let-7a过表达病毒对体内、体外实验进行干预,观察miR-let-7a及NGF的表达趋势,测量GAP43及TH的阳性神经纤维密度,以及心律失常的易感性,以明确miR-let-7a在心肌梗死后室性心律失常的作用机制研究方法本实验由体内实验和体外实验两个部分组成,首先,我们将体内实验分为4组,分别为 sham+NC 组、sham+Len-let-7a 组、MI+NC 组、MI+Len-let-7a 组。MI+NC组及MI+Len-let-7a组的大鼠采用结扎前降支完成心梗模型的制备,sham+NC组及sham+Len-let-7a组只将线穿过,并不完成结扎。7天后对所有的老鼠进行心脏取材,并采用同样的Western blot、qRT-PCR、免疫荧光、电刺激等实验方法,对相应指标进行检测。体外实验是先将M0型巨噬细胞经LPS+IFN-γ诱导为M1型巨噬细胞,给予miR-let-7a过表达病毒干预,检测miR-let-7a、NGF等相应指标的变化。研究结果1.MI+NC组及MI+Len-let-7a组的大鼠在行结扎左前降支术后数分钟内即可出现所结扎的动脉的供血区心肌颜色变为暗红色,心肌搏动消失,心电图示ST段抬高,提示造模成功。2.体内实验,我们可以得出MI+NC组较sham+NC组的miR-let-7a表达量减少,NGF的分泌量有所上升,交感神经的数目也有增加,经miR-let-7a过表达病毒处理后的MI+Len-let-7a组,心肌内miR-let-7a有所上升,NGF较MI+NC组分泌减少,交感神经重构有所改善。3.体外实验同样表现为M1+Len-let-7a组NGF的表达量较未干预的M1+NC组有明显的降低。结论过表达的miR-let-7a可有效的抑制心肌梗死后NGF的表达,对交感神经的重构现象予以改善,使室性心律失常的易感性普遍降低,最终达到降低心肌梗死死亡率的目的。
陈曦[4]（2020）在《益气活血方基于钙稳态调节对心肌梗死大鼠心律失常防治作用的研究》文中研究指明背景心肌梗死后,缺血缺氧导致的心肌细胞钙超载,是造成心梗心肌缺血损伤的关键因素之一。细胞钙超载使心肌细胞的过度收缩,细胞骨架成分变形超过正常收缩时的缩短程度,形成不可逆损伤,并使相邻心肌细胞相互破坏及坏死范围扩大,从而导致心肌梗死后多种病理改变,包括急性心功能不全、心律失常、心脏破裂等。因此,需要探究心肌梗死后细胞内钙稳态的调控机制,阐明益气活血方调节心梗后心肌细胞钙稳态作用机理以及中药作用靶点,可能对防治心肌缺血后心肌细胞损伤有重要的理论和实践意义。心肌梗死后严重的室性心律失常是病残率和病死率的重要原因,因此也是心肌梗死后降低死亡率和提高患者生存质量的治疗关注点。目的本研究通过观察心肌梗死大鼠心功能、组织和亚细胞结构、心肌细胞钙稳态调节相关蛋白等的变化情况,阐明益气活血方对心肌梗死后心脏的保护作用,进而说明益气活血方对心梗后心律失常的防治作用。方法实验研究分为动物实验和急性心肌细胞分离实验动物实验:健康雄性SD大鼠,行左冠状动脉前降支（left anterior descending,LAD）结扎术复制大鼠急性心梗模型。按照术后24小时心电图情况将动物随机分为4组:模型组（Model,M）,益气活血方组（YQHX,Y）,美托洛尔组（Metoprolol,MT）,以及只穿线不结扎的假手术组（Sham,S）。4周后进行心动超声、HE染色、Masson染色、透射电镜检测,Elisa检测血清BNP含量,Western blot检测梗死边缘区钙稳态调节相关蛋白、缝隙连接蛋白Cx43及其磷酸化蛋白的表达情况;此外,使用在体心脏电刺激检测各组心律失常易感性。急性心肌细胞分离实验:在28天时,急性分离各组大鼠心脏梗死边缘区细胞,研究持续搏动状态下各组心肌细胞收缩和舒张情况、钙瞬变、肌浆网钙泄漏情况,分析各组心肌细胞舒缩功能、钙瞬变幅度等的变化。结果1.大鼠心功能变化的评估。与假手术组相比,模型组大鼠心功能受损严重,使用益气活血方和美托洛尔干预后,心功能改善明显。2.心肌梗死后心肌组织形态和细胞超微结构的变化。心肌细胞组织HE染色结果显示,假手术组细胞排列整齐,心肌纤维结构清楚,未见明显的胶原纤维,细胞连接处未见破坏;模型组梗死边缘区有明显的心肌纤维断裂,心肌细胞间隙较大,边界不规则,心肌细胞排列不规则,有炎性细胞浸润和显着的胶原纤维增生;益气活血组和美托洛尔组大鼠梗死边缘区心肌组织发现部分炎性细胞浸润,细胞形状趋向规则,有部分纤维及胶原组织增生。与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞平均直径、周长、横截面积均显着性升高,与模型组相比,两用药组各参数降低,改变趋势向假手术组接近。心肌组织Masson染色结果显示,假手术组心肌细胞呈红染,大小正常,排列整齐,结构清晰,间质呈蓝染,可见少量胶原纤维;模型组心肌细胞结构紊乱且间隙变宽,梗死区组织广泛胶原纤维蓝染,弥漫性分布,间质大量纤维束将心肌细胞分隔呈条形或小岛状,大血管周围可见较多胶原纤维染色;两用药组病理改变较模型组均有所减轻,梗死区蓝染面积较模型组减小。心肌细胞超微结构方面,假手术组心肌细胞心肌纤维排列整齐,有完整的肌小节,Z线、M线清晰可辨,线粒体排列在肌原纤维中间,分布均匀,线粒体嵴结构清晰,基质颗粒分布均匀;模型组动物心肌梗死边缘区心肌细胞结构严重受损,出现明显的肌丝断裂,Z线、M线不清晰,线粒体排列紊乱,形态不规则,失去原有结构,线粒体嵴模糊不清,部分线粒体空泡化,但部分已有修复倾向;益气活血方组心肌细胞内部结构较为完好,断裂的肌丝趋向线性排列,线粒体与肌丝之间仍有间隙,并可见在断裂的肌丝附近有线粒体填充,线粒体总体排列较为规则,内部结构较为清晰,基质颗粒分布较为均匀。3.心梗大鼠心肌室颤阈值的变化情况。心肌梗死28天后,与假手术大鼠相比,模型组大鼠室颤阈值显着降低,益气活血方组和美托洛尔组心梗大鼠的室颤阈值升高,室性心律失常易感性降低。4.心梗大鼠梗死边缘区心肌细胞收缩和钙瞬变的变化情况。与假手术组相比,模型组心肌细胞舒缩功能降低,以舒张功能的变化明显（p<0.01）,益气活血方和美托洛尔均能够改善心梗后心肌细胞舒缩功能损伤,与模型组相比,益气活血方能够显着提高心肌梗死边缘区心肌细胞最大收缩速率、最大舒张速率、50%收缩时间、50%舒张时间（p<0.01）,增加心肌细胞收缩幅度（p<0.01）,减少心肌细胞收缩达峰时间（p<0.01）,美托洛尔对心肌细胞舒缩功能的改善主要表现在增强心肌细胞舒张功能（p<0.01）、增加舒张期肌小节长度（p<0.01）和缩短细胞收缩达峰时间（p<0.01）。钙瞬变相关指标方面,与假手术组相比,模型组心肌细胞钙瞬变幅度和钙离子消除时间常数均增加（p<0.05）,与模型组相比,两用药组钙瞬变幅度有下降趋势但差异不明显,益气活血方组钙离子消除时间常数明显下降（p<0.01）,美托洛尔组显示出下降趋势但差异不显着。5.大鼠心肌梗死边缘区心肌细胞肌浆网钙泄漏的变化及梗死边缘区组织钙稳态调节相关蛋白的表达情况。肌浆网钙泄漏检测结果显示,与假手术组相比,模型组心肌细胞肌浆网钙泄漏更高（p<0.01）,与模型组相比,益气活血方组和美托洛尔组心肌细胞钙泄漏下降明显（p<0.05）。Westerm Blot结果显示,与假手术相比,模型组大鼠心肌梗死边缘区RYR2、SERCA2α蛋白表达显着减少（p<0.01）,益气活血方和美托洛尔干预后RYR2的表达明显增加（p<0.05）;位于线粒体上的钙稳态调节相关蛋白MICU1的表达情况:与假手术组相比,模型组MICU1蛋白的表达降低（p<0.05）,益气活血方组较模型组升高,但无统计学差异,与模型组相比,美托洛尔组MICU1蛋白的表达升高（p<0.05）。6.大鼠心肌细胞梗死边缘区缝隙连接蛋白及其磷酸化情况。与假手术组相比,模型组心肌组织Cx43表达显着下降（p<0.05）,经过益气活血方和美托洛尔治疗后,Cx43表达水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,模型组心肌组织Cx43磷酸化水平显着下降（p<0.01）,经过益气活血方和美托洛尔治疗后,Cx43表达水平升高（p<0.01）。结论1.益气活血方可以显着改善心肌组织由于缺血缺氧造成的结构和功能损伤。2.益气活血方能够降低心肌梗死后室颤发生的易感性。3.益气活血方对心肌梗死边缘区心肌细胞的舒缩能力有显着的改善作用,这种作用通过影响心肌细胞钙瞬变产生。4.益气活血方对心肌梗死后肌浆网和线粒体重要的Ca2+调节蛋白有调节作用,这种调节作用与心律失常的易感性和心功能改善表现相一致。5.益气活血方能够提高心肌梗死后梗死边缘区心肌细胞缝隙连接蛋白及其磷酸化水平,这种作用可能是其改善整体心功能、降低心律失常易感性的原因之一。
付梦婷[5]（2020）在《“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌及交感神经重构的影响研究》文中研究说明目的临床发现冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后心肌组织会发生更严重的结构功能变化,称心肌缺血/再灌注损伤（Myocardial Ischemia-reperfusion Injury,MI/RI）。已有研究发现电针预处理可以减轻MI/RI,但机制尚未完全明确,导致针刺防治MI/RI的临床推广及应用受限。相关研究表明,MI/RI的发生发展与心室重构密切相关,其中包括心肌重构与交感神经重构两个方面。本课题组选用心肌缺血再灌注模型大鼠为研究对象,依据针灸“治未病”理论,运用免疫组化及蛋白质印迹等技术,观察标本配穴电针预处理对大鼠心肌及交感神经重构的影响,探讨“标本配穴”电针预处理对MI/RI的保护作用及效应机制,旨在为针灸“标本配穴”预防和减轻MI/RI提供实验依据。方法1.选取3月龄SPF级雄性Wistar大鼠40只,适应性喂养1周后根据随机数字表分为4组:假手术组（sham operation group,SO组）、模型组（myocardial ischemia/reperfusion injury group,MI/RI组）、内关电针预处理组（MI/RI+PC6组）和标本配穴电针预处理组（myocardial ischemia reperfusion group with acupuncture pretreatment on Neiguan,Zusanli and Guanyuan,MI/RI+AP组）,每组10只。2.所有大鼠每天同时捆绑,每次捆绑时间为20min,连续7天。SO组与MI/RI组大鼠只捆绑不针刺,MI/RI+PC6组与MI/RI+AP组大鼠在每天捆绑的同时进行电针预处理治疗:MI/RI+PC6组针刺大鼠双侧“内关”穴,旁开0.3cm处皮下再浅刺一针作“内关”辅助电极;MI/RI+AP组针刺大鼠双侧“内关”、“足三里”及“关元”穴,同侧“内关”与“足三里”穴组成一对电极,“关元”穴旁开0.3cm处皮下再浅刺一针作“关元”穴辅助电极。连接HANS-200电针仪,输出波型选连续波,频率为2Hz,强度为1mA,定时20min/次,共针刺7天。3.实验第8天所有大鼠均行开胸手术,除SO组外所有大鼠左心耳和肺动脉根部下方2mm处穿缝线结扎阻断左冠状动脉前降支,造成左室前壁心肌缺血20min,再松线恢复冠脉血供,形成再灌注40min,造MI/RI模型,SO组大鼠只于左冠状动脉前降支穿过缝线不结扎。采用BL-420生物机能实验系统观测每组大鼠ST段电压振幅变化,以MI/RI组大鼠为例,如果结扎左冠状动脉前降支后心电图Ⅱ导联ST段出现弓背上抬>0.2mV、松线后抬高的ST段明显回落,标志缺血再灌注模型造模成功。4.观察实验及造模期间各组大鼠死亡情况,计算大鼠死亡率,并在造模成功后对大鼠进行腹主动脉采血及心脏取材,用化学荧光法和生化法分别检测各组大鼠的氧化应激反应标志物活性氧（ROS）含量与谷胱肽过氧化物酶（GSH-Px）活力,Masson染色观察心肌胶原纤维形态分布并计算胶原容积分数（CVF）,免疫组化检测结缔组织生长因子（CTGF）表达及酪氨酸羟化酶（TH）阳性纤维分布,采用蛋白质印迹法检测生长相关蛋白43（GAP43）的表达,并对数据进行统计和分析。结果1.（1）死亡率:与SO组比较,MI/RI组大鼠死亡率显着上升（P<0.01）;MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组死亡率低于MI/RI组,但差异不具有统计学意义（P>0.05）。（2）心电图ST段电压变化:与SO组比较,MI/RI组大鼠冠脉结扎20min后ST段电压极显着性上升并>0.2mV（P<0.01）,再灌注40min后ST段极显着性上升（P<0.01）;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组大鼠结扎冠脉20min后ST段电压均极显着下降（P<0.01）,再灌注40min后ST段均极显着回落（P<0.01）;与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠冠脉结扎20min后ST段电压明显下降（P<0.05）,再灌注40min后ST段电压显着回落（P<0.05）。（3）氧化应激反应标志物含量:与SO组比较,MI/RI组大鼠心肌组织ROS含量极显着性上升（P<0.01）,血清GSH-PX活力极显着性下降（P<0.01）;与MI/RI组大鼠比较,MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组大鼠心肌组织ROS含量均显着下降（P<0.05）,GSH-PX活力均显着上升（P<0.05）;与MI/RI+PC6组比较:MI/RI+AP组大鼠心肌组织ROS含量显着下降（P<0.05）,GSH-PX活力显着上升（P<0.05）。2.（1）心肌组织CTGF表达:与SO组比较,MI/RI组大鼠CTGF表达极显着升高（P<0.01）;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠CTGF表达显着下降（P<0.05）,MI/RI+AP组大鼠CTGF表达极显着下降（P<0.01）;与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠CTGF表达显着下降（P<0.05）。（2）心肌组织形态学比较:心肌组织Masson染色后,与SO组比较,MI/RI组大鼠心肌明显受损,肌丝排列散乱间隙增宽,胶原纤维增粗并呈网状紊乱分布,纤维化明显;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠肌丝排列较整齐,仅少量增生胶原纤维,部分纤维化;MI/RI+AP组大鼠心肌组织病理变化程度较MI/RI+PC6组大鼠进一步减轻。（3）CVF比值:与SO组比较,MI/RI组大鼠CVF极显着升高（P<0.01）;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠CVF显着降低（P<0.05）,MI/RI+AP组大鼠CVF极显着降低（P<0.01）;与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠CVF显着降低（P<0.05）。3.（1）TH阳性纤维密度:与SO组比较,MI/RI组大鼠TH阳性纤维密度极显着升高（P<0.01）;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠TH阳性纤维密度显着降低（P<0.05）,MI/RI+AP组大鼠TH阳性纤维密度极显着降低（P<0.01）;与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠TH阳性纤维密度极显着降低（P<0.01）。（2）GAP43蛋白灰度值比值含量:与SO组比较,MI/RI组GAP43表达极显着性升高（P<0.01）;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组GAP43表达显着降低（P<0.05）,MI/RI+AP组GAP43表达极显着性降低（P<0.01）,MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组GAP43蛋白表达差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1.对氧化应激及心电图ST段振幅的影响:电针预处理可以降低ST段弓背上抬及回落,通过减少心肌组织ROS含量,提升GSH-Px活力,抑制氧化应激反应,起到抗氧化应激损伤的作用,对MI/RI模型大鼠心脏进行有效预防保护,且标本配穴较内关单穴疗效更佳。2.对心肌重构的影响:电针预处理能抑制CTGF的表达、降低CVF比值、减少胶原纤维含量,改善心肌组织形态,减轻心肌组织纤维病理化改变,从而有效保护心肌,且标本配穴较内关单穴效应更佳。3.对交感神经重构的影响:电针预处理能抑制GAP43表达,减少交感神经的过度萌出,改善TH阳性纤维的分布密度,减少因不均一性重构导致的继发性电生理改变来防治MI/RI,且标本配穴较内关单穴疗效更佳。
张亚茹[6]（2020）在《TNF-α信号通路在“肾源性心脏交感神经重构”中的作用》文中研究说明目的:心脏性猝死（sudden cardiac death,SCD）是慢性肾功能衰竭（chronic renal failure,CRF）的重要死因,心脏交感神经重构是引起室性心律失常（ventricular arrhythmia,VA）、SCD的重要机制,本研究旨在阐释CRF通过肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）信号通路引起心脏交感神经重构的假说及其机制,为CRF后恶性心律失常、SCD的防治提供新的治疗靶点。方法:1.通过肾脏5/6次全切除术建立大鼠CRF模型。对CRF大鼠进行阿托伐他汀灌胃法给药、重组人II型TNF-α受体-抗体融合蛋白（Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-αReceptor II:Ig G Fc Fusion Protein for injection,Rh TNFR:Fc）（商品名:益赛普）皮下注射给药,探究TNF-α在“肾源性心脏交感神经重构”中的作用机制及阿托伐他汀对其产生的影响。健康雄性Wistar大鼠48只,按随机数字表法分为4组（n=12）:假手术组（Sham组）、CRF组、CRF+阿托伐他汀组（CRF+statin组）、CRF+益赛普组（CRF+Rh TNFR:Fc组）。通过一步法大鼠肾脏5/6次全切除术建立CRF模型,Sham组手术过程与CRF组相同,但不进行肾切除。术后第四日,CRF+statin组每日给予阿托伐他汀5mg/Kg灌胃,Sham组、CRF组、CRF+Rh TNFR:Fc组每日给予等量清水灌胃;CRF+Rh TNFR:Fc组给予益赛普0.4mg/Kg皮下注射,2次/周。Sham组、CRF组、CRF+statin组同时每周两次皮下注射等量生理盐水。所有大鼠均饲养8周。2.术前基线（鼠内眦静脉取血）和干预8周后（下腔静脉取血）分别取血测定肾功能;采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定TNF-α、白介素-1（Interleukin,IL-1）的表达水平。术后8周,通过心脏彩超记录左室射血分数、左室游离壁厚度;四组中各随机选取6只大鼠,随后进行血流动力学检测术后血压变化,并且留取心肌组织。大鼠心尖部和心底部于-80℃冰箱冻存备用,Western-blot法测定心肌组织生长相关蛋白43（growth-associated protein-43,GAP-43）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）和TNF-α的蛋白表达水平;剩余心室中间部位浸泡于组织固定液中备用,免疫荧光法测定左室心肌组织交感神经分布密度,HE染色测定心肌细胞形态,马松（Masson）染色法测定左室心肌组织纤维化程度。3.对每组中剩余的6只术后8周大鼠进行在体心室电生理实验,测定心室有效不应期（ventricular effective refractory period,VERP）和室颤阈值（ventricular fibrillationthreshold,VFT）,评估CRF时心脏电生理指标变化。结果:1.一般状况:肾脏切除术后的大鼠毛发光泽度下降、尿量增多。CRF组、CRF+statin组和CRF+Rh TNFR:Fc组的术后2周、6周、8周体重均较Sham组明显下降（P均<0.05）,三组间体重无显着差异。2.肾功能变化:肾脏切除术后的大鼠血肌酐值术后两周内可见明显增高,随后一直保持在高水平状态。CRF组、CRF+statin组和CRF+Rh TNFR:Fc组的术后2周、6周、8周血肌酐值均较Sham组显着增高（P均<0.05）,三组间肌酐值无显着差异。3.心脏彩超结果:CRF组、CRF+statin组和CRF+Rh TNFR:Fc组的左室舒张末直径、心室/体重比均较Sham组明显增大（P<0.05）,而CRF+statin组和CRF+Rh TNFR:Fc组的心室/体重比较CRF组缩小（P<0.05）;四组的左室射血分数、左室后壁厚度和室间隔厚度未见明显差异。4.血流动力学结果:CRF组、CRF+statin组和CRF+Rh TNFR:Fc组的收缩压、舒张压、脉压和平均压均较Sham组显着增高（P<0.05）;CRF+Rh TNFR:Fc组的收缩压和脉压较CRF组降低（P<0.05）,而CRF+statin组的各项血压指标均较CRF组无统计学差异。5.病理学检测结果:相比较Sham组,CRF组心肌组织表现为心肌纤维走行紊乱,细胞形态不均匀,细胞核大、畸形;而CRF+Rh TNFR:Fc组、CRF+statin组病理学表现较CRF组有所改善。Masson染色显示:相较于Sham组,CRF组心肌组织胶原分数显着升高（P<0.05）,而益赛普和阿托伐他汀的胶原分数较CRF组降低（P<0.05）。6.免疫荧光染色结果:CRF组GAP-43、TH阳性的交感神经纤维密度均明显高于Sham组（P<0.05）,而CRF+Rh TNFR:Fc组、CRF+statin组有所改善（P<0.05）。CRF组GAP-43和TH阳性的交感神经面积分数较Sham组显着增加（P<0.05）,而CRF+Rh TNFR:Fc组、CRF+statin组面积分数低于CRF组（P<0.05）。7.ELISA结果:CRF组TNF-α和IL-1β浓度明显高于Sham组（P<0.05）,而CRF+statin组、CRF+Rh TNFR:Fc组的上述指标较CRF组降低（P<0.05）。8.Western-blotting结果:CRF组GAP-43、NGF和TNF-α的蛋白表达较Sham组均明显上调（P<0.05）,而CRF+Rh TNFR:Fc组、CRF+statin组GAP-43、NGF和TNF-α蛋白表达低于CRF组（P<0.05）;提示益赛普干预可有效减少TNF-α的含量。9.在体左心室电生理结果四组间的VERP无明显差异;CRF组VFT明显低于Sham组（P<0.05）,而CRF+Rh TNFR:Fc组、CRF+statin组VFT较CRF组升高（P<0.05）。结论:1.本研究结果提示,CRF大鼠发生了左室重构和电重构,室颤阈值降低。2.CRF大鼠心肌组织TNF-α表达上调,NGF蛋白表达增加,心脏交感神经重构增加,证实了“肾源性心脏交感神经重构”的存在。益赛普干预后,CRF大鼠心肌组织TNF-α蛋白浓度下降,NGF表达下调,心脏交感神经重构减轻,提示炎症机制可能参与其中。此外,益赛普改善了CRF所导致的心肌重构,使室颤阈值增加,提示抑制TNF-α可有效减轻CRF大鼠心脏交感神经重构以及心肌重构、电重构。3.阿托伐他汀治疗后,CRF大鼠TNF-α表达下调,NGF和GAP-43浓度降低,心脏交感神经芽生得到抑制,心肌纤维化减轻,室颤阈值上调,提示阿托伐他汀治疗可能通过抑制TNF-α信号通路改善“肾源性心脏交感神经重构”的发生,从而减轻室性心律失常的易感性。
孙华鑫[7]（2020）在《低强度耳屏迷走神经刺激对心梗慢性期室性心律失常的干预及机制研究》文中研究说明目的:本研究拟探讨耳迷走神经刺激（ta-VNS）防治心梗后VAs的作用及机制。方法:14只心梗后室性心律失常（VAs）模型犬,分至对照组（n=7）和ta-VNS组（n=7）,分别行假刺激/ta-VNS4周,完善动态心电图评价、电生理检查、神经记录、儿茶酚胺浓度测定、免疫组化及免疫印迹测定。结果:1)心室电生理:ta-VNS组心室内膜及外膜梗死区、梗死周边区有效不应期较对照组均增大（P<0.05）;2)心率变异性:心梗后第2周至第4周,ta-VNS组高频显着高于对照组（P<0.05）;而低频则低于对照组（P<0.05）;高频/低频数据低于对照组（P<0.05）;3)神经活动记录:4周后,较对照组,ta-VNS组的心下交感神经放电均方根（RMS）降低,颈迷走神经放电RMS增加（P<0.05）;4)儿茶酚胺浓度:4周后,ta-VNS组血浆及组织儿茶酚胺浓度较对照组显着降低（均P<0.05）;5)免疫组化:4周后,在心下交感神经和耳迷走分支处,ta-VNS组较对照组TH阳染神经元显着减少（均P<0.05）,而CHAT阳染显着增多（均P<0.05）;6)免疫印迹:在梗死周边区和非梗死区,ta-VNS组肿瘤坏死因子受体超家族16、原肌球蛋白相关激酶A、β1受体较对照组显着降低（均P<0.05）。结论:ta-VNS可潜在地再平衡自主神经活动、减轻心脏去神经化和受体分布异质性而有效减少心梗慢性期室性心律失常负荷。
谭佳钰[8]（2019）在《靶向调控室旁核内NF-κB通路对心肌梗死后交感神经再生的影响》文中提出研究背景心肌梗死（myocardial infarction,MI）是严重威胁人类健康的重要疾病之一。MI在欧美国家最为常见,在美国,每年约有0.05%的人口发生MI,且MI在中国的发病率近年来呈现出明显的上升趋势。MI危害在于可导致休克、心力衰竭、室壁瘤及心律失常等一系列威胁生命的严重并发症,尤以心律失常中的恶性室性心律失常（ventricular arrhythmias,VAs）的危害最为严重,是MI患者恢复期致死的主要原因之一。VAs的发生与MI后心脏交感神经的过度再生及重构有关。交感神经和迷走神经共同支配心脏活动,任何原因导致的心脏电生理活动的不稳定（如交感神经的活动占明显优势或迷走神经活动被抑制）,均可导致临床中VAs的发生,进而威胁患者生命。日前有相关研究表明,以交感神经过度再生为特点的心脏自主神经重构为MI早期VAs发生的重要因素,因此,探讨MI后交感神经再生的分子机制可为MI后VAs的治疗提供新的理论依据。核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）,作为已知的重要的核转录因子,参与神经细胞发育、生长和凋亡过程。我们前期的研究发现,MI后心肌组织中NF-κB的激活是心脏交感神经再生过程中的关键环节,抑制心肌组织中的NF-κB活性,可显着抑制MI后交感神经再生,并改善MI后心脏交感神经重构。但我们前期对心梗后神经再生及心律失常的研究仅局限于心脏本身,对于心梗后心血管活动调控的上游-中枢神经系统对其的调节机制-知之甚少。在大脑中有诸多心血管调控中枢（即中枢神经系统中的神经元集中的部位,这些神经元与控制心血管的活动相关）,下丘脑在调节心血管活动中起重要作用,其中下丘脑室旁核（hypothalamic paraventricular nucleus,PVN）是心血管活动和自主神经系统的调控中枢,MI后PVN的前交感神经元中自发动作电位频率增加,导致了心脏交感神经激活,这表明,PVN可通过调节交感神经的兴奋,进而调节MI大鼠的心血管活动。近年来在高血压模型大鼠及心衰大鼠模型中,关于PVN对交感神经活性的影响的研究较为多见,而在心梗大鼠中干预PVN对交感神经重构的作用探索甚少。所以我们设想,靶向调控PVN内的NF-κB信号通路,可改善MI后心脏交感神经再生及恶性心律失常发生率。研究目的本研究旨在探讨,从PVN水平靶向抑制NF-κB信号通路,探究其对MI后心脏交感神经再生、恶性心律失常发生率的影响。研究方法实验步骤一:为明确MI后PVN内NF-κB表达的动态变化,我们将30只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（260-280g左右）行左冠状动脉前降支结扎建立MI模型,根据取材时间分为5组:MI-0d,MI-1d,MI-3d,MI-5d,MI-7d,分别为MI后立即取材,MI后]天、3天、5天及7天取材。将取出的PVN组织利用Western Blot实验检测MI后NF-κB及IκBα的动态表达变化。实验步骤二:为探究PVN内NF-κB与白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的关系,我们设计了如下实验,将18只SD大鼠随机分为3组,A:空白组（naive组）,该组动物只麻醉不做其他处理;B:内毒素组（LPS组）,该组动物麻醉后,通过动物脑立体定位仪颅顶钻孔,后经微量注射器于两侧PVN内给予LPS（12.5μgLPS溶于 50nl 生理盐水中）,每侧 50nl;C:LPS+gevokizumab 组（LPS+gevo 组）,纳入该组的大鼠先行两侧PVN内LPS注射,方法及剂量同B组,30分钟后,进行 IL-1β 抑制剂 gevokizumab（50nl 生理盐水含 10μg 的 gevokizumab）PVN 内注射。2小时后取材,完整移出脑组织进行后续Western Blot实验。实验步骤三:为了探究PVN中NF-κB信号通路在MI后交感神经重构的作用及机制,我们将SD大鼠麻醉后通过脑立体定位仪颅顶钻孔,随后放置并固定不锈钢PVN双套管,恢复7天后被随机分为四组:A:假手术+PBS组,SD大鼠行左冠状动脉前降支穿线,但不结扎。PBS通过套管内给药,连续7天,直至取材。B:假手术+吡咯烷二硫氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）组,手术及PDTC给药方法同前。C:MI+PBS组,大鼠左冠状动脉前降支结扎建立MI模型,PBS给药方法及时间同前。D:MI+PDTC组,同样先结扎左冠状动脉前降支建模,随后通过套管PVN内给予PDTC靶向抑制NF-κB活性,连续7天,直至取材。MI后第7天,行心室压力容积实验来检测大鼠的血流动力学状态及程序电刺激实验检测心律失常易感性,实验结束后取出脑组织和心肌组织,一部分脑组织分离出其中的PVN行Western Blot实验检测NF-κB信号通路相关蛋白水平表达,另一部分行免疫组织化学染色,检测Fra-LI表达水平。心肌组织分离出左心室梗死灶周心肌组织,行免疫荧光实验检测梗死灶周的酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）及生长相关蛋白-43（growth associated protein-43,GAP-43）两种神经纤维的阳性表达来分析交感神经再生情况。研究结果1、MI3天后PVN中的NF-κB水平显着升高,至第7天时表达较前略有降低,但仍维持在较高水平,提示,MI后PVN内的NF-κB通路被激活。2、在单独行LPS刺激组的大鼠的PVN中,NF-κB、IL-1β及神经生长因子（nerve growth factor,NGF）蛋白表达水平升高,给予IL-1β抑制剂后,NF-κB仍保持在较高水平,但IL-1β及NGF蛋白表达水平较单独LPS组显着降低,提示IL-1β参与PVN中NF-κB信号通路。3、MI后PVN中的NF-κB/IL-1β信号通路被激活,这一现象可被PVN内靶向给予NF-κB抑制剂PDTC而阻断。MI+PDTC组与MI+PBS组相比,Western Blot实验提示PVN内NF-κB、IL-1β及NGF蛋白表达水平降低;免疫组织化学实验提示PVN中交感活性也有所减弱;免疫荧光实验提示心肌梗死灶周的TH及GAP-43 阳性神经纤维密度降低;程序电刺激实验提示心律失常易感性的降低。研究结论综上所述,我们的研究数据表明,靶向调控PVN中NF-κB信号通路可通过下调IL-1β及NGF蛋白表达水平来改善MI后的交感神经再生。这一结果提示靶向调控PVN中的NF-κB可成为改善MI后心脏交感神经重构及降低心律失常发生率的新的靶点。
王磊[9]（2019）在《右美托咪定早期应用对犬缺血性室性心律失常的作用》文中认为第一部分急性前壁心肌梗死犬交感神经活性及心脏电生理特性变化研究目的建立心肌梗死犬模型,观察急性心肌梗死后交感活性及心脏电生理特性变化,并行免疫组织化学检查探讨神经纤维密度情况。研究方法成年杂种犬,共12只,随机分为两组,假手术组（sham组,n=6）和心肌梗死组（MI组,n=6）。实验犬麻醉开胸暴露心脏后,结扎左冠状动脉第一对角支,建立急性前壁心肌梗死模型。假手术组同样行开胸手术,穿线但不结扎冠状动脉。开胸及结扎冠脉1h后检测冠状静脉内血儿茶酚胺浓度,测量左室有效不应期和单相动作电位时程（MAPD90）,计算跨室壁复极离散度（TDR）,记录自发及程序电刺激诱发室性心律失常。行免疫组织化学TH、GAP-43染色检查神经纤维情况。研究结果1.MI组犬结扎左冠状动脉第一对角支后,心电图示Ⅰ、av L导联ST段明显抬高,局部心肌颜色变暗、变紫,室壁活动减弱,表示心梗建模成功。2.MI组血NE浓度与心梗前比较,明显升高（407.83±64.81ng/L vs 166.33±46.61ng/L,p<0.01）,sham组无明显改变（177.00±28.23 ng/L vs 172.17±28.18ng/L,p>0.05）。心梗前后,两组犬E浓度相似,均无明显改变。3.心梗后,MI组心率明显加快、血压升高（169±4 bmp vs 152±5 bmp,p<0.01;158±9mm Hg vs 144±3mm Hg,p<0.05）。sham组心率、血压无明显变化。4.心梗后,MI组MAPD90明显缩短（梗死区192.7±8.1ms vs 215.5±4.2ms,p<0.01;非梗死区207.5±5.5ms vs 214.5±3.5ms,p<0.05）,梗死区较非梗死区缩短更明显（192.7±8.1ms vs 207.5±5.5ms,p<0.01）。sham组相对应区域均无明显改变。5.MI组心梗后TDR均明显延长（梗死区57.3±5.2ms vs 23.5±4.1ms,p<0.01;非梗死区30.5±4.4ms vs 23.8±3.5ms,p<0.05）,梗死区显着。Sham组相应部位无明显改变。6.MI组ERP与心梗前比较,明显缩短,尤以梗死区为着（LV M1 130.7±6.4ms vs 158.0±9.6ms,p<0.01）,sham组无明显改变。左侧星状神经节刺激后,两组犬ERP值均明显缩短（LV M1 sham组:145.0±12.4ms vs 157.3±9.4ms,p<0.01;MI组:122.7±3.5ms vs 130.7±6.4ms,p<0.01）,尤以MI组梗死区缩短最显着（MI组vs sham组:122.7±3.5ms vs 145.0±12.4ms,p<0.01）。7.室性心律失常评分,MI组高于sham组（3.0±2.4 vs 0.3±0.8,p<0.05）,总的室性心律失常发生率无统计学差异。8.sham组心肌细胞无明显损伤,细胞核方向基本一致,MI组梗死区细胞肿胀、炎症浸润、局灶细胞核消失。MI组梗死区TH阳性神经纤维较sham组明显减少（MI组vs sham组:585.58±105.82μm2/mm2 vs 1644.80±113.03μm2/mm2,p<0.01）,且空间分布紊乱,梗死周边区、左室游离壁与sham组比较,无明显差异。GAP-43染色阳性神经纤维,两组均缺如或少见,呈点状分布。结论1、急性心肌梗死后,血浆去甲肾上腺素浓度明显升高,心率增快,血压升高。2、心肌梗死后,梗死区有效不应期明显缩短,跨壁复极离散度增加,电不稳定,室性心律失常评分高。3、急性心肌梗死后,梗死区交感神经纤维明显减少。第二部分右美托咪定早期应用对心肌梗死犬心脏电生理及交感神经活性的影响研究目的观察右美托咪定早期应用对急性前壁心肌梗死犬心脏电生理特性的影响,探讨其早期应用对缺血性室性心律失常的作用与安全性,观察右美托咪定对急性心肌梗死犬心脏交感神经纤维再生的影响。研究方法成年杂种犬,共18只,随机分为三组,心肌梗死组（MI组,n=6）、右美托咪定组（Dex组,n=6）、美托洛尔组（Met组,n=6）。所有实验犬麻醉开胸后,建立急性前壁心肌梗死模型。心肌梗死组、右美托咪定组、美托洛尔组分别于结扎冠状动脉后即刻给予生理盐水、右美托咪定注射液（1μg/Kg静推10min,0.5μg/Kg/h静脉泵入维持30min）、美托洛尔注射液（10mg分两次静推）。检测血儿茶酚胺浓度变化,记录左室心外膜MAPD90,并计算TDR,行程控电刺激测量ERP,记录室性心律失常的发生情况。后期行病理检查梗死区及周边区交感神经纤维情况。研究结果1.心梗后NE浓度均升高,以MI组NE浓度升高最显着。（MI组:439.00±65.02ng/L vs 142.83±16.18ng/L,p<0.01;Dex组:266.50±45.79ng/L vs 140.67±20.68 ng/L,p<0.01;Met组:300.83±58.29ng/L vs 146.17±20.82ng/L,p<0.01）。三组犬心梗前后E浓度无明显差异。2.心梗后,MI组心率明显增快（167±4 bmp vs 150±5 bmp,p<0.01）,Dex组、Met组心率减慢（Dex组:129±5 bmp vs 151±6 bmp,p<0.01;Met组123±5 bmp vs 153±6bmp,p<0.01）,Dex组、Met组无统计学差异。3.心梗后,MI组血压升高（158±8 mm Hg vs 143±4 mm Hg,p<0.01）,Met组血压明显降低（123±5 mm Hg vs 143±3 mm Hg,p<0.01）,Dex组血压无明显变化（139±4mm Hg vs 142±5 mm Hg,p>0.05）。4.左心室心外膜MAPD90测量,MI组MAPD90较心梗前明显缩短,梗死区较非梗死区缩短更明显（梗死区192.3±7.5ms vs 217.2±5.7ms,p<0.01;非梗死区208.0±4.1ms vs 216.5±4.4ms,p<0.05;梗死区vs非梗死区:192.3±7.5ms vs 208.0±4.1ms,p<0.01）。Dex、Met组MAPD90较心梗前延长,而梗死区、非梗死区无统计学差异。5.心梗后,MI组梗死区、非梗死区TDR均延长（梗死区56.0±5.7ms vs23.2±3.3ms,p<0.01;非梗死区28.5±3.7ms vs 22.8±3.8ms,p<0.05）,以梗死区延长最明显。Dex组、Met组相应区域TDR也延长（Dex组:32.3±3.9ms vs 23.2±5.1ms,p<0.01;26.3±4.6ms vs 23.8±3.5ms,p<0.05;Met组:33.5±6.1ms vs 23.3±4.5ms,p<0.01;26.7±3.2ms vs 23.5±2.4ms,p<0.05）。6.心梗后TDR改变值（△TDR）的比较:MI组梗死区△TDR明显大于Dex组、Met组（32.8±7.0 ms vs 9.0±2.0 ms,p<0.01;32.8±7.0 ms vs 10.2±5.7 ms,p<0.01）,亦明显大于非梗死区（32.8±7.0ms vs 5.7±4.8 ms,p<0.01）。7.心梗后,MI组ERP值明显缩短（心梗上区147.3±6.2ms vs 158.3±9.5ms,p<0.01;心梗区130.7±6.4 ms vs 160.8±8.9ms,p<0.01;心梗下148.0±7.4ms vs 160.3±8.5ms,p<0.01）,尤以梗死区明显。8.心梗后,Dex组、Met组ERP值也缩短,梗死区明显。但梗死区ERP缩短值明显小于MI组（Dex组vs MI组:17.3±7.3ms vs 30.2±6.0ms,p<0.01;Met组vs MI组:18.7±6.9ms vs 30.2±6.0ms,p<0.01）。9.心律失常评分比较,MI组高于Dex组、Met组（MI组vs Dex组:3.8±1.9 vs1.2±2.0,p<0.05;MI组vs Met组:3.8±1.9 vs 1.2±2.0,p<0.05）,Dex组、Met组比较无统计学差异。总的室性心律失常发生率比较无统计学差异（MI组83.3%;Dex组33.3%;Met组33.3%;p>0.05）。10.HE染色可见MI组心肌细胞肿胀、局部炎症浸润,细胞核紊乱。Dex组、Met组相对较轻。11.免疫组织化学染色检查示三组TH阳性神经纤维在梗死周边区、左室游离壁无明显差异,梗死区密度均明显减少,但MI组减少较Dex组、Met组显着（MI组vs Dex组:579.83±103.19μm2/mm2 vs 881.67±113.31μm2/mm2,p<0.01;MI组vs Met组:579.83±103.19μm2/mm2 vs 923.33±108.93μm2/mm2,p<0.01）。三组GAP-43阳性神经纤维均少见或缺如。结论1、右美托咪定早期应用能对抗交感神经活性,与静推美托洛尔相比,无明显降低血压,有较高的安全性,可在心梗早期应用。2、与心肌梗死组相比,早期应用右美托咪定组的跨壁复极离散度、有效不应期的变化值较小,室性心律失常评分较低。3、与心肌梗死组相比,早期应用右美托咪定及美托洛尔组,其梗死区交感神经损害较轻。第三部分右美托咪定早期应用对心肌梗死恢复期犬心脏电生理特性与交感神经重构的影响研究目的观察右美托咪定早期应用后对心梗恢复期犬梗死周边区交感神经纤维及电生理的影响,探讨其对心梗恢复期神经重构和电重构的作用,进一步深化其抗心律失常的机制。研究方法成年杂种犬,共18只,随机分为三组,心肌梗死组（MI组,n=6）:制备心肌梗死模型;心肌梗死干预1组（Met组,n=6）:建立心梗模型,术后12h喂食美托洛尔12.5mg,每天2次);心肌梗死干预2组（Dex+Met组,n=6）:在心梗模型基础上早期静脉给予右美托咪,术后12h开始喂食美托洛尔12.5mg,每天2次)。一月后再次开胸,测量左室壁梗死灶周有效不应期、单相动作电位时程、跨壁复极离散度,刺激左侧星状神经节后立即测量同样位点,并测定室颤阈值。后期行病理及免疫组织化学GAP-43、TH染色及Western blot测定蛋白含量,进一步明确其神经重构情况。研究结果1.心肌梗死恢复期,MI组1犬死亡,其余所有存活犬行再次开胸手术。三组犬梗死周边区心外膜MAPD90值无明显差异。MI组TDR值最大,Dex+Met组TDR值最小（MI vs Met:34±3ms vs 25±4ms,p<0.05;MI vs Dex+Met:34±3ms vs 20±3ms,p<0.01;Met vs Dex+Met:25±4ms vs 20±3ms,p<0.05）。2.左侧星状神经节刺激后,三组犬心外膜MAPD90均明显缩短,MI组MAPD90值缩短最明显,Met组MAPD90短于Dex+Met组（MI vs Met:187±10 ms vs 197±5 ms,p<0.05;MI vs Dex:187±10 ms vs 206±7 ms,p<0.01;Met vs Dex+Met:197±5 ms vs206±7 ms,p<0.05）。3.左侧星状神经节刺激后,三组实验犬TDR均增加,刺激后MI组TDR最大,Dex+Met组最小（MI vs Met:59±7 ms vs 40±6 ms,p<0.01;MI vs Dex+Met:59±7 ms vs 32±5 ms,p<0.01;Met vs Dex+Met:40±6 ms vs 32±5 ms,p<0.05）。△TDR比较,MI组明显大于Met、Dex+Met组（MI vs Met:25±8 ms vs 15±6 ms,p<0.05;MI vs Dex+Met:25±8 ms vs 12±5 ms,p<0.01）,但Dex+Met组与Met组比较,并无统计学差异（12±5 ms vs 15±6 ms,p>0.05）。4.左侧星状神经节刺激前,三组梗死周边区ERP值比较,无统计学差异。刺激后,ERP均明显缩短,以MI组ERP最短,Det+Met组最长（MI vs Met:128.8±7.4ms vs 139.3±6.5ms,p<0.05;MI vs Dex+Met:128.8±7.4ms vs 145.0±9.5ms,p<0.01）。△ERP比较,MI组明显大于Met、Dex+Met组（MI vs Met:32.4±5.0ms vs 21.0±8.1ms,p<0.05;MI vs Dex+Met:32.4±5.0ms vs 15.0±8.2ms,p<0.01）。Met、Dex+Met组比较,尚无统计学差异（15.0±8.2ms vs 21.0±8.1ms,p>0.05）。5.室颤诱发阈值比较:MI组最低,Dex+Met组最高（MI vs Met:11.2±1.8V vs14.2±1.6V,p<0.05;MI vs Dex+Met:11.2±1.8V vs 16.5±1.2V,p<0.01;Dex+Met vs Met:16.5±1.2V vs 14.2±1.6V,p<0.05）。6.免疫组织化学可见TH染色阳性神经纤维、GAP-43染色阳性神经纤维密度均梗死周边区高,排列较紊乱,MI组可见粗大神经纤维,Met、Dex+Met组神经分布趋于正常化,尤以Dex+Met组明显。7.MI组梗死灶周和左室游离壁TH、GAP-43蛋白表达均明显高于Met、Dex+Met组,以Dex+Met组梗死灶周和左室游离壁TH、GAP-43蛋白表达下调最明显。结论1、心梗恢复期给予交感神经刺激,可引起跨壁复极离散度增大,早期静脉应用右美托咪定及长期美托洛尔口服组跨壁复极离散度增加最小,改善心室的电不稳定性。2、长期应用美托洛尔可改善交感神经重构,提高室颤诱发阈值。3、与单纯口服美托洛尔相比,早期静脉应用右美托咪定可更为明显地改善交感神经重构,提高室颤诱发阈值。
张宇沁[10]（2019）在《益气活血方对心梗后神经重构及ERK1/2信号通路影响的研究》文中认为背景心肌梗死后交感神经的过度再生和分布的不均一性,称神经重构,会导致不可逆性心功能损害。课题组前期研究表明,益气活血方（Yiqihuoxue Decoction,YQHX）能有效改善心梗后的左室功能,降低心力衰竭的发生率。本研究旨在观察益气活血方对心梗大鼠心肌组织及缺氧心肌细胞的保护作用,并探讨可能的作用机制。目的本实验通过观察心梗大鼠心肌损伤和神经重构的变化情况,证明益气活血方对心脏的保护作用,进而探讨基于ERK1/2信号通路,益气活血方作用的分子机制。方法本研究分为动物实验和细胞实验1.动物实验:健康雄性SD大鼠,行左冠状动脉前降支（LAD）结扎术复制大鼠急性心梗模型。将大鼠随机分为4组:假手术组（Sham,S）,模型组（Model,M）,益气活血组（YQHX,Y）,美托洛尔组（Metoprolol,Meto）,于心梗后3天、7天和28天三个时间点,分别取梗死边缘区、远端健存区和左侧星状神经节三个部位的组织,观察相应指标的变化。采用超声观察左心功能;HE染色观察各组大鼠心肌病理学改变;免疫荧光技术观察TH 阳性交感神经纤维分布和ANP因子表达;Elisa检测血浆中NPY含量;WB检测神经重构相关因子NGF、GAP43、Sema-3A、TH蛋白,NPY蛋白和心肌肥大指标ANP和β-MHC蛋白的表达。2.细胞实验:采用心肌细胞H9c2缺氧模型,根据课题组前期研究,选用抗氧化效果最优剂量200μg/ml和轻中度细胞损伤的时间点12h。将心肌细胞分为3组:①对照组（C）;②缺氧模型组（M）;③缺氧模型+200μg/ml益气活血方水提物组（Y）;采用乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞上清LDH变化,采用抗氧化试剂盒检测细胞内MDA和SOD含量。为了进一步探讨益气活血药对缺氧心肌细胞的调控机制,我们使用ERK1/2信号通路抑制剂PD98059。将实验分为5组:①②③组同前;④缺氧模型+PD98059组（PD）;⑤缺氧模型+200μg/ml益气活血方水提物+PD98059组（Y+PD）,观察Hoechst33258染色前后,心肌细胞的凋亡状况,WB检测缺氧心肌细胞ERK1/2、p-ERK1/2、c-FOS、c-MYC、NGF、Sema-3A蛋白的表达。结果1益气活血方对大鼠超声心动图结果的影响在3d、7d和28d,M组大鼠心功能均受损,对模型大鼠使用Y和Meto后,Y组可显着上调EF、FS值,疗效确定,Meto组急性期疗效优于亚急性期和慢性期。2益气活血方对心肌HE染色结果的影响心梗后3天:S组心肌细胞结构无明显改变;M组心肌细胞形态改变,肿大,胞浆着色不均,核固缩,心肌细胞断裂,结构破坏,排列紊乱,有炎性细胞浸润。Y组和Meto组的病理改变较模型组略轻。心梗后7天和28天:Y和Meto组均可见病理改变减轻。3益气活血方对免疫荧光染色的TH阳性交感神经纤维分布的影响在梗死边缘区,3天时,S组阳性神经纤维少见或缺如。M组阳性神经纤维密度明显增加,分布紊乱,形态粗大,聚集呈束。随时间增加,神经形态及分布趋于正常化,同M组相比,Y组和Meto组TH阳性神经纤维密度明显降低。远端健存区,TH 阳性神经纤维密度略减少。4益气活血方对神经重构相关因子NGF、GAP43、Sema-3A、TH蛋白的动态表达的影响从蛋白表达方面看,NGF和TH的M组都是梗死边缘区7天高表达,非梗死区3天高表达,不同的部位的GAP43均在急性期3天时高表达,均较S组显着性升高（P<0.05）;Sema-3A不同部位M组在7天/28天才出现最低值,较S组显着降低（P<0.05）。从药物疗效的角度来看,与M组相比,Y在GAP43、TH和NGF的表达上显着性降低,Sema-3A升高（P<0.05）,Meto与Y相比,无显着性差异（P>0.05）,但Meto组3天和7天时疗效较好;而Y组随时间增加均值逐渐趋向于S组,28天时与M组相比差异显着（P<0.05）。5益气活血方对心梗大鼠梗死边缘区肥大相关指标ANP和β-MHC表达的影响ANP阳性表达部位在心肌细胞胞质中,呈棕褐色。3天时,S组心肌细胞结构排列整齐且清晰,M组ANP 阳性表达在细胞核和细胞质内呈现大片棕褐色颗粒,聚集成片。Y组少量浅染或深染的棕色颗粒,Meto组与Y组类似,阳性面积比Y组范围稍大;7天时和28天时,Meto组与Y组类似,与M组比,颜色较浅,阳性表达面积小于模型组。梗死边缘区,ANP和β-MHC蛋白表达3天时,M组与S组相比,显着性升高（P<0.05）,Y组、Meto组与M组相比,显着性降低（P<0.05）,Meto组与Y组相比,显着性降低（P>0.05）;7天与3天一致。28天时,Meto组与Y组相比,显着性升高（P>0.05）。6益气活血方对缺氧心肌细胞LDH、MDA、SOD的影响加入益气活血方水提物后,可显着减少LDH释放、降低MDA含量、升高SOD活性（P<0.05）。7观察Hoechst33258染色前后,益气活血方对缺氧心肌细胞损伤的影响Hoechst33258染色前:C组细胞呈梭形,边界清楚,形态完整,分布均匀;M组心肌细胞受损严重,细胞变圆,边界模糊,细胞间隙变大,部分呈团状,有部分细胞漂浮;Y组细胞聚集情况减轻,分布均匀,细胞形态介于梭形和圆形之间。PD组损伤较Y组轻,较少细胞漂浮,Y+PD组同PD。Hoechst33258染色后,C组细胞形态完整,细胞核染色均匀,缺氧处理后,M组细胞核不规则固缩凝聚,呈致密浓染,细胞核分裂成碎片,镜下少见完整细胞;Y、Y+PD和PD组均可减轻细胞核凝聚,减少细胞核碎片。8益气活血方对缺氧心肌细胞ERK1/2信号通路蛋白及神经重构相关因子NGF、Sema-3A蛋白的影响ERK:蛋白表达在各组之间没有显着性改变（P>0.05）;p-ERK:M组与C组相比显着性升高（P<0.05）,Y、PD组与M组相比显着性降低（P<0.05）,Y+PD与Y组相比显着性降低（P<0.05）。ERK1/2通路下游蛋白c-FOS与c-MYC表达趋势与p-ERK类似,但Y+PD组与PD组相比均显着性降低（P<0.05）。NGF:与C组比,M组显着性升高（P<0.05）,与M组比,Y组与PD组显着性降低（P<0.05）,与Y组相比Y+PD和PD组均显着性降低（P<0.05）,与PD组相比Y+PD显着性降低（P<0.05）;Sema-3A的表达与NGF相反。结论1益气活血方可显着改善心梗对心肌组织和缺氧对心肌细胞的损伤。2益气活血方可显着改善心梗后神经纤维的过度再生和分布的密度,调节神经重构相关因子的表达。其中,7天作为亚急性期,是中药和西药药效的临界点。3益气活血方水提物可通过抑制缺氧诱导的ERK磷酸化途径来保护缺氧的心肌细胞,其作用效果与ERK1/2通路抑制剂一致。但其对通路下游蛋白的激活,可能还有其他相关通路或靶点参与。4益气活血方水提物可能部分通过ERK1/2信号通路,影响了了NGF和Sema-3A在缺氧心肌细胞上的表达,提示益气活血方可能会通过抑制神经重构相关因子在ERK1/2信号通路上的表达,保护缺氧受损的心肌细胞。
二、心肌梗死后神经生长因子的动态表达及其与交感神经重构的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、心肌梗死后神经生长因子的动态表达及其与交感神经重构的关系（论文提纲范文）
（1）LncRNA H19调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 创新性与局限性 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV和血浆CA的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 痰热证与冠心病 |
| 1 冠心病概述 |
| 1.1 中西医关于该病的认识 |
| 1.2 导师对该病的认识 |
| 2 从痰热论治冠心病依据 |
| 2.1 中医理论依据 |
| 2.2 现代研究依据 |
| 3 连夏宁心方治疗冠心病依据 |
| 参考文献 |
| 综述二 自主神经系统与心脏节律的关系 |
| 1 心脏自主神经分布 |
| 2 心脏中的自主神经受体 |
| 3 自主神经系统对心脏电生理的影响 |
| 4 自主神经功能失调与心律失常 |
| 4.1 房颤 |
| 4.2 室性心律失常 |
| 4.3 电风暴 |
| 4.4 心脏性猝死 |
| 5 自主神经功能评价指标 |
| 5.1 心率变异性 |
| 5.2 血浆儿茶酚胺 |
| 5.3 心率减速力 |
| 5.4 窦性心率震荡 |
| 6 干预自主神经防治心律失常的策略 |
| 6.1 β受体阻滞剂 |
| 6.2 迷走神经刺激 |
| 6.3 肾去神经术 |
| 6.4 针灸 |
| 6.5 中药 |
| 参考文献 |
| 第二章 连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV和血浆CA的影响 |
| 前言 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 患者来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究设计 |
| 2.2 简单随机分组 |
| 2.3 随机方案隐藏 |
| 2.4 盲法设计 |
| 2.5 样本量计算 |
| 2.6 伦理学原则 |
| 2.7 治疗方案 |
| 2.8 观察时间点 |
| 2.9 观察指标 |
| 2.10 质量控制 |
| 2.11 统计分析 |
| 2.12 技术路线 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 病例纳入与完成情况 |
| 3.2 基线分析 |
| 3.3 疗效指标分析 |
| 3.4 安全性指标 |
| 4 讨论 |
| 4.1 冠心病痰热证型的探讨 |
| 4.2 冠心病痰热证与自主神经功能紊乱关系密切 |
| 4.3 HRV分析方法 |
| 4.4 一般资料分析 |
| 4.5 连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV的影响 |
| 4.6 连夏宁心方对冠心病痰热证患者血浆CA的影响 |
| 4.7 连夏宁心方对冠心病痰热证患者中医证候的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 连夏颗粒对心肌梗死大鼠HRV、血浆CA和炎症反应的影响 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 适应性喂养 |
| 2.2 建立心肌梗死模型 |
| 2.3 分组及给药 |
| 2.4 心率变异性检测 |
| 2.5 取材及样品处理 |
| 2.6 HE染色 |
| 2.7 ELISA检测 |
| 2.8 Western Blot检测心肌P38蛋白 |
| 2.9 RT-PCR检测心肌P38mRNA |
| 2.10 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况 |
| 3.2 各组大鼠HRV结果比较 |
| 3.3 各组大鼠血浆儿茶酚胺的水平 |
| 3.4 各组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量比较 |
| 3.5 各组大鼠心肌P38蛋白和mRNA表达比较 |
| 3.6 各组大鼠HE染色结果 |
| 3.7 HRV与血清TNF-α、IL-1β的相关性分析 |
| 3.8 HRV与心肌P38蛋白和mRNA的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 基于NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路探讨连夏颗粒对心肌梗死大鼠交感神经重构的影响 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 建立心肌梗死模型 |
| 2.2 分组及给药 |
| 2.3 电生理检测 |
| 2.4 心肌标本取材及处理 |
| 2.5 免疫组织化学检测 |
| 2.6 Western blot检测 |
| 2.7 Real-time PCR检测 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠存活情况 |
| 3.2 连夏颗粒对心梗大鼠交感神经重构的影响 |
| 3.3 连夏颗粒对心梗大鼠心律失常发生率的影响 |
| 3.4 连夏颗粒对心梗大鼠NGF/TrKA/PI3K/AKT信号通路mRNA表达的影响 |
| 3.5 连夏颗粒对心梗大鼠NGF/TrKA/PI3K/AKT通路蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 本研究的主要成果 |
| 2 本研究的创新点 |
| 3 本研究的不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）miR-let-7a调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 一、实验对象及伦理说明 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 结果 |
| 1.靶向干预M1型巨睡细胞，miR-let-7a抑制NGF的表达 |
| 2.实验动物入组情况 |
| 3.成功制备Ml棋型 |
| 4.Ml大鼠通过表达miR-let-7a可成功抑制NGF的表达水平 |
| 5. Ml后干预miR-let-7a抑制交感神经重构 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 创新性与局限性 |
| 综述 影响心肌梗死后交感神经重构相关因子 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 附件 |
（4）益气活血方基于钙稳态调节对心肌梗死大鼠心律失常防治作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 心肌梗死后室性心律失常的发病机制研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 心肌梗死后心肌细胞钙离子调节研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 中西医结合治疗心肌梗死后室性心律失常 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 益气活血方对大鼠心肌梗死后左心功能和组织形态学影响的评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 益气活血方对心肌梗死大鼠室颤阈值的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 益气活血方对心梗大鼠梗死边缘区心肌细胞舒缩功能和Ca~(2+)调节相关蛋白表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 益气活血方对心梗大鼠梗死边缘区心肌组织缝隙连接蛋白Cx43、p-Cx43表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌及交感神经重构的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 实验一 “标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心电图及氧化应激的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 检测指标及步骤 |
| 4 统计方法 |
| 5 结果 |
| 6 讨论 |
| 实验二 “标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠结缔组织生长因子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 检测指标及步骤 |
| 4 统计方法 |
| 5 结果 |
| 6 讨论 |
| 实验三 “标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠神经生长相关蛋白43影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 检测指标及实验步骤 |
| 4 统计方法 |
| 5 结果 |
| 6 讨论 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 攻读硕士期间已发表论文及参与课题 |
| 致谢 |
（6）TNF-α信号通路在“肾源性心脏交感神经重构”中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 对象和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 技术路线图 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CRF对心脏的结构性和电生理影响 |
| 3.2 CRF引起心室交感神经重构增加 |
| 3.3 CRF引起心室交感神经重构的机制 |
| 3.4 阿托伐他汀可以改善“肾源性心脏交感神经重构” |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 心脏交感神经重构与心脏性猝死 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）低强度耳屏迷走神经刺激对心梗慢性期室性心律失常的干预及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 动物伦理与分组 |
| 1.2 主要材料及仪器 |
| 2 内容与方法 |
| 2.1 室性心律失常模型的建立 |
| 2.2 低强度耳屏迷走神经刺激 |
| 2.3 室性心律失常负荷及心率变异性评价 |
| 2.4 外源性自主神经活性记录 |
| 2.5 心室心电生理性质的测定 |
| 2.6 儿茶酚胺浓度的测定 |
| 2.7 免疫组化法 |
| 2.8 免疫印迹法 |
| 3 统计方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（8）靶向调控室旁核内NF-κB通路对心肌梗死后交感神经再生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（9）右美托咪定早期应用对犬缺血性室性心律失常的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 急性前壁心肌梗死犬交感神经活性及心脏电生理特性变化 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 右美托咪定早期应用对心肌梗死犬心脏电生理及交感神经活性的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 右美托咪定早期应用对心肌梗死恢复期犬心脏电生理特性与交感神经重构的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 综述1 |
| 参考文献 |
| 综述2 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的论文 |
| 致谢 |
（10）益气活血方对心梗后神经重构及ERK1/2信号通路影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分: 文献综述 心肌梗死后交感神经重构与NGF、GAP43、Sema-3A和TH关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一: 益气活血方对心梗大鼠神经重构及心肌重构的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二: 益气活血方对心梗大鼠神经重构相关因子NGF、GAP43、Sema-3A、TH蛋白动态表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三: 益气活血方对缺氧诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四: 益气活血方对缺氧诱导心肌细胞NGF和Sema-3A在ERK1/2信号通路上表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
四、心肌梗死后神经生长因子的动态表达及其与交感神经重构的关系（论文参考文献）
- [1]LncRNA H19调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制[D]. 张学丽. 山东大学, 2021(11)
- [2]连夏宁心方对冠心病痰热证患者HRV和血浆CA的影响及相关机制研究[D]. 李赛赛. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]miR-let-7a调控心肌梗死后交感神经重构的分子机制[D]. 郑璐. 山东大学, 2020(02)
- [4]益气活血方基于钙稳态调节对心肌梗死大鼠心律失常防治作用的研究[D]. 陈曦. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌及交感神经重构的影响研究[D]. 付梦婷. 湖北中医药大学, 2020(11)
- [6]TNF-α信号通路在“肾源性心脏交感神经重构”中的作用[D]. 张亚茹. 天津医科大学, 2020(06)
- [7]低强度耳屏迷走神经刺激对心梗慢性期室性心律失常的干预及机制研究[D]. 孙华鑫. 新疆医科大学, 2020(07)
- [8]靶向调控室旁核内NF-κB通路对心肌梗死后交感神经再生的影响[D]. 谭佳钰. 山东大学, 2019(03)
- [9]右美托咪定早期应用对犬缺血性室性心律失常的作用[D]. 王磊. 中国人民解放军海军军医大学, 2019(10)
- [10]益气活血方对心梗后神经重构及ERK1/2信号通路影响的研究[D]. 张宇沁. 北京中医药大学, 2019(07)