一、高分子量麦谷蛋白14和15亚基的纯化、N-末端序列及部分生化特性研究（论文文献综述）
陈海强[1]（2020）在《高大山羊草1Slx2.3*及1Sly16*和小麦1Dy12亚基面粉加工品质效应分析》文中研究指明小麦籽粒高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）和低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS）的含量和组成影响着面粉加工品质。高大山羊草是重要的小麦近缘种属,蕴含着优质麦谷蛋白亚基,是改良小麦加工品质的潜在遗传资源。本研究拟用小麦-高大山羊草易位系1SlL/1BS和1SlS/1BL分别与宁春4号等小麦品种杂交,连续回交并结合分子标记辅助选择,获得农艺性状优良的小麦-高大山羊草新易位系。同时,对转高大山羊草1Slx2.3*基因小麦材料进行分子标记、SDS-PAGE和FISH鉴定,获得纯合转基因株系。另外,对1Dy12缺失突变体进行SDS-PAGE鉴定和纯合。最后,对这些材料品质相关基因表达、蛋白体动态变化和面粉加工品质进行分析,解析不同麦谷蛋白亚基的品质效应和作用机制,促进小麦加工品质改良。主要研究结果如下:1、回交转育结合分子标记辅助选择将小麦-高大山羊草易位染色体1SlL/1BS和1SlS/1BL转移到小麦品种宁春4号、宁春50号和Westonia的遗传背景中,获得10个农艺性状优良的纯合新易位系。对BC3F4代1SlL/1BS和1SlS/1BL纯合新易位系面粉进行的加工品质分析表明,1SlL/1BS易位系的面团和面筋强度小于非易位背景对照材料,1SlS/1BL易位系的面包体积和面包感官评分大于相应遗传背景的轮回亲本。2、利用农杆菌介导法将1Slx2.3*基因转入了Westonia中,通过Bar试纸条、分子标记、SDS-PAGE和荧光原位杂交（FISH）等检测,获得了2个转1Slx2.3*基因的纯合株系。通过对纯合株系T-W1中的HMW-GS基因（1Slx2.3*、1Ax2*、1Bx17、1By18、1Dx2和1Dy12）和品质相关基因（PDI-1、PDI-4、PDI-5、Bip-1、Bip-2、Bip-3、DOF-2、DOF-3、DOF-6、SPA-A、SPA-B和SPA-D）在籽粒灌浆阶段的表达进行qRT-PCR分析,发现转1Slx2.3*株系中1Slx2.3*正常表达,且显着刺激了1Dx2和1Dy12的表达,籽粒发育大部分阶段1Ax2*和1Bx17表达高于对照,但1By18表达在籽粒发育整个阶段显着低于对照;PDI4-1、PDI5-1、Bip-2、Bip-3、SPA-A和SPA-D在转基因株系灌浆阶段的表达水平显着下调,而Dof-3、Dof-6和SPA-B在在转基因株系灌浆阶段的表达水平显着上调。最后,通过对转1Slx2.3*基因纯合株系T-W1进行面包和海绵蛋糕加工品质分析,表明1Slx2.3*的转入显着提高了籽粒蛋白含量、面团形成时间、面团稳定时间和面包体积,降低了耐揉指数,显着改良了面包加工品质;同时,1Slx2.3*的转入使海绵蛋糕体积和感官评分略有增加,改善了海绵蛋糕品质。3、通过对小麦品种科农199（KN199）组织培养获得了1Dy12缺失的无性系变异体AS273,分析了1Dy12在籽粒不同发育阶段的表达情况,发现籽粒灌浆期1Dy12在转录水平表达,相比对照KN199显着降低,但在翻译水平没有表达。然后对1Dy12进行扩增、测序和比对,发现AS273中的1Dy12存在碱基替换（T/C）,出现了提前终止密码子,导致了1Dy12沉默。进一步利用qRT-PCR对品质相关基因在籽粒不同发育阶段的表达情况进行了分析,表明AS273中PDI-4、PDI-5、DOF-3、SPA-A的表达水平与KN199相比明显上调,Bip-1表达略有上调,PDI-1表达略有降低。利用透射电镜观察比较AS273和KN199籽粒不同发育阶段的蛋白体变化,除7 DPA和28 DPA时期外,AS273的蛋白体普遍大于KN199,且AS273的蛋白体积累速率比KN199快。此外,28 DPA时AS273和KN199形成了蛋白体片层的网络结构。对AS273和KN199进行面包、海绵蛋糕和饼干加工品质分析,发现AS273的吸水率、面团形成和稳定时间、面包体积显着降低,耐揉指数显着增高;海绵蛋糕体积略有减小,内部质地粗糙,口感稍差;饼干饼体增厚,内部质地粗糙。
耿瑞蝶[2]（2020）在《新收获小麦后熟过程中面筋蛋白聚集特性变化及机理研究》文中研究说明新收获小麦的加工品质不稳定,在合适的储藏温度和湿度条件下,经过一定时间的储藏完成后熟过程,小麦的加工品质和食用品质均会得到进一步的改善。小麦面筋蛋白作为小麦籽粒中的储藏蛋白,在影响小麦品质和加工特性方面具有十分重要的作用。新收获小麦在后熟过程中小麦面筋蛋白发生聚集,形成更加紧密的面筋网络,使得面筋的黏弹性及强度发生变化,从而改变小麦的加工品质。小麦面筋蛋白聚集特性变化的机理主要是蛋白质之间发生交联,面筋蛋白内部多肽链之间形成分子内或分子间共价键,使蛋白之间相互连接,从而形成大的聚集体,这种变化可能不仅和面筋蛋白的含量和结构紧密相关,能够帮助蛋白质二硫键正确形成的蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase,PDI）也发挥了重要作用。本课题选用河南省广泛种植的中筋小麦泛麦8号作为实验材料,模拟我国三个主要储粮生态区域进行储藏:蒙新生态区域15℃50%RH（WT1）;华北生态区域20℃65%RH（WT2）;华中生态区域28℃75%RH（WT3）,在分析新收获小麦后熟过程中面筋蛋白聚集特性变化的基础上,通过面筋蛋白结构变化、蛋白质二硫键异构酶基因表达及活性的变化规律,探讨新收获小麦后熟过程中品质变化的机理。结果表明:新收获小麦后熟过程中,面筋峰值仪分析图谱中的峰值形成时间（PMT）逐渐增大;峰值扭矩（BEM）变化不大;峰值面积（EnMT）逐渐增大。这表明面筋的形成时间逐渐提高,可能会使得面筋的流变学特性得到改善;面筋延伸抗性增大,延展性降低,面筋强度增大。利用面筋峰值仪可以分析新收获小麦后熟过程中品质的变化规律;在WT3条件下储藏至第14周左右时面筋的聚集特性最好,小麦品质达到最佳。新收获小麦后熟过程中各蛋白组分的含量随储藏时间和储藏条件发生变化,储藏过程中蛋白总量无明显变化;面筋蛋白中醇溶蛋白含量减少,麦谷蛋白及麦谷蛋白大聚体（GMP）含量在三种条件下都有所升高,在WT3条件下储藏至第14周时升高最显着。与此同时,麦谷蛋白大聚体中游离巯基的含量显着下降,WT3条件下的含量最少。SDS-PAGE分析麦谷蛋白大聚体（GMP）分子量分布表明,WT3条件下的分布现象受储藏时间、温度和湿度的影响,随着后熟时间的延长,GMP中HMW-GS含量增多,LMW-GS含量减少。新收获小麦后熟过程中GMP的粒度分布、二级结构和微观结构均发生一定程度的变化。其中,GMP粒径的变化规律与其含量和分子量分布规律相类似,随着后熟时间的延长,粒径较小的颗粒逐渐减少,粒径较大的颗粒逐渐增多;WT3储藏条件能够加快小粒径颗粒向大粒径颗粒的转换,更便于大粒径颗粒的积累。WT1和WT2两个储藏条件下GMP的二级结构变化不显着,WT3储藏条件下,α-螺旋含量降低、β-折叠含量升高的趋势最显着,且在储藏至第16周时两者的比值最小。在电子扫描电镜下明显观察到三种储藏条件下GMP均发生聚集,由单一不规则的颗粒逐步聚集形成结构紧密、光滑平整的大聚合体,WT3条件更能加速聚集体的形成。新收获小麦后熟过程中wPDI能够促进小麦面筋蛋白发生聚集,其基因表达、氧化还原活性和二级结构都发生了一定程度的变化。随着后熟时间的延长,wPDI的上调基因增多,相关基因的表达量增多,WT3条件储存第8周时新增的wPDI的上调基因最多;后熟过程中wPDI的氧化活性升高,还原活性降低;wPDI的二级结构中α-螺旋的含量增多,可能与wPDI的氧化活性呈正比、还原活性成反比。综上所述,w PDI的上调基因越多,则可以表达更多的wPDI,在wPDI的作用下,可以形成更多的二硫键;同时,wPDI的氧化活性越高,催化游离巯基氧化成二硫键的量越多,则通过二硫键连接形成的大聚体数的量越多,面筋聚集特性越显着。
郝浩楠[3]（2019）在《中国部分普通小麦核心种质HMW-GS的特点及其与若干品质性状的关联分析》文中研究说明小麦是世界最重要的口粮作物之一,生活水平的提高对小麦品质提出了更高的要求,品质遗传改良已成为小麦育种家越来越重视的育种目标。高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）是小麦籽粒贮藏蛋白的重要成分,其含量、类型和组成特点决定着小麦的加工品质。本实验以294份中国核心种质小麦品种（系）和5份华中农业大学自育成小麦品种,种植于武汉华中农业大学实验田。利用SDS-PAGE方法鉴定了299份材料的高分子量麦谷蛋白亚基,利用NIRS DS2500近红外分析仪测定了294份中国核心种质材料的籽粒淀粉含量、蛋白质含量、降落数值、硬度、容重、弱化度、湿面筋含量和Zeleny沉淀值8个品质指标。系统分析了供试材料的HMW-GS组成及遗传多样性,对HMW-GS组成特点与部分品质性状的关系进行显着性分析。主要研究结果如下:1.HMW-GS亚基类型:299份小麦供试材料共出现17种HMW-GS亚基类型,在Glu-A1位点出现3种,分别是1（31.10%）、2*（3.68%）、Null（65.22%）;在Glu-B1位点出现9种,分别是7（5.69%）、7+8（63.88%）、7+9（20.07%）、6+8（2.34%）、20（2.34%）、13+16（2.01%）、14+15（2.68%）、17+18（0.33%）、22（0.67%）;在Glu-D1位点出现5种,分别是2+12（58.19%）、4+12（1.00%）、5+10（11.04%）、2+10（13.04%）、5+12（16.72%）。299份供试材料组成的群体的4个遗传多样性指数分别是:多态位点百分率（P）=1.0000,等位基因平均数（A）=5.6667,平均每个位点的等位基因有效数（Ae）=2.2133,遗传多样性指数（H）=0.5423。表明该群体Glu-1位点的遗产多样性高,HMW-GS的变异类型丰富。2.亚基组合类型:299份小麦供试材料中共有49种HMW-GS亚基组合类型其中N/7+8/2+12组合的频率最高,为37.46%。其次分别是1/7+8/5+12（6.02%）、1/7+8/2+12（5.69%）、N/7+8/2+10（5.69%）、N/7+9/2+12（4.35%）和1/7+9/2+12（4.01%）亚基组合类型。其他亚基组合类型出现的频率比较低,频率在0.34%2.68%之间。3.HMW-GS等位基因组合的聚类分析结果:在相似系数为0.73处可以将49种HMW-GS等位基因组合聚为六类,第一类含有4种HMW-GS等位基因组合,分别是Glu-A1a/Glu-B1f/Glu-D1a、Glu-A1a/Glu-B1f/Glu-D1h、Glu-A1c/Glu-B1f/Glu-D1a、Glu-A1c/Glu-B1f/Glu-D1e,该类小麦品种数共6个;第二类仅含有1种HMW-GS等位基因组合Glu-A1c/Glu-B1i/Glu-D1a,该类小麦品种数1个;第三类含有4种HMW-GS等位基因组合,分别是Glu-A1a/Glu-B1d/Glu-D1a、Glu-A1c/Glu-B1d/Glu-D1a、Glu-A1c/Glu-B1d/Glu-D1e、Glu-A1c/Glu-B1d/Glu-D1d,该类小麦品种数共7个;第四类含有20种HMW-GS等位基因组合,该类小麦品种数共214个;第五类含有16种HMW-GS等位基因组合,该类小麦品种数66个;第六类含有4种HMW-GS等位基因组合,分别是Glu-A1a/Glu-B1h/Glu-D1e、Glu-A1a/Glu-B1h/Glu-D1a、Glu-A1a/Glu-B1h/Glu-D1h、Glu-A1b/Glu-B1h/Glu-D1h,该类小麦品种数共5个。4.供试材料的品质性状特点:对294份中国核心种质小麦供试材料的8个品质性状进行了测定和比较（籽粒淀粉含量、蛋白质含量、降落数值、硬度、容重、弱化度、湿面筋含量、Zeleny沉淀值）,其中蛋白质含量大于等于14%的品种数为40个,占比为13.61%,小于13%的品种数为193个,占比为65.64%;湿面筋含量大于等于32%的品种数为30个,占比为10.20%,小于28%的品种数为148个,占比为50.34%;Zeleny沉淀值大于等于45ml的品种数为28个,占比为9.52%,小于30ml的品种数为85个,占比为28.91%;容重大于等于770g/l的品种数为290个,占比为98.64%。同时对这8个品质性状进行了相关分析,8个品质性状间有一定的相关性。5.亚基类型及亚基组合与部分品质性状的关系:供试材料的HMW-GS主要亚基类型与品质性状有一定的关系,Glu-1位点同一位点不同亚基变异类型的品质性状存在一定变异,且不同品质性状变异程度亦存在差异,14+15、7+9和5+10亚基对面包小麦品质性状的正向效应较高;不同的HWM-GS组合对蛋白质含量、降落数值、容重和湿面筋含量的影响均达到显着水平（0.05）,1/7+9/2+12和N/7+9/5+10亚基组合的小麦品种,其蛋白质含量、降落数值、容重和湿面筋含量相对较高,N/7/2+12亚基组合的小麦品种,其蛋白质含量、降落数值、容重和湿面筋含量相对较低。
张灿灿[4]（2019）在《野生二粒小麦面粉加工品质相关性状的全基因组关联分析及高分子量谷蛋白亚基基因1Ax1的克隆》文中指出野生二粒小麦（Triticum dicoccoides L.,2n=4x=28,AABB）被认为是普通小麦（Triticum aestivum L.,2n=6x=42,AABBDD）染色体组AABB的供体种,含有很多有益性状,包括抗病性强、蛋白质和微量元素含量高等,是改良普通小麦的重要基因资源。面粉加工品质性状是由多基因控制的数量性状,受环境影响较大,表现为连续变异,遗传基础较为复杂。利用高密度的SNP标记对野生二粒小麦的面粉加工品质相关性状进行关联分析,挖掘其蕴含的有益的基因位点,可以丰富小麦的遗传基础,为小麦的面粉加工品质改良提供新的基因资源。本研究以来自中东地区的121份野生二粒小麦为材料,在辉县、商丘和开封3个地点进行田间试验,结合小麦55K SNP芯片上来自A、B染色体组上的多态性位点,对野生二粒小麦的面粉加工品质相关性状进行全基因组关联分析,为小麦品质育种提供优异位点;同时以面粉加工品质较好的野生二粒小麦J129为材料,利用定向缺失亚克隆技术,克隆出了一个新的高分子量谷蛋白亚基1Ax1基因,取得如下结果:（1）对121份野生二粒小麦的面粉加工品质性状:淀粉含量、蛋白含量、湿面筋含量、沉降值、吸水率、面筋指数和粉质延伸度性状考察分析,结果表明:在3个地点的材料7个品质性状均存在广泛的变异,变异系数最大的是粉质延伸度（FE）,为33.42%,最小的是淀粉含量（GSC）,为5.84%。方差分析结果显示,7个品质性状基因型间差异、环境间差异以及基因型与环境互作差异均达显着水平,表明基因型和环境对性状变异均有显着影响。广义遗传率分析表明蛋白含量（GPC）遗传率最大,为32%;吸水率（WA）的遗传率最小,为11%。相关性分析结果显示:蛋白含量与湿面筋含量、沉降值呈极显着正相关,湿面筋含量与吸水率呈极显着正相关,粉质延伸度与蛋白含量呈极显着正相关,面筋指数与蛋白质含量、湿面筋含量呈极显着负相关。（2）基于小麦55K SNP芯片中来自A、B染色体组上的10907个高质量的多态性SNP标记,对121份野生二粒小麦进行全基因组关联分析结果表明:共鉴定出1840个位点与面粉加工品质性状显着相关的位点,其中有714个区段,这些SNP位点在野生二粒小麦的1-7A和1-7B染色体上均有分布,其中,在1A染色体上分布的标记最多达到332个,在6B染色体上分布的标记最少仅有72个,所有关联位点表型变异解释率（R2）总幅度为8.3%-26.4%。淀粉含量和蛋白含量的稳定关联位点最多。检测到与淀粉含量相关的稳定的关联区段/位点有16个（区段3个）,分布在1A、4A、1B、3B、4B、5B染色体上,且1B（372.30-374.91 Mb）、4A（121.05-121.21 Mb）、5B（142.67-144.87 Mb）染色体上定位到的稳点关联位点最多;检测到与蛋白含量相关的稳定的关联区段/位点有14个（区段1个）,分布在2A、3A、4A、5A、6A、3B、6B、7B染色体上,且7B（50.30-50.78Mb）染色体上定位到的稳点关联位点最多;检测到与湿面筋含量相关的稳定的关联区段有1个,分布在7A（510.65-510.83 Mb）染色体上;检测到与沉降值相关的稳定的关联位点有1个,分布在1B染色体上,物理位置为289.53 Mb;检测到与粉质延伸度相关的稳定的关联位点有5个,分布在1A、2A、6A、3B、6B染色体上,其物理位置分别为518.77 Mb、95.16Mb、74.45Mb、23.38 Mb和16.40 Mb。另外,对121份野生二粒小麦的相关性状关联的SNP位点进行候选基因预测和功能注释,结果表明这些位点在小麦及其近缘种中主要与抗病蛋白、细胞色素、转运蛋白、结构蛋白以及蛋白激酶等相关。（3）以野生二粒小麦J129为材料,通过定向缺失亚克隆的方法获得了高分子量谷蛋白亚基Ax基因序列,通过序列分析比对,显示J129-1Ax1基因序列与已发布的HMW-GS的x型亚基基因结构一致,其具有的氨基酸序列与其它Ax亚基基因序列相比多了一个九肽PTQGQQGQQ序列,该结构可能影响蛋白质结构域的形成与稳定。此外,J129-1Ax1亚基中的谷氨酰胺（Q）、α-螺旋和β-折叠的含量较高,因此推测,该亚基基为能增加面团弹性的优质基因。
王真真[5]（2018）在《野生二粒小麦y-型HMW-GS基因渗入普通小麦的遗传特性及其对品质改良的潜在价值》文中研究说明高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）作为小麦籽粒贮藏蛋白的重要组分,其质量和数量能直接影响到小麦面粉的加工品质。野生二粒小麦（Triticum turgitum ssp.dicoccoides,AABB,2n=4x=28）作为普通小麦的二级基因源,拥有丰富的HMW-GS等位变异。对其特异HMW-GS基因的鉴定和利用既能丰富普通小麦中HMW-GS基因的遗传多样性,又能为普通小麦品质改良提供有利的基因资源。针对普通小麦高分子量谷蛋白亚基的Glu-A1和Glu-B1位点中,1Ax和1By常不表达,1Ay基本不表达的问题,在我们前期对野生二粒小麦Glu-B1位点的沉默型1Bx和表达型1By基因,以及Glu-A1位点的1Ax基因进行分子鉴定的基础上,本研究进一步对野生二粒小麦Glu-A1位点的1Ay基因进行挖掘和利用价值研究。在对野生二粒小麦1Ay基因进行分子鉴定的基础上,用携带活性y-型HMW-GS基因的野生二粒小麦D97作父本与高产弱筋小麦品种川农16（CN16）作母本进行远缘杂交,得到异源五倍体F1（AABBD）,并通过连续多年套袋自交并逐年选育获得了一个农艺和产量性状理想的杂种高代稳定的六倍体普通小麦品系TaAy7-40,并分析后代的y-型HMW-GS基因1Ay和1By的传递、表达特性及其对普通小麦品质的遗传改良潜能。在此基础上,借助创制的携带野生二粒小麦活性1Ay基因的普通小麦基因资源,进一步探讨在普通小麦背景下的外源活性1Ay基因在普通小麦间的传递与表达特性,及其对普通小麦Glu-A1位点的丰富性能和对品质改良的利用价值。主要研究结果如下:1.本研究对野生二粒小麦D97的1Ay基因进行了克隆和原核表达,分析了该基因的结构特征以及与其它已知1Ay基因的系统进化关系,确定了该基因为一个活性1Ay基因。随后,通过SDS-PAGE分析发现,TaAy7-40品系中含有包括1Ay亚基在内的所有6条HMW-GS条带。继而对该品系以及亲本中的1Ay基因进行分子鉴定。分子克隆和序列分析显示,父本D97和后代TaAy7-40的1Ay基因的开放阅读框（ORF）长度均为1,830bp,编码608个氨基酸残基,两条序列相似度达99.2%。其编码功能也通过原核表达系统进一步确认。母本CN16的1Ay基因的ORF只有1791bp,并在其1000-1002位置存在一个提前终止密码子（TGA）,表明该基因是一个不表达蛋白的假基因。进一步对三条核苷酸序列比对发现,TaAy7-40与D97相比存在14个单核苷酸多态性（SNP）,包括13个转换和1个颠换。而在TaAy7-40和CN16之间鉴定了30个SNPs,包括25个转换和5个颠换。通过对推导的氨基酸一级结构进行分析,结果表明,与父本D97和后代TaAy7-40相比,普通小麦母本CN16中出现三处缺失和一个提前终止密码子。通过与GenBank数据库中已有的1Ay等位基因序列进行比较分析发现,TaAy7-40的1Ay基因和父本D97的紧密聚为一支,而与母本CN16的1Ay核苷酸序列距离疏远。显然,TaAy7-40的活性1Ay基因应该是来源于父本D97的。由此可见,野生二粒小麦的活性1Ay基因通过远缘杂交成功地导入到普通小麦中,并从低世代相对稳定地传递到高世代,有效地在普通小麦背景中开拓出Glu-A1位点蕴含活性1Ay基因的普通小麦遗传资源。2.对杂交双亲及后代品系中的1By基因进行了分子鉴定。核酸序列比对分析显示,父本D97和后代品系TaAy7-40的1By基因的ORF长度均为2166 bp,编码720个氨基酸残基,两条序列相似度高达99.2%,而母本CN16的1By基因的ORF只有2157bp。TaAy7-40与父本D97相比存在18个SNPs,包括11个转换和7个颠换,而在后代TaAy7-40和母本CN16之间鉴定出32个SNPs,包括27个转换和5个颠换。同样,对三者预测的氨基酸一级结构分析也表明,与父本D97和后代TaAy7-40相比,在母本CN16中出现一处缺失和一处插入。通过与GenBank数据库中已有的1By等位基因序列进行比较分析,TaAy7-40的1By基因和父本D97的1By基因以高达99的自展值聚为一支,而远离母本CN16的1By序列。显然,后代TaAy7-40的活性1By基因应该是来自于父本D97的。由此可见,野生二粒小麦的活性1By基因通过远缘杂交成功地导入到普通小麦中,并从低世代相对稳定地传递到高世代,有效地拓宽了普通小麦Glu-B1位点1By基因的遗传多样性。3.稳定品系TaAy7-40根尖染色体数目为42条,处于六倍体背景,同时含有来自野生二粒小麦Glu-A1和Glu-B1位点的活性1Ay和1By基因在内的全部6个HMW-GSs。通过生物学和农艺学分析表明,该后代品系TaAy7-40株形紧凑,其开花期、植株高度、穗长、穗形、小穗数、叶形等形态学特征趋同于母本普通小麦CN16,但与其父本D97存在明显差异。TaAy7-40的籽粒长度、宽度、厚度、千粒重和单株粒重和父本D97的存在显着差异,而和CN16之间略有差异,据此认为,渐渗系材料TaAy7-40已经拥有普通小麦相应的农艺产量性状,有利地规避了品质研究籽粒浓度效应的影响。在此基础上,对TaAy7-40与母本CN16以及推广的中筋小麦品种绵麦37和内麦9号为对照的主要加工品质参数蛋白质含量、沉降值和湿面筋含量进行了测试分析,结果表明,含有野生二粒小麦活性y-型HMW-GS基因的TaAy7-40具有比其母本CN16更好的面粉加工特性,甚至超过了中筋小麦品种绵麦37和内麦9号。据此认为,野生二粒小麦y-型亚基基因可在一定程度上提高普通小麦品质,是小麦品质改良的重要基因资源。4.在上述研究的基础上,以TaAy7-40作为母本,推广中筋小麦品种内麦9号作为父本进行品种间常规杂交。利用SDS-PAGE的方法对F2-F5后代进行1Ay亚基的追踪筛选。从F4代中挑选含有和没有1Ay亚基的姊妹系,其中Q1-F4-2-5-1和Q1-F4-2-5-5在HMW-GSs组成上仅在Glu-A1位点存在差异,前者包含1Ay亚基而后者缺失1Ay亚基。提取双亲和后代的DNA,对这些后代品系和亲本的1Ay基因进行分子鉴定,结果发现,父本内麦9号（MF429890）的序列长度为1812bp,比TaAy7-40少了18bp,并且还存在38个SNPs。氨基酸分析发现在父本内麦9号的340和355处出现了两个提前终止密码子,所以鉴定其为沉默的假基因。三个供试后代Q1-F4-1-6-1、Q1-F4-2-5-1、Q1-F4-2-5-5和的1Ay基因（MF429891、MF429892和MF429893）的序列长度和TaAy7-40的长度一致,均为1830bp,只是存在一些SNPs。氨基酸序列分析发现,MF429891和MF429892与母本TaAy7-40氨基酸数相同,均为608个,且中间没有出现提前终止密码子;而MF429893的氨基酸序列在148、151、286和355四处出现了提前终止密码子,确定该基因与父本的1Ay基因都是不表达蛋白的假基因。对收获的亲本和F5代株系进行面粉加工品质参数测定,结果发现,TaAy7-40的蛋白质含量、湿面筋含量和沉降值均显着高于父本内麦9号,表明含有野生二粒小麦HMW-GS基因的TaAy7-40具有较中筋小麦品种内麦9号更好的加工品质性状,拥有更强的面筋特性。进一步比较后代与双亲之间的品质参数发现,含有活性1Ay基因的完整6个HMW-GSs基因的后代Q1-F5-2-5-1较其双亲都具有更高的蛋白质含量和面团稳定时间,而且也显着高于其姊妹系Q1-F5-2-5-5。这些结果表明,来自野生二粒小麦的活性1Ay基因对普通小麦品质具有潜在的正向作用,同时也证明,创制的含有活性1Ay亚基基因的普通小麦中间材料TaAy7-40可以作为普通小麦品质改良的种质资源被利用。
王敬敬[6]（2018）在《高分子量麦谷蛋白亚基N-末端结构域对面粉加工品质的贡献及作用机制》文中研究说明小麦麦谷蛋白,尤其是高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）,决定着面筋蛋白网络结构的形成以及面粉加工品质。其中,HMW-GS的三个功能结构域对其功能的发挥各有重要作用。因此,解析不同结构域的结构与功能之间的关系,已经成为谷物研究领域亟待解决的关键基础科学问题。HMW-GS亚基1Dx5是小麦优质亚基的重要代表,本文以1Dx5的N-末端结构域（1Dx5-N）为研究对象,探究了可溶性重组1Dx5-N通过分子间相互作用所产生的聚集行为,及其影响麦谷蛋白聚集体形成、面筋网络结构和面团粘弹性等方面的功能作用,并从分子层面揭示了1Dx5-N不同位点半胱氨酸残基（Cys）参与二硫键交联的作用机制。研究成果将有助于人们对HMW-GS亚基N-末端结构域的结构和功能性质的认识,提升理性改善面粉加工品质的基础理论水平,丰富谷物科学研究的学术内涵。本文的主要研究内容如下:（1）重组1Dx5-N聚集行为研究。运用大肠杆菌原核表达系统制备了1Dx5-N,并使用分光光度法考察了贮藏条件下其溶解性的变化情况。同时,运用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）、还原型/非还原型十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、内源荧光光谱、分子排阻色谱、动态光和圆二色光谱等技术和方法,探究了食用盐（NaCl、Na2CO3）、二硫键还原剂二硫苏糖醇（DTT）、疏水作用变性剂SDS等对1Dx5-N聚集行为的影响。结果表明,1Dx5-N能够在水溶液中形成可溶的蛋白聚集体,明确了N-末端结构域不是决定整个亚基可溶性的分子基础。同时,在促进1Dx5-N形成大分子聚集体方面,疏水作用发挥着比二硫键作用力更加积极的作用,并且疏水作用能够强化1Dx5-N分子间二硫键的形成。食用盐NaCl促进了1Dx5-N分子间二硫键的形成,而较低浓度的Na2CO3（≤100 mM）断裂了分子间二硫键,较高浓度的Na2CO3（>200 mM）诱导生成了除二硫键以外的其它类型共价键。（2）热处理协同食用盐诱导1Dx5-N聚集及其对界面性质的影响。以圆二色光谱、动态光散色和高效液相色谱为主要技术,探究了热处理（37°C、50°C、65°C、80°C）协同食用盐诱导1Dx5-N聚集行为的变化情况。结果显示,热处理协同NaCl极大程度地诱导了1Dx5-N分子间二硫键的共价交联,并在疏水作用协同下促进了1Dx5-N超级分子量聚集体（>>670 kDa）的形成。然而,热处理协同Na2CO3（100 mM）却断裂了1Dx5-N分子间二硫键,显着降低了蛋白表面疏水性,诱导较低分子量蛋白聚集体（44.3-670 kDa）的形成。进一步研究表明,超级分子量聚集体弱化了1Dx5-N降低界面张力的能力,却大大促进了1Dx5-N在空气—水界面上形成蛋白界面膜,这一作用有利于提升面团的持气性能;较低分子量的1Dx5-N聚集体有效地降低了溶液界面张力,同时也弱化了1Dx5-N界面膜层的形成,不利于面团的持气性能。（3）1Dx5-N强化面团结构和加工品质的作用机制。运用粉质仪、流变仪、分子排阻色谱、扫描电镜、还原/非还原型SDS-PAGE、巯基含量测定等技术和方法,研究了1Dx5-N对小麦面团的结构和功能性质影响的作用机制。实验发现,添加1Dx5-N显着增加了面团的吸水率、稳定时间和粘弹性,以及降低了面团的弱化度和损耗角正切值,表明1Dx5-N具有提升面粉加工品质的能力。进一步研究表明,1Dx5-N主要通过二硫键和疏水作用促进了面团内部面筋蛋白聚集体的形成,强化了面筋蛋白网络的组织结构。而且,1Dx5-N的介入使面筋蛋白二级结构发生改变,部分α-helix结构和无规卷曲转变为β-sheet和β-turn结构,为形成更多的HMW-GS聚集体以增强面团强度,提供了结构基础。此外,NaCl能够有效加强1Dx5-N改善面团加工品质的作用效果。（4）1Dx5-N二硫键交联机制及其对蛋白质结构稳定性和面团加工品质的影响。1Dx5-N含有的3个半胱氨酸残基（Cys10、Cys25和Cys40）是麦谷蛋白通过分子间二硫键形成面筋蛋白网络结构的分子基础。运用基因定点突变和胶内酶解辅助高分辨液质联用技术解析了1Dx5-N中半胱氨酸残基的交联方式,并探究了二硫键交联对蛋白结构稳定性和面团加工品质的影响。发现Cys10和Cys40是1Dx5-N参与分子间二硫键交联的活跃位点,同时,Cys40与Cys25形成了分子内二硫键。而且,Cys10和Cys40稳定了1Dx5-N结构,使1Dx5-N维持较高的表面疏水性,从而促进了1Dx5-N聚集体和二硫键的形成。与野生型1Dx5-N及其它突变体相比,将Cys25突变成丝氨酸的突变体C25S有效地参与了面筋蛋白分子间二硫键的交联、促进了面筋蛋白聚集体的形成和改善了面筋蛋白二级结构,从而显着提升了面团稳定时间、增强了面团强度和粘弹性等功能品质。因此,Cys25的突变有利于Cys10和Cys40促进面筋网络的延伸,由此构建了1Dx5-N及其突变体参与面筋蛋白分子间二硫键交联的模型图,解析了不同位点半胱氨酸残基对面筋蛋白网络结构贡献的机制。此外,常温下Na2CO3会诱导麦谷蛋白中半胱氨酸参与β-消除反应。
胡信坤[7]（2017）在《麦类资源谷蛋白基因鉴定及序列分析》文中研究说明小麦种子贮藏蛋白是影响面粉加工品质的主要因素之一,包括麦谷蛋白（Glutenin）和麦醇溶蛋白（Gliadin）两种重要组分。麦谷蛋白分为高分子量谷蛋白（High-molecularweight glutenin subunit,HMW-GS）和低分子量谷蛋白（Low-molecular-weight glutenin subunit,LMW-GS）,二者相互作用形成谷蛋白大聚合体,影响面团弹性。小麦HMW-GS对面粉加工品质起决定作用,其在大麦中的同源蛋白为D-hordein,它们均属于高分子量谷醇溶蛋白（HMW-prolamin）;LMW-GS约占谷蛋白总量的60%,对面筋强度同样起重要作用。因此,研究麦类资源谷蛋白对小麦加工品质遗传改良具有重要意义。本研究对新疆冬小麦地方品种的LMW-GS以及新麦草属和赖草属物种的HMW-prolamin基因进行了研究,获得的主要结果如下:1)根据多样性微阵列技术（Diversity Arrays Technology,DArT）,研究了75份新疆冬小麦地方品种的遗传多样性。利用第一同源群染色体1A、1B和1D的有效DArT数据进行单独和共同聚类,均得到基本一致的聚类图,并将所有材料分为6个类群。根据聚类结果,从中选出15份材料用于LMW-GS基因克隆。利用4对LMW-GS基因特异引物进行PCR扩增,经克隆测序后获得105条序列,除去材料间相同序列后得到88条不同序列。经GenBank数据库比对,从中鉴定出16个嵌合基因,并分为四种类型,即I-IV型。I和II型分别为相同和不同基因位点间的两个基因间发生嵌合;III和IV型各为两个和三个基因位点间的三个基因间发生嵌合。表达基因DM1839-3是两个假基因GluA3-2和GluA3-391嵌合形成的,表明基因嵌合能增加表达LMW-GS数目。聚类分析显示,16个嵌合基因中有9个与来源于Glu-3的已知基因聚在一起,其余7个与所有已知基因差异较大而形成相对独立的分支。2)从新麦草（Ps.juncea）PI 315080获得3个新型D-hordein,即Ns 1.3、Ns 2.6和Ns 2.9。其中,Ns 1.3（<1.5 kb）的开放阅读框短于Ns 2.6/Ns 2.9（>2.5 kb）且不能正常表达,而Ns 2.6和Ns 2.9经细菌原核表达证实为表达基因。与麦类HMW-GS和大麦属D-hordein相比,新麦草D-hordein Ns 2.6/Ns 2.9蛋白与它们的一级结构相似,但分子量比HMW-GS更大、重复区更长并具有更多半胱氨酸（9个）,其N末端比大麦属D-hordein更长,这些特征可能对小麦面粉加工品质遗传改良具有潜在应用价值,也有助于认识小麦族物种间HMW-prolamin基因的进化关系。聚类分析显示,新麦草（Ps.juncea）D-hordein可分为Ns 1.3和Ns 2.6/Ns 2.9两种类型。3)从多枝赖草（Leymus multicaulis）和羊草（L.chinensis）分离到9个（Lmul 1.2、2.4、2.7、1.3-1、1.3-2、1.3-3和Lchi 2.5、1.3-1、1.3-2）新型D-hordein序列。其中,Lmul 1.2、2.4、2.7和Lchi 2.5等4个通过细菌原核表达证实为表达基因,其余5个为假基因。两个赖草物种的4个D-hordein基因的N-末端（116/118个氨基酸残基）比大麦属物种D-hordein的更长（110个氨基酸残基）,其中3个（Lmul 1.2、2.4和2.7）的N-末端为116个氨基酸残基,比新麦草的D-hordein少2个氨基酸残基。Lmul 1.2和Lmul 2.7有1个额外的半胱氨酸,Lmul 1.2因编码区最短而成为最小的D-hordein。聚类分析显示,赖草属物种的9个D-hordein分为两个独立分支,其中来源于赖草属和新麦草属物种的所有1.3型D-hordein聚在一起,而除此以外的来自赖草属、大麦属和新麦草属物种的D-hordein以及赖草属物种的HMW-GS都聚在一起。在包含HMW-GS以及不同物种D-hordein的分支中,赖草属物种的HMW-GS形成介于新麦草属和赖草属物种D-hordein之间的独立分支。这些结果为麦类加工品质改良提供了潜在候选基因,也为认识D-hordein基因在不同小麦族物种间的分布提供了重要信息。
马丽[8]（2017）在《麦谷蛋白亚基近等基因系转育和宁夏小麦谷蛋白亚基鉴定》文中研究说明小麦是我国重要的粮食作物,品质改良是小麦育种的主要任务之一。研究表明,麦谷蛋白亚基的种类及其组成与加工品质密切相关。进一步解析不同麦谷蛋白亚基及其组成的品质效应,是小麦品质改良和加工的基础,而麦谷蛋白亚基近等基因系可以最大限度的消除遗传背景对研究结果的影响,是准确可靠研究各亚基品质效应的理想材料。为此,本研究以黄淮冬麦区和新疆冬春麦区多个大面积推广小麦品种作为轮回亲本,转育麦谷蛋白亚基近等基因系,并对已获得的HMW-GS近等基因系进行初步评价,为麦谷蛋白亚基品质效应研究提供可靠遗传材料。发掘和鉴定新麦谷蛋白亚基,可丰富育种资源多样性,满足不同优质专用小麦品种选育的需求。本研究以宁夏硬粒小麦品种DQM为材料,鉴定其HMW-GS组成;克隆其编码基因;利用生物信息学相关软件分析其核酸序列,预测氨基酸序列的结构特征和遗传进化关系、及蛋白二级结构特征和品质特性。宁夏是我国春小麦的主产区之一,明确该地区小麦品种谷蛋白亚基组成,可为该地区小麦品质育种和生产提供指导。为此,本研究利用相关分子标记,检测98份宁夏小麦品种LMW-GS组成,分析其分布特点。本研究获得以下结果:1.在课题组前期研究的基础上,采用优化的谷蛋白亚基检测方法,在5种遗传背景下共获得回交转育HMW-GS的高代纯系（BC6F3）158份;从农艺性状来看,相同遗传背景下的不同转育系及其轮回亲本之间,没有显着差异;在谷蛋白亚基组成上,不同转育系之间仅有HMW-GS组成的差异,初步认定转育材料为HMW-GS的近等基因系。1Dx5+1Dy10与1Dx2+1Dy12的近等基因系相比,在小偃22、西农2208和花育8号遗传背景下的蛋白质含量、湿面筋含量和沉降值均显着（P<0.05）或极显着（P<0.01）提高3.0%7.9%,在小偃6号遗传背景下蛋白品质参数却均无显着差异,在西农1718遗传背景下只有沉降值显着提高了8.4%（P<0.05）。同时,在8种遗传背景下,还回交转育获得了不同HMW-GS组成的低代转育系材料633份;在3种遗传背景下,又回交转育获得了不同LMW-GS组成的6代转育系材料108份。2.SDS-PAGE鉴定宁夏硬粒小麦品种DQM的HMW-GS组成结果表明,DQM含3个表达的HMW-GS,其电泳迁移率与对照亚基均有所不同,推测DQM可能含有新的HMW-GS类型。克隆了DQM编码HMW-GS基因,获得了3条扩增产物,大小为2352bp、2109 bp和1827 bp,与1Bx14*、1By15*和1Ay基因的相似度分别为99%、99%和97%,分别命名为1Bx14.1、1By15.1和1Ay.1。预测其分别由783、702和606个氨基酸组成,一级结构均由21个氨基酸构成的信号肽、保守的N端、中间重复序列和保守的C端四个结构单元构成,均具有保守的半胱氨酸数目和位置,表明均具有HMW-GS的典型特征。遗传进化分析表明,1Bx14.1、1By15.1和1Ay.1分别与1Bx14*、1By15*和1Ay的亲缘关系最近。利用MALDI-TOF-MS对HMW-GS氨基酸序列的分析证实,1Bx14.1和1By15.1分别与亚基1Bx14*和1By15*匹配度最高,序列覆盖率分别为24%（185aa）和15%（101aa）;匹配的肽段有一半以上分布于亚基的N端和C端保守区。利用SSpro8在线工具对1Bx14.1和1By15.1二级结构预测的结果表明,二者与优质亚基1Bx14和1By15二级结构相似,即具有较高的Hydrogen bonded turn和α-helix含量,推断其可能为优质亚基。3.利用STS分子标记对宁夏98份小麦品种Glu-A3和Glu-B3位点的等位变异组成进行检测和分析。结果表明,宁夏小麦中Glu-A3位点共发现Glu-A3a、Glu-A3b、Glu-A3c、Glu-A3d和Glu-A3e五种等位变异类型,超过一半为Glu-A3c类型（55.1%）;Glu-B3位点共发现Glu-B3a、Glu-B3b、Glu-B3c、GluB3d、Glu-B3f、Glu-B3g、Glu-B3h、Glu-B3i和Glu-B3j八种等位变异,其中约四分之一为Glu-B3j类型（25.5%）。同时,在宁夏不同地区及同一地区不同来源品种间,两个位点等位变异的组合类型和分布比例也存在差异。
陈雪燕[9]（2016）在《小麦及其近缘种属品质相关基因avenin-like b和NAM-B1的研究》文中研究说明小麦作为全球主要粮食作物之一,随着市场需求的变化,人们在追求高产的情况下,对其品质的要求也越来越高。小麦品质是由蛋白质、脂质、淀粉等多种因素共同作用决定的,其中蛋白质的含量、质量以及相互作用尤为重要。小麦储藏蛋白包括麦谷蛋白（glutenin）和麦醇蛋白（gliadin）,其与面筋流变学特性相关,分别决定面团的粘弹性。麦谷蛋白分为高分子量麦谷蛋白（HMW-GS）和低分子量麦谷蛋白（LMW-GS）;醇溶蛋白包括α-、β-、γ-及ω-gliadin等类型。然而大量研究证实,目前研究的传统面筋蛋白仅能解释小麦品质变异的30%-70%。在传统面筋蛋白的氨基酸中半胱氨酸只占一小部分（约2%）,它们可形成分子间二硫键,使蛋白质结构变成超高分子聚合物,为面筋提供黏弹性,而avenin-like蛋白（ALPs）作为一种新发现的小麦贮藏蛋白因其含有高冗余的半胱氨酸残基,引起了研究者们的关注。avenin-like b蛋白含有18-19个半胱氨酸残基,可形成分子内或分子间二硫键,进而影响小麦面粉的加工品质。但在该蛋白的研究上仍然缺乏关于该蛋白基因的染色体定位、等位基因的数量以及等位基因的影响等遗传信息。野生型NAM-B1基因主要来源于野生二粒小麦中,其控制小麦中铁、锌以及籽粒蛋白质含量,加快植株衰老,促进叶片中的营养物质向籽粒中的运输。在栽培小麦中很少被发现,尤其在中国栽培小麦中的分布仍不清楚。本研究主要围绕在小麦品质中影响蛋白质量和含量的avenin-like b和NAM-B1基因进行研究。主要研究结果如下:1.选取中国春和野生二粒小麦Bethlehem代换系的材料L16-3BS进行蛋白质组学研究,获得47个差异蛋白点,2个是和对照品种BL相比较,在材料L16-3BS新出现的蛋白点,35个表达量上调的点,10个表达量下调的点。结合质谱鉴定技术,47个差异蛋白点被鉴定为:球蛋白（Globulin）5个,α-醇溶蛋白（Alpha-gliadin）2个,γ-醇溶蛋白（gamma gliadin）2个,MYB转录因子（MYB transcription）1个,延长因子（elongation factor）1个,磷酸丙糖异构酶（Triosephosphate isomeras）2个,丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpin）7个,苹果酸脱氢酶（malate dehydrogenase）1个,类燕麦蛋白（avenin-like）2个,小麦果聚糖（triticin）3个,超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase）1个,热激蛋白（Heat shock protein）2个,18个未知蛋白（unknown protein）。确定与品质相关基因avenin-like b为候选基因进行深入研究。2、对avenin-like b基因进行克隆、测序分析,结果表明avenin-like b基因全长855-858bp,无内含子,并且与数据库中的中国春参考序列分别匹配在染色体7DS（99%）,4AL（98%）和7AS（97%）上。用中国春缺体四体系进行基因的染色体定位,首次明晰了该基因属于多基因家族,有三位基因位点,并分别位于7A、4A和7D上,依次命名为TaALPb-7A,TaALPb-4A和TaALPb-7D。序列比对分析发现:TaALPb-7A基因有3个等位基因,分别命名为TaALPb-7A1、TaALPb-7A2、TaALPb-7A3。TaALPb-4A基因有4个等位基因,分别命名为TaALPb-4A1、TaALPb-4 A2、TaALPb-4A3、TaALPb-4A4,而在TaALPb-7D位点上没有发现新的变异类型。系统进化分析表明:相同染色体上avenin-like b基因克隆序列分别聚在一起,形成一小类;与已报道的avenin-like蛋白序列在图中构成一大类,彼此间相似度较高,与低分子量谷蛋白（LMW-GS）、高分子量谷蛋白（HMW-GS）亲缘关系较近,与ω-醇溶蛋白亲缘关系最远。3、dd-PCR表达分析:有功能的TaALPb-7A等位基因（TaALPb-7A1、TaALPb-7A2）可正常表达,与内参基因表达拷贝数比例在1:2.54到1:3.36之间。而无功能的TaALPb-7A等位基因（TaALPb-7A3）不能正常表达。4、构建可正常表达的TaALPb-7A1、TaALPb-7A2体外表达载体,进行体外诱导表达、并纯化TaALPb-7A1、TaALPb-7A2目标蛋白,掺粉试验表明,这2种等位基因均对小麦的加工品质有正相关作用。5、针对TaALPb-7A两种类型等位基因（正常表达和沉默）序列开发了ASP功能标记,功能验证表明:正常表达的等位基因和揉混特性中的和面时间（P<0.0443）及8分钟带宽（P<0.0096）呈显着相关。与高分子量麦谷蛋白亚基、籽粒蛋白含量和谷蛋白含量关联分析发现,可表达的TaALPb-7A等位基因及沉默的TaALPb-7A等位基因与这些参数相关性不显着。表明可表达的TaALPb-7A对品质的贡献并未受到这些因素的影响。6、对小麦近缘种属12个基因组（W、E^e、E^b、St、Q、Ns、Ta、U、C、N、V、R）的avenin-like b基因进行研究,结果表明该基因在一些基因组中存在丰富的遗传变异,并且在一些基因组中发现一些新的变异类型,为小麦的品质改良提供了丰富的基因资源和良好的研究基础。7、利用218份中国小麦栽培种,进行NAM-B1等位基因的筛选和分析研究,研究结果表明在参试的中国栽培种中没有发现野生型NAM-B1存在,只有NAM-B1的插入型（24.3%）和缺失型（75.7%）两种类型存在,深入剖析产生这种现象的原因,为今后如何更好利用野生型NAM-B1以及在小麦营养品质改良方面提供理论指导和参考作用。
孙海[10]（2016）在《亲缘种质高分子量麦谷蛋白对小麦品质的影响及基因编码区分子克隆》文中认为小麦贮藏蛋白主要由麦谷蛋白和醇溶蛋白组成,谷蛋白由高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）和低分子量谷蛋白亚基组成（LMW-GS）。虽然HMW-GS只占小麦贮藏蛋白总量的10%,但对小麦品质或面筋质量具有决定性的作用。利用特异麦谷蛋白亚基改良小麦品质是小麦育种的重要手段之一。本研究选用携带不同外缘染色体的小麦材料进行研究,鉴定其HMW-GS组成,分析小麦品质,探讨外缘染色体的HMW-GS导入对于小麦加工品质的影响,同时对外缘染色体的HMW-GS基因编码区进行分子克隆,以明确其影响品质的分子基础,从而为小麦品质改良提供参考依据。主要研究内容及研究结果如下:（1）长穗偃麦草代换系和添加系与普通小麦之间籽粒蛋白含量、湿面筋含量、GMP含量和乳酸SRC,以及面团流变学特性均有显着差异。DS1E/1A的面包总分81.5±0.71,显着大于中国春的52±2.83。除DS1E/1D以外,其他长穗偃麦草代换系和添加系,显着增加了面团的形成时间,峰高峰宽,8分钟带宽和乳酸SRC,从而显着增加了面包体积。不同品质指标相关性研究表明,面包体积与GMP含量、乳酸SRC、峰高、峰宽以及八分钟带宽存在显着性相关,与GMP相关系数最高,为0.938。研究还发现碳酸钠SRC与和面时间、峰高、峰宽和八分钟带宽存在显着负相关。因此在早代育种中可以根据GMP含量、乳酸SRC以及峰高等参数的快速测定准确筛选出适合面包加工品质的材料。（2）克隆了长穗偃麦草1E亚基基因序列,该基因CDS序列全长1512个碱基对,推导的氨基酸序列全长为502个氨基酸残基。基因结构与已发表的HMW-GS亚基基因的结构一致,不含内含子,以信号肽、N-端保守区、中央重复区、C-末端构成。与已克隆的HMW-GC基因序列比对,进化树分析将该基因与其他已登录的长穗偃麦草y型基因和中间偃麦草基因聚在一起,与普通小麦的HMW-GS亚基x或y型基因相似度较低,实验材料中的1E基因为y型高分子量麦谷蛋白亚基。（3）对来源于野生粗山草D组染色体的50个人工合成小麦品系进行品质筛选,发现品质性状间存在广泛的遗传变异。以HPLC微量测定谷蛋白大聚体和麦谷蛋白与醇溶蛋白比值为指标,取最高和最低的各3-4份品系进行进一步品质分析,结果表明SE43、SE63和SE76等3个品系在湿面筋含量、籽粒硬度、乳酸SRC及揉混参数等方面与SE32、SE66、SE75和SE77等品系存在显着差异,前3个品系为属强筋硬质,后4个品系属于弱筋软质。（4）克隆了人工合成小麦Glu-D1位点上HMW-GS的x型和y型亚基基因,分析HMW-GS的基因序列和推导的氨基酸序列,结果表明SE43、SE63和SE76等3个品系的Dy亚基基因序列一致,与SE32、SE66、SE75和SE77等品系的Dy亚基基因序列存在较大差异,基因进化树分析,SE63的Dy亚基与拟斯卑尔脱山羊草（A.speltoides）克隆的Dy亚基基因最近,而与粗山羊草中克隆的Dy亚基基因较远。研究HMW-GS的分子结构与小麦面粉品质之间的联系时发现小麦加工品质产生的差异与HMW-GS基因的分子结构有关系,可能是发生β-转角的重复序列和谷氨酰胺残基数量的差异引起的。本研究比较了人工合成小麦2个亚基（Dx和Dy）的中部重复区域中发生β-转角的序列,结果表明,x-亚基含有的四种重复序列多于y-亚基含有的四种重复序列,这表明HMW-GS的x-型亚基的中央重复区含有更多的β-转角结构,对面团加工品质的影响比Y-型亚基要大,预示它们能使面团具有较强的弹性。比较了 2个亚基含有的谷氨酰胺（Q）的数量及其百分含量,结果显示,Dx亚基含有的谷氨酰胺（Q）的数量和摩尔百分含量均比较高,表明在Dx亚基中部重复区域彼此之间以氢键相结合形成长链的能力较强,Dy亚基含有的酪氨酸（Y）的数量较少,但其百分含量较高,达到6.42%。实验中发现品质性状较好的SE63材料在Dx的中部重复序列发生β-转角的序列数量高于品质较差的小麦材料,同样的结论也出现在谷氨酰胺百分比和酪氨酸百分之上,其中筛选出来的SE63材料的谷氨酰胺和酪氨酸百分比分别高达39.91%和6.29%。
二、高分子量麦谷蛋白14和15亚基的纯化、N-末端序列及部分生化特性研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高分子量麦谷蛋白14和15亚基的纯化、N-末端序列及部分生化特性研究（论文提纲范文）
（1）高大山羊草1Slx2.3*及1Sly16*和小麦1Dy12亚基面粉加工品质效应分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 麦谷蛋白品质效应研究进展 |
| 1.1.1 高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS) |
| 1.1.2 低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS) |
| 1.2 分子标记辅助选择及其在小麦回交转育中的应用 |
| 1.2.1 分子标记的种类 |
| 1.2.2 分子标记辅助选择 |
| 1.2.3 分子标记在小麦回交转育中的应用 |
| 1.3 小麦遗传转化技术在分析HMW-GS功能中的应用 |
| 1.4 HMW-GS突变体创制及其品质效应研究 |
| 1.5 小麦籽粒贮藏蛋白合成与调控相关基因 |
| 1.5.1 蛋白二硫键异构酶 |
| 1.5.2 结合蛋白 |
| 1.5.3 Dof转录因子 |
| 1.5.4 贮藏蛋白激活子 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 1.7 研究方案和技术路线 |
| 第二章 小麦-高大山羊草1S~lL/1BS和1S~lS/1BL易位系分析和易位染色体向优良品种中的转育 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 分子标记 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 农艺性状调查 |
| 2.2.2 面包加工品质分析 |
| 2.2.3 原位杂交 |
| 2.2.4 易位染色体回交转育 |
| 2.2.5 分子标记辅助选择 |
| 2.2.6 小麦籽粒HMW-GS提取和SDS-PAGE分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 小麦-高大山羊草1S~lL/1BS起始易位系农艺性状表现和分子鉴定 |
| 2.3.2 小麦-高大山羊草1S~lL/1BS起始易位系SDS-PAGE鉴定 |
| 2.3.3 小麦-高大山羊草1S~lL/1BS和1S~lS/1BL起始易位系面包加工品质分析 |
| 2.3.4 小麦-高大山羊草易位染色体1S~lL/1BS和1S~lS/1BL向优良小麦品种的回交转育 |
| 2.3.5 1S~lL/1BS和1S~lS/1BL新易位系BC3F4 代加工品质分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 小麦-高大山羊草整臂互补易位系的农艺性状差异 |
| 2.4.2 整臂互补易位系的应用 |
| 2.4.3 小片段易位系获得方法及应用 |
| 2.4.4 小麦-高大山羊草整臂互补易位系在小麦加工品质的效应 |
| 第三章 高大山羊草1S~lx2.3*亚基转基因株系品质效应分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 本章所用引物序列 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 转基因植株检测 |
| 3.2.2 总RNA提取及基因表达分析 |
| 3.2.3 面包和海绵蛋糕加工品质分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 转1S~lx2.3*基因小麦植株检测 |
| 3.3.2 转1S~lx2.3*基因株系纯合 |
| 3.3.3 转1S~lx2.3*基因纯合株系中HMW-GS基因表达分析 |
| 3.3.4 转基因株系中贮藏蛋白合成加工相关基因的表达分析 |
| 3.3.5 转1S~lx2.3*基因纯合株系面包和海绵蛋糕加工品质分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 1S~lx2.3*亚基的面包和海绵蛋糕加工品质效应 |
| 3.4.2 1S~lx2.3*亚基与小麦内源亚基的相互作用 |
| 3.4.3 贮藏蛋白合成加工相关基因的表达 |
| 第四章 小麦无性系变异体AS273中1Dy12亚基沉默机制和品质效应研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 小麦材料 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 本章所用引物序列 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 农艺性状调查 |
| 4.2.2 小麦籽粒HMW-GS提取及SDS-PAGE分析 |
| 4.2.3 基因组DNA提取及1Dy12基因编码序列的扩增 |
| 4.2.4 1Dy12基因全长扩增、测序及序列比对 |
| 4.2.5 总RNA提取及相关基因表达分析 |
| 4.2.6 小麦籽粒透射电镜(TEM)分析 |
| 4.2.7 面粉加工品质分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 无性系变异体AS273中1Dy12 亚基缺失的SDS-PAGE鉴定 |
| 4.3.2 无性系变异体AS273中HMW-GS在籽粒不同发育时期积累情况分析 |
| 4.3.3 不同发育时期籽粒1Dy12基因的表达分析 |
| 4.3.4 AS273中1Dy12基因沉默的分子机制探究 |
| 4.3.5 AS273籽粒中贮藏蛋白合成加工相关基因表达分析 |
| 4.3.6 AS273籽粒发育不同时期蛋白体观察 |
| 4.3.7 AS273主要农艺性状差异 |
| 4.3.8 AS273和KN199面粉品质特性分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 突变体AS273中1Dy12基因属于转录后沉默 |
| 4.4.2 1Dy12基因沉默对贮藏蛋白合成加工相关基因表达的影响 |
| 4.4.3 1Dy12亚基的面粉加工品质效应 |
| 4.4.4 AS273潜在利用价值 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）新收获小麦后熟过程中面筋蛋白聚集特性变化及机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 面筋蛋白的组成与功能特性 |
| 1.2.1 醇溶蛋白与麦谷蛋白 |
| 1.2.2 麦谷蛋白大聚体 |
| 1.2.3 二硫键在面筋聚集中发挥的作用 |
| 1.3 蛋白质二硫键异构酶 |
| 1.3.1 蛋白质二硫键异构酶的结构特征 |
| 1.3.2 蛋白质二硫键异构酶的功能特性 |
| 1.3.3 蛋白质二硫键异构酶与面筋蛋白聚集特性之间的关系研究进展 |
| 1.4 本文研究意义与主要内容 |
| 第二章 新收获小麦后熟过程中面筋聚集特性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 小麦粉的制备 |
| 2.3.2 小麦粉水分含量的测定 |
| 2.3.3 小麦粉面筋聚集特性的测定 |
| 2.4 数据分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 新收获小麦后熟过程中峰值时间(PMT)的变化规律 |
| 2.5.2 新收获小麦后熟过程中峰值扭矩(BEM)的变化规律 |
| 2.5.3 新收获小麦后熟过程中峰值面积(EnMT)的变化规律 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 新收获小麦后熟过程中面筋蛋白组分变化规律研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 小麦粉的制备 |
| 3.3.2 新收获小麦后熟过程中总蛋白、醇溶蛋白、麦谷蛋白及麦谷蛋白大聚体含量的测定 |
| 3.3.3 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体游离巯基含量的测定 |
| 3.3.4 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体分子量分布的测定 |
| 3.4 数据分析 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 新收获小麦后熟过程中各蛋白组分含量的变化 |
| 3.5.2 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体游离巯基含量的变化 |
| 3.5.3 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体分子量分布的变化 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体粒度及结构变化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 小麦粉的制备 |
| 4.3.2 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体粒度分布的测定 |
| 4.3.3 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体二级结构的测定 |
| 4.3.4 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体微观结构的测定 |
| 4.4 数据分析 |
| 4.5 结果与讨论 |
| 4.5.1 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体粒度分布的测定 |
| 4.5.2 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体二级结构的变化 |
| 4.5.3 新收获小麦后熟过程中麦谷蛋白大聚体微观结构的变化 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 新收获小麦后熟过程中面筋聚集特性变化的机理研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 材料与试剂 |
| 5.2.2 仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 小麦粉的制备 |
| 5.3.2 蛋白质二硫键异构酶的提取 |
| 5.3.3 新收获小麦后熟过程中基因表达变化研究 |
| 5.3.4 新收获小麦后熟过程中蛋白质二硫键异构酶活性的测定 |
| 5.3.5 新收获小麦后熟过程中蛋白质二硫键异构酶二级结构的测定 |
| 5.4 数据分析 |
| 5.5 结果与讨论 |
| 5.5.1 新收获小麦后熟过程中蛋白质二硫键异构酶基因表达的变化 |
| 5.5.2 新收获小麦后熟过程中蛋白质二硫键异构酶活性的变化 |
| 5.5.3 新收获小麦后熟过程中蛋白质二硫键异构酶二级结构的变化 |
| 5.6 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）中国部分普通小麦核心种质HMW-GS的特点及其与若干品质性状的关联分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 小麦籽粒贮藏蛋白的组成和分类 |
| 1.2 高分子量麦谷蛋白亚基的研究进展 |
| 1.2.1 小麦HMW-GS编码基因的定位和组成 |
| 1.2.2 高分子量麦谷蛋白亚基的命名 |
| 1.2.3 高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)基因的克隆和结构 |
| 1.2.4 普通小麦HMW-GS的分子结构 |
| 1.2.5 高分子量麦谷蛋白亚基的等位变异 |
| 1.2.6 小麦高分子量麦谷蛋白亚基的鉴定方法 |
| 1.2.7 普通小麦的HMW-GS多样性研究进展 |
| 1.2.8 高分子量麦谷蛋白亚基基因在小麦品质改良育种中的应用 |
| 1.3 高分子量麦谷蛋白亚基与小麦品质关系 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小麦籽粒蛋白质提取 |
| 2.2.2 SDS-PAGE电泳方法 |
| 2.2.3 小麦品质测定方法 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 299份小麦品种(系)的HMW-GS组成 |
| 3.2 299份小麦品种(系)的HMW-GS组合类型 |
| 3.3 299份小麦品种(系)的HMW-GS等位基因组合的聚类分析 |
| 3.4 中国部分核心种质小麦品种(系)的品质性状特点及相关分析 |
| 3.4.1 中国部分核心种质小麦品种(系)品质性状特点 |
| 3.4.2 中国部分核心种质小麦品种(系)品质性状间的相关性分析 |
| 3.5 中国部分核心种质小麦HMW-GS亚基类型及亚基组合与部分品质性状的关系 |
| 3.5.1 中国部分核心种质小麦HMW-GS的亚基变异类型的部分品质性状 |
| 3.5.2 中国部分核心种质小麦不同HMW-GS亚基类型与部分品质性状的关系 |
| 3.5.3 中国部分核心种质小麦不同HMW-GS组合与部分品质性状的关系 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中国部分核心种质资源小麦HMW-GS组成特点及其遗传多样性 |
| 4.2 小麦HMW-GS特点与若干品质性状的关系 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）野生二粒小麦面粉加工品质相关性状的全基因组关联分析及高分子量谷蛋白亚基基因1Ax1的克隆（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写词(Abbreviations) |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 野生二粒小麦的相关研究及其进展 |
| 1.1.1 野生二粒小麦的形态特点与分布 |
| 1.1.2 野生二粒小麦全基因组的研究进展 |
| 1.1.3 野生二粒小麦优质性状及育种应用 |
| 1.1.4 小麦贮藏蛋白的组成和分类 |
| 1.1.5 种子储藏蛋白与品质性状的关系 |
| 1.1.6 小麦品质性状定位的研究进展 |
| 1.2 全基因组关联分析的研究进展 |
| 1.2.1 全基因组关联分析基本原理 |
| 1.2.2 全基因组关联分析的方法与策略 |
| 1.2.3 全基因组关联分析的优势与不足 |
| 1.2.4 全基因组关联分析的应用 |
| 1.3 高分子量谷蛋白的研究进展 |
| 1.3.1 HMW-GS基因的分子结构特点 |
| 1.3.2 HMW-GS分子标记开发 |
| 1.3.3 HMW-GS与小麦面包品质的关系 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 第二章 野生二粒小麦面粉加工品质相关性状的关联分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 植物DNA的提取 |
| 2.2.2 基因组DNA浓度及纯度的鉴定 |
| 2.2.3 试验设计及性状调查 |
| 2.2.4 面粉加工品质性状统计分析 |
| 2.2.5 小麦55K SNP基因芯片基因分型 |
| 2.2.6 群体结构分析 |
| 2.2.7 全基因组关联分析 |
| 2.2.8 候选基因的鉴定 |
| 2.3 结果分析 |
| 2.3.1 野生二粒小麦面粉加工品质的表型变异分析 |
| 2.3.2 面粉加工品质性状与环境的互作关系 |
| 2.3.3 面粉加工品质性状相关性分析 |
| 2.3.4 小麦55K芯片A、B染色体位点的多样性 |
| 2.3.5 基于小麦55K芯片的121份野生二粒小麦群体结构分析 |
| 2.3.6 面粉品质相关性状的全基因组关联分析 |
| 2.3.7 显着关联的SNP位点预测的候选基因 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 品质性状相关性分析 |
| 2.4.2 面粉加工品质相关的SNP位点分析 |
| 2.4.3 候选基因功能分析 |
| 2.4.4 GWAS分析影响因素 |
| 第三章 野生二粒小麦J129-1Ax1亚基基因克隆与分析 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 实验试剂与仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 植物DNA的提取和纯化 |
| 3.2.2 HMW-GS基因的PCR扩增与回收 |
| 3.2.3 PCR产物T载克隆 |
| 3.2.4 定向缺失制备亚克隆 |
| 3.2.5 DNA测序与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 HMW-GS基因的PCR扩增 |
| 3.3.2 HMW-GS基因的亚克隆 |
| 3.3.3 野生二粒小麦J129-1Ax1基因的序列特征 |
| 3.3.4 野生二粒小麦J129-1Ax1基因与已知Ax亚基氨基酸序列的比较 |
| 3.3.5 野生二粒小麦J129-1Ax1基因的系统进化分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 高分子谷蛋白亚基克隆方法 |
| 3.4.2 高分子量谷蛋白亚基对小麦品质改良的应用 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）野生二粒小麦y-型HMW-GS基因渗入普通小麦的遗传特性及其对品质改良的潜在价值（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 小麦的起源及演化 |
| 1.1.1 小麦在我国的栽培历史 |
| 1.1.2 远缘杂交在小麦育种中的利用 |
| 1.2 野生二粒小麦是普通小麦育种的重要种质资源 |
| 1.2.1 野生二粒小麦的地理分布及其与普通小麦的亲缘关系 |
| 1.2.2 野生二粒小麦的主要生物学性状 |
| 1.2.3 野生二粒小麦有益性状及其在普通小麦中的应用研究 |
| 1.3 小麦高分子量谷蛋白与面粉的加工品质 |
| 1.3.1 小麦种子储藏蛋白的分类 |
| 1.3.2 谷蛋白分类 |
| 1.3.3 HMW-GS蛋白的分离 |
| 1.3.4 HMW-GS的染色体定位和等位变异 |
| 1.3.5 HMW-GS基因的结构特征 |
| 1.3.6 HMW-GS基因的分子克隆 |
| 1.3.7 HMW-GS与品质的关系 |
| 1.3.8 HMW-GS基因沉默研究概况 |
| 1.3.9 1Ay亚基基因研究进展 |
| 1.3.10 1By亚基基因研究进展 |
| 1.4 本研究立题依据和主要研究内容 |
| 第二章 来自野生二粒小麦的活性1Ay基因及其在普通小麦中稳定表达的分子鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 种子全蛋白提取 |
| 2.2.3 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 |
| 2.2.5 基因组DNA的 PCR扩增 |
| 2.2.6 PCR产物T-载体克隆 |
| 2.2.7 热击感受态的制备 |
| 2.2.8 转化大肠杆菌 |
| 2.2.9 阳性克隆筛选 |
| 2.2.10 提取质粒 |
| 2.2.11 定向缺失制备亚克隆 |
| 2.2.12 DNA序列测定与分析 |
| 2.2.13 克隆基因的体外表达 |
| 2.2.14 序列系统进化分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 野生二粒小麦D97 及后代品系TaAy7-40的HMW-GS组成 |
| 2.3.2 野生二粒小麦D97、普通小麦CN16 及其后代品系TaAy7-40中1Ay基因的分子鉴定 |
| 2.3.3 野生二粒小麦D97的1Ay基因编码区的结构特征 |
| 2.3.4 后代品系与亲本1Ay基因的序列比对分析 |
| 2.3.5 三个克隆的Glu-1Ay等位基因的系统发育分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 TaAy7-40和D97的1Ay等位基因的鉴定 |
| 2.4.2 1Ay序列的变异 |
| 2.4.3 野生二粒小麦1Ay基因成功地被转移并整合入普通小麦 |
| 2.4.4 野生二粒小麦有效地丰富普通小麦Glu-1Ay等位基因的遗传多样性 |
| 第三章 野生二粒小麦Glu-1By等位基因在普通小麦中稳定表达的分子特性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.2.1 谷蛋白提取和SDS-PAGE分析 |
| 3.2.2.2 DNA提取和PCR扩增 |
| 3.2.2.3 PCR片段的克隆与序列分析 |
| 3.2.2.4 序列比对和聚类分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 后代品系TaAy7-40的1By亚基的SDS-PAGE分析 |
| 3.3.2 1By基因的分子鉴定 |
| 3.3.3 后代品系和亲本1By基因的序列比对分析 |
| 3.3.4 后代品系和双亲1By基因的系统进化分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 TaAy7-40和CN16的1By等位基因的鉴定 |
| 3.4.2 野生二粒小麦有效的丰富普通小麦Glu-B1-2 等位基因的遗传多样性 |
| 第四章 野生二粒小麦y-型HMW-GS对普通小麦加工品质的潜在利用价值 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 根尖染色体观察 |
| 4.2.2.2 面粉加工品质测定及参数分析 |
| 4.2.2.2.1 润麦并制粉 |
| 4.2.2.2.2 蛋白质含量的测定 |
| 4.2.2.2.3 面筋含量的测定 |
| 4.2.2.2.4 沉降值的测定 |
| 4.2.2.2.5 粉质参数的测定 |
| 4.2.2.3 统计分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 杂交后代TaAy7-40 的表型和核型性状分析 |
| 4.3.2 后代TaAy7-40 加工品质比较 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 稳定品系TaAy7-40 中的活性1Ay基因在普通小麦间的稳定传递及其对品质的改良潜能 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 谷蛋白提取和SDS-PAGE分析 |
| 5.2.3 DNA提取和PCR扩增 |
| 5.2.4 PCR片段的克隆与序列分析 |
| 5.2.5 序列比对和聚类分析 |
| 5.2.6 农艺性状测定 |
| 5.2.7 面粉加工品质测定及参数分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 杂种F_1 田间植株 |
| 5.3.2 SDS-PAGE分析 |
| 5.3.3 F_4 代姊妹系和父本N9的1Ay基因的分子鉴定 |
| 5.3.3.1 1Ay序列的分子克隆 |
| 5.3.3.2 1Ay的核苷酸序列分析 |
| 5.3.3.3 1Ay的氨基酸序列分析 |
| 5.3.4 系统进化分析 |
| 5.3.5 F_5 代稳定株系及其双亲的田间农艺性状 |
| 5.3.6 F_5 代稳定株系及其双亲的加工品质分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 1Ay基因在普通小麦中的遗传稳定性 |
| 5.4.2 新的1Ay等位基因的鉴定及其等位变异性 |
| 5.4.3 Glu-A1位点的HMW-GS对小麦加工品质的贡献 |
| 本研究的主要创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间已发表的论文和完成的专利 |
（6）高分子量麦谷蛋白亚基N-末端结构域对面粉加工品质的贡献及作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 面筋蛋白概述 |
| 1.2 小麦高分子量麦谷蛋白亚基 |
| 1.2.1 HMW-GS表达翻译位点 |
| 1.2.2 HMW-GS与小麦加工品质间的关系 |
| 1.3 小麦HMW-GS的氨基酸序列及分子结构 |
| 1.3.1 HMW-GS的氨基酸组成 |
| 1.3.2 HMW-GS的分子结构 |
| 1.4 HMW-GS相互作用及对面筋蛋白品质的贡献 |
| 1.4.1 HMW-GS间的共价交联作用 |
| 1.4.2 HMW-GS间的非共价作用 |
| 1.4.3 HMW-GS功能结构域对面粉加工品质的贡献作用 |
| 1.5 本课题的研究意义及内容 |
| 1.5.1 研究背景和意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究技术路线 |
| 参考文献 |
| 第二章 重组1Dx5-N聚集行为研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 实验菌株与质粒 |
| 2.2.2 实验材料 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 1Dx5-N的克隆、表达及分离纯化 |
| 2.3.2 实验样品的制备 |
| 2.3.3 蛋白电泳 |
| 2.3.4 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS) |
| 2.3.5 内源荧光测量 |
| 2.3.6 分子排阻色谱(SEC) |
| 2.3.7 圆二色光谱(CD)和动态光散色(DLS) |
| 2.3.8 数据分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 1Dx5-N的可溶性分析 |
| 2.4.2 疏水作用和二硫键作用力对1Dx5-N聚集体形成的影响 |
| 2.4.3 食用盐NaCl和Na_2CO_3对1Dx5-N聚集体形成的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 热处理协同食用盐诱导1Dx5-N聚集及其对界面性质的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验菌株与质粒 |
| 3.2.2 实验材料 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 1Dx5-N的表达及分离纯化 |
| 3.3.2 实验流程 |
| 3.3.3 目的蛋白溶解度和浊度测量 |
| 3.3.4 目的蛋白表面疏水性(H_0)测定 |
| 3.3.5 圆二色光谱(CD)和动态光散色测定 |
| 3.3.6 分子排阻色谱(SE-HPLC) |
| 3.3.7 总自由巯基含量的测定 |
| 3.3.8 还原型SDS-PAGE和非还原型SDS-PAGE |
| 3.3.9 原子力显微镜(AFM)测试 |
| 3.3.10 氧化还原电位测定(ζ-电位) |
| 3.3.11 表面张力测定 |
| 3.3.12 界面流变测定 |
| 3.3.13 数据分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 热处理协同NaCl和Na_2CO_3对1Dx5-N溶解度和浊度的影响 |
| 3.4.2 热处理协同NaCl和Na_2CO_3对1Dx5-N二级结构和表面疏水性(H0)的影响 |
| 3.4.3 热处理协同NaCl和Na_2CO_3对1Dx5-N粒径和分子量的影响 |
| 3.4.4 热处理协同NaCl和Na_2CO_3诱导1Dx5-N分子间二硫键交联 |
| 3.4.5 热处理协同NaCl和Na_2CO_3对1Dx5-N界面性质的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 1Dx5-N贡献面团结构和加工品质的作用机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验菌株与质粒 |
| 4.2.2 实验材料 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 1Dx5-N表达及分离纯化 |
| 4.3.2 面团和面筋蛋白样品的制备 |
| 4.3.3 面粉粉质实验 |
| 4.3.4 1Dx5-N对面团流变性能的影响 |
| 4.3.5 分子排阻色谱(SEC) |
| 4.3.6 还原型和非还原型SDS-PAGE |
| 4.3.7 总自由巯基(Totalfreesulfhydryl)含量的测定 |
| 4.3.8 扫描电镜(SEM) |
| 4.3.9 傅里叶转换红外光谱(FT-IR) |
| 4.3.10 数据分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 1Dx5-N对面团粉质特性参数和流变学性能的影响 |
| 4.4.2 1Dx5-N对面筋蛋白聚集体和二硫键形成的影响 |
| 4.4.3 1Dx5-N对面团微观结构以及面筋蛋白二级结构的影响 |
| 4.4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 解析1Dx5-N半胱氨酸的交联机制及其对蛋白结构稳定性的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与仪器 |
| 5.2.1 实验菌株与质粒 |
| 5.2.2 实验材料 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 1Dx5-N的基因定点突变 |
| 5.3.3 实验样品的制备 |
| 5.3.4 蛋白胶内酶解辅助高分辨液质(LC-MS/MS)分析 |
| 5.3.5 还原型SDS-PAGE和非还原型SDS-PAGE |
| 5.3.6 圆二色光谱和内源荧光光谱 |
| 5.3.7 蛋白表面疏水性(H0)测量 |
| 5.3.8 蛋白分子排阻色谱 |
| 5.3.9 原子力显微镜(AFM) |
| 5.3.10 数据分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 基因定点突变和胶内酶解辅助高分辨质谱技术解析1Dx5-N二硫键的交联方式 |
| 5.4.2 半胱氨酸残基对1Dx5-N结构稳定性和表面疏水性的影响 |
| 5.4.3 1Dx5-N中半胱氨酸残基参与的其它类型共价交联反应 |
| 5.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 1Dx5-N不同位点半胱氨酸对面团结构和加工品质的影响 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与仪器 |
| 6.2.1 实验菌株与质粒 |
| 6.2.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 1Dx5-N表达及分离纯化 |
| 6.3.2 面团和面筋蛋白样品的制备 |
| 6.3.3 面团搅混实验 |
| 6.3.4 1Dx5-N及其突变体对面团流变性能的影响 |
| 6.3.5 分子排阻色谱(SEC) |
| 6.3.6 还原型SDS-PAGE和非还原型SDS-PAGE |
| 6.3.7 扫描电镜(SEM) |
| 6.3.8 傅里叶转换红外光谱(FT-IR) |
| 6.3.9 数据分析 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 1Dx5-N及其突变体对面团粉质特性参数和流变学性能的影响.. |
| 6.4.2 1Dx5-N及其突变体对面筋蛋白聚集体和二硫键形成的影响 |
| 6.4.3 1Dx5-N及其突变体对面团微观结构和面筋蛋白二级结构的影响 |
| 6.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、论文的创新点 |
| 三、展望 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）麦类资源谷蛋白基因鉴定及序列分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 LMW-GS研究概述 |
| 1.1.1 LMW-GS分类 |
| 1.1.2 LMW-GS染色体定位 |
| 1.1.3 LMW-GS结构特点 |
| 1.1.4 LMW-GS多样性 |
| 1.2 麦类HMW-prolamin研究概述 |
| 1.3 立题依据 |
| 第二章 新疆冬小麦地方品种LMW-GS基因分子克隆及序列分析 |
| 前言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 供试材料 |
| 2.1.2 基因组DNA提取 |
| 2.1.3 DArT标记分析和材料筛选 |
| 2.1.4 PCR扩增LMW-GS基因 |
| 2.1.5 PCR产物回收克隆和测序 |
| 2.1.6 序列和系统进化分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 DArT分析及材料筛选结果 |
| 2.2.2 扩增LMW-GS |
| 2.2.3 核酸和氨基酸序列分析 |
| 2.2.4 聚类分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 新麦草(Ps.juncea)HMW-prolamin基因鉴定及序列分析 |
| 前言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 供试材料 |
| 3.1.2 谷蛋白提取和分析 |
| 3.1.3 引物设计与DNA提取 |
| 3.1.4 PCR扩增 |
| 3.1.5 PCR回收产物克隆 |
| 3.1.6 PCR扩增N-和C-末端 |
| 3.1.7 原核表达分析 |
| 3.1.8 系统进化分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 SDS-PAGE分析 |
| 3.2.2 扩增HMW-prolamin编码区 |
| 3.2.3 氨基酸序列分析 |
| 3.2.4 D-hordeinN-和C-末端扩增 |
| 3.2.5 Ns2.6和Ns2.9的原核表达 |
| 3.2.6 聚类分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 多枝赖草(L.multicaulis)和羊草(L.chinensis)D-hordein基因鉴定 |
| 前言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 供试材料 |
| 4.1.2 谷蛋白提取和分析 |
| 4.1.3 基因组DNA提取 |
| 4.1.4 PCR扩增 |
| 4.1.5 原核表达分析 |
| 4.1.6 系统进化分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 SDS-PAGE分析 |
| 4.2.2 PCR扩增和序列分析 |
| 4.2.3 D-hordein的原核表达 |
| 4.2.4 聚类分析 |
| 4.3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 资助来源 |
| 作者简历 |
（8）麦谷蛋白亚基近等基因系转育和宁夏小麦谷蛋白亚基鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 HMW-GS研究概况 |
| 1.1.1 HMW-GS的命名 |
| 1.1.2 HMW-GS的结构特征 |
| 1.1.3 HMW-GS的鉴定方法 |
| 1.1.4 HMW-GS的品质效应 |
| 1.2 LMW-GS研究概况 |
| 1.2.1 LMW-GS的命名 |
| 1.2.2 LMW-GS的鉴定方法 |
| 1.2.3 LMW-GS的品质效应 |
| 1.3 本研究的立题依据 |
| 第二章 谷蛋白亚基近等基因系转育 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 转育谷蛋白亚基近等基因系的亲本材料 |
| 2.1.2 后代材料HMW-GS的 SDS-PAGE鉴定 |
| 2.1.3 后代材料麦谷蛋白亚基的分子标记鉴定 |
| 2.1.4 HMW-GS回交转育高代纯系的鉴定与评价 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 HMW-GS回交转育高代纯系的评价与分析 |
| 2.2.2 已获得的回交低代HMW-GS转育系 |
| 2.2.3 已获得的回交高代LMW-GS转育系 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 宁夏硬粒小麦品种DQM的 HMW-GS鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 HMW-GS的 SDS-PAGE鉴定 |
| 3.1.3 目的基因的扩增与片段回收 |
| 3.1.4 目的片段的连接和转化 |
| 3.1.5 阳性克隆的鉴定和测序 |
| 3.1.6 HMW-GS基因序列分析 |
| 3.1.7 质谱鉴定目的亚基 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 HMW-GS的 SDS-PAGE鉴定 |
| 3.2.2 HMW-GS基因的克隆 |
| 3.2.3 目的基因的核酸序列分析 |
| 3.2.4 氨基酸序列预测与分析 |
| 3.2.5 系统进化分析 |
| 3.2.6 MALDI-TOF-MS分析 |
| 3.2.7 HMW-GS二级结构预测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 宁夏小麦LMW-GS组成鉴定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 基因组DNA的提取 |
| 4.1.3 LMW-GS的检测 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 Glu-A3位点等位变异的分子标记检测 |
| 4.2.2 Glu-B3位点等位变异的分子标记检测 |
| 4.2.3 Glu-A3和Glu-B3 位点的等位变异及其组成分布 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）小麦及其近缘种属品质相关基因avenin-like b和NAM-B1的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 小麦品质研究现状 |
| 1.1.1 国际小麦品质的研究 |
| 1.1.2 我国小麦品质的研究 |
| 1.2 小麦的品质性状 |
| 1.3 影响小麦品质性状的因素 |
| 1.4 贮藏蛋白的分类及研究现状 |
| 1.4.1 麦谷蛋白的研究 |
| 1.4.2 醇溶蛋白的研究 |
| 1.5 小麦贮藏蛋白的研究方法 |
| 1.6 avenin-like基因的研究现状 |
| 1.6.1 avenin-like蛋白（基因）在小麦中的研究现状 |
| 1.6.2 avenin-like b在小麦近缘种属中的研究现状 |
| 1.7 小麦及其近缘植物与品质相关的研究 |
| 1.7.1 小麦以及近缘植物分类 |
| 1.7.2 高分子量麦谷蛋白在小麦近缘种属的相关研究 |
| 1.7.3 低分子量麦谷蛋白在小麦近缘种属中的相关研究 |
| 1.7.4 小麦近缘种醇溶蛋白的研究 |
| 1.8 NAC转录因子的研究 |
| 1.8.1 NAC转录因子的发现及其家族成员 |
| 1.8.2 NAC转录因子的结构特点及其分类 |
| 1.8.3 NAC基因的功能与作用 |
| 1.8.4 NAC基因在小麦及其近缘种属中的研究 |
| 1.9 本研究的内容及技术路线 |
| 1.9.1 本研究的内容 |
| 1.9.2 本研究的技术路线 |
| 第二章 栽培小麦中Avenin-like b基因的研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 种子全蛋白提取 |
| 2.2.2 双向凝胶电泳 |
| 2.2.3 候选基因的克隆 |
| 2.2.4 PCR扩增、检测、回收和测序 |
| 2.2.5 基因定位和克隆测序 |
| 2.2.6 droplet digital PCR（ddPCR） |
| 2.2.7 序列多态性分析和功能标记开发、验证 |
| 2.2.8 高分子量麦谷蛋白电泳 |
| 2.2.9 品质测定 |
| 2.2.10 功能验证 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 蛋白质组学的分离与鉴定 |
| 2.3.2 目的蛋白（基因）的确定 |
| 2.3.3 目的基因的扩增和测序 |
| 2.3.4 序列分析和基因定位 |
| 2.3.5 不同染色体上的克隆和序列多态性分析 |
| 2.3.6 TaALPb-7A两种类型等位基因表达水平比较与分析 |
| 2.3.7 功能标记开发和验证 |
| 2.3.8 系统进化关系分析 |
| 2.3.9 高分子量麦谷蛋白亚基鉴定和品质测定 |
| 2.3.10 诱导蛋白表达载体的构建 |
| 2.3.11 IPTG诱导融合蛋白的表达及检测 |
| 2.3.12 蛋白纯化 |
| 2.3.13 重组蛋白的品质效应分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 小麦近缘种属中Avenin-like b基因的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 avenin-like b基因克隆 |
| 3.2.2 PCR扩増 |
| 3.2.3 PCR产物检测、回收、转化和测序 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 扩增结果 |
| 3.3.2 7D染色体的结果分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 中国栽培种中NAM-B1等位基因的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 基因克隆 |
| 4.2.2 引物设计 |
| 4.2.3 PCR扩増、克隆、测序 |
| 4.2.4 PCR产物检测、回收、转化、测序 |
| 4.2.5 基因序列比对分析 |
| 4.2.6 总RNA的提取 |
| 4.2.7 RNA完整性和浓度检测 |
| 4.2.8 cDNA的合成 |
| 4.2.9 RT-PCR扩増 |
| 4.2.10 RT-PCR产物检测、回收、转化、测序 |
| 4.2.11 c DNA序列的比对分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 NAM-B1等位基因的筛选和分布 |
| 4.3.2 53 份栽培种的核苷酸序列分析 |
| 4.3.3 DNA和cDNA序列的比较分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 5.1 本研究主要结论 |
| 5.2 本研究的创新点 |
| 5.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）亲缘种质高分子量麦谷蛋白对小麦品质的影响及基因编码区分子克隆（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 小麦概述 |
| 1.2 小麦及其近缘物种 |
| 1.2.1 栽培小麦种质 |
| 1.2.2 小麦近缘物种 |
| 1.2.3 外源基因向小麦中的导入 |
| 1.3 小麦高分子量麦谷蛋白与品质的关系 |
| 1.3.1 小麦品质 |
| 1.3.2 高分子量谷蛋白亚基 |
| 1.3.3 溶剂保持力和面筋 |
| 1.3.4 谷蛋白大聚体(GMP)和小麦籽粒加工品质的关系 |
| 1.4 小麦高分子量麦谷蛋白核苷酸序列研究进展 |
| 1.4.1 高分子量谷蛋白亚基基因的分子结构 |
| 1.4.2 粗山羊草1D高分子量谷蛋白亚基基因研究进展 |
| 1.5 育种取得的成就及品质育种中的问题 |
| 1.6 本研究的意义与目的 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 小麦高分子量麦谷蛋白亚基的SDS-PAGE鉴定分析 |
| 2.2.2 小麦高分子量谷蛋白大聚体(GMP)的液相色谱测定 |
| 2.2.3 小麦品质相关性的测定 |
| 2.2.4 小麦高分子量麦谷蛋白相关基因的测序 |
| 2.2.5 氨基酸序列比较与分子进化分析 |
| 2.3 统计分析 |
| 第三章 长穗偃麦草-中国春代换系及添加系对品质的影响及其HMW-GS基因克隆 |
| 3.1 长穗偃麦草在普通小麦背景的代换系和添加系 |
| 3.1.1 长穗偃麦草1E高分子量麦谷蛋白亚基基因在普通小麦背景中的表达 |
| 3.1.2 扩增长穗偃麦草代换系和添加系中基因组中高分子量麦谷蛋白亚基的编码基因 |
| 3.2 长穗偃麦草代换系和添加系品质性状分析 |
| 3.2.1 长穗偃麦草代换系和添加系对籽粒品质性状的影响 |
| 3.2.2 长穗偃麦草代换系和添加系对溶剂保持力的影响 |
| 3.2.3 长穗偃麦草代换系和添加系对面团流变学特性和面包加工品质的影响 |
| 3.2.4 长穗偃麦草代换系和添加系品质关联分析 |
| 3.3 长穗偃麦草中1E亚基基因的序列特征及其分子进化树 |
| 3.3.1 长穗偃麦草1E的序列特征 |
| 3.3.2 长穗偃麦草1E亚基基因的系统进化树分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 长穗偃麦草代换系和添加系对于小麦品质的影响 |
| 3.4.2 长穗偃麦草1E高分子量麦谷蛋白亚基序列分析和系统进化树分析 |
| 第四章 人工合成小麦对于品质的影响及其HMW-GS基因克隆 |
| 4.1 人工合成小麦亲缘D组高分子量谷蛋白亚基组成分析 |
| 4.1.1 人工合成小麦亲缘高分子量麦谷蛋白亚基的表达情况 |
| 4.1.2 利用PCR扩增人工合成小麦亲缘高分子量麦谷蛋白亚基的编码基因 |
| 4.2 人工合成小麦品质性状分析 |
| 4.2.1 不同亲缘种质的人工合成小麦对籽粒品质性状的影响 |
| 4.2.2 不同亲缘种质的人工合成小麦对溶剂保持力的影响 |
| 4.2.3 不同亲缘种质的人工合成小麦对面团流变学特性的影响 |
| 4.3 高分子量谷蛋白亚基克隆和测序分析 |
| 4.3.1 人工合成小麦Dy序列特征 |
| 4.3.2 Dy32、Dy63、Dy66、Dy75和Dy77的氨基酸序列比较 |
| 4.3.3 人工合成小麦Dy亚基基因的系统进化树分析 |
| 4.3.4 人工合成小麦Dx序列特征分析 |
| 4.3.5 Dx32、Dx63、Dx66、Dx75和Dx77氨基酸序列比较 |
| 4.3.6 人工合成小麦Dx亚基基因的系统进化树分析 |
| 4.3.7 人工合成小麦Dx和Dy序列对比 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 人工合成小麦品质与高分子量麦谷蛋白基因的关系 |
| 全文结论 |
| 5.1 长穗偃麦草1E对于小麦品质的影响分析 |
| 5.2 粗山羊草DX和DY亚基与小麦品质的分析 |
| 5.3 本研究的不足及其创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、高分子量麦谷蛋白14和15亚基的纯化、N-末端序列及部分生化特性研究（论文参考文献）
- [1]高大山羊草1Slx2.3*及1Sly16*和小麦1Dy12亚基面粉加工品质效应分析[D]. 陈海强. 中国农业科学院, 2020
- [2]新收获小麦后熟过程中面筋蛋白聚集特性变化及机理研究[D]. 耿瑞蝶. 河南工业大学, 2020(01)
- [3]中国部分普通小麦核心种质HMW-GS的特点及其与若干品质性状的关联分析[D]. 郝浩楠. 华中农业大学, 2019(02)
- [4]野生二粒小麦面粉加工品质相关性状的全基因组关联分析及高分子量谷蛋白亚基基因1Ax1的克隆[D]. 张灿灿. 河南大学, 2019(01)
- [5]野生二粒小麦y-型HMW-GS基因渗入普通小麦的遗传特性及其对品质改良的潜在价值[D]. 王真真. 四川农业大学, 2018
- [6]高分子量麦谷蛋白亚基N-末端结构域对面粉加工品质的贡献及作用机制[D]. 王敬敬. 华南理工大学, 2018(12)
- [7]麦类资源谷蛋白基因鉴定及序列分析[D]. 胡信坤. 四川农业大学, 2017(03)
- [8]麦谷蛋白亚基近等基因系转育和宁夏小麦谷蛋白亚基鉴定[D]. 马丽. 西北农林科技大学, 2017(01)
- [9]小麦及其近缘种属品质相关基因avenin-like b和NAM-B1的研究[D]. 陈雪燕. 西北农林科技大学, 2016(11)
- [10]亲缘种质高分子量麦谷蛋白对小麦品质的影响及基因编码区分子克隆[D]. 孙海. 南京农业大学, 2016(04)